ВЫДЕЛЕНИЕ СУММАРНОГО БЕЛКА

Выделение суммарных белков из сухого растительного материала. Взвешивают на аналитических весах 0,3 г размолотых до состояния муки сухих семядолей бобовых или 0,8... 1 г зерновок, полученных после прорастания. Навеску помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 50 мл боратного буфера с pH 10, содержащего 0,2 % бисульфита натрия и пять-шесть капель октилового спирта. Колбу тщательно закрывают пробкой и оставляют на 1 ч при комнатной температуре, чтобы сухой материал впитал в себя буфер. Затем колбу помещают в ротатор. [c.176]

ВЫДЕЛЕНИЕ СУММАРНОГО БЕЛКА [c.50]

Выделение суммарных белков из свеоюего растительного материала. Помещают в фарфоровую ступку 0,5 г сырых семядолей проросших семян зернобобовых (люпин, горох, фасоль) или 1 г зерновок пщеницы, ржи (без корешков и побегов). Добавляют небольшое количество промытого и прокаленного кварцевого песка и растирают с 40 мл боратного буфера (pH 10), в который добавлено 0,2 % бисульфита натрия и несколько капель октилового спирта. Затем количественно переносят содержимое в два-три приема в коническую колбу на 100 мл. Ступку и пестик дважды ополаскивают небольшим количеством (по 5 мл) боратного буфера, промывные воды также сливают в колбу. Общий объем раствора в колбе должен составлять, 50 мл. [c.176]

Выделение суммарных белков. Для выделения всех белковых веществ используются щелочные растворы, з которых подавляющее большинство белков довольно хорошо растворимо. Способы экстракции белков из вегетативных органов и из семян несколько различаются. [c.46]

При выделении суммарных белков из семян растений семена как можно тоньше размалывают, так как от величины помола в значительной степени зависит полнота извлечения белков. Если семена содержали повышенное количество жира или много пигментов, то для удаления этих веществ муку экстрагируют ацетоном и высушивают в вакуум-эксикаторе при комнатной температуре. [c.48]

При выделении ДНК из растений основными задачами являются устранение возможности ее разрушения ферментами и другими агентами, отделение от белков, а также от РНК и полисахаридов. Ниже приводятся методы выделения суммарной ДНК из растений. [c.58]

Возможность определения содержания аминокислот в пищевых продуктах без выделения белков. Ранее при определении содержания аминокислот в пищевых продуктах считалось необходимым выделять суммарные белки продукта и только после этого подвергать их гидролизу. Однако впоследствии пришли к заключению [c.190]

Для выделения суммарной фракции ДНК разрушают плазматическую, ядерную и митохондриальные мембраны и освобождаются от белков. Один из широко используемых методов получения чистых препаратов нативной ДНК, не содержащих белков, заключается в деструкции тканей и клеток анионными детергентами типа додецилсульфата натрия с последующим отделением белков в виде осадка, при сохранении нуклеиновой кислоты в растворе. Далее ДНК выделяют осаждением в этаноле солевого раствора нуклеиновой кислоты, или концентрированием исходного раствора, пропуская его через [c.71]

Для выделения суммарных и термостабильных водорастворимых белков использовали срезанные побеги закаленных и незакаленных проростков, а также узлы кущения растений, прошедших адаптацию в естественных полевых условиях. [c.8]

На начальных стадиях выделения биополимеров из растворов, осадков, а в ряде случаев и из исходной биомассы нередко используют экстракцию. Например, для выделения из биологического материала суммарной фракции липидов применяют экстракцию серным эфиром. Для очистки нуклеиновых кислот от основной массы белков и других биополимеров широко используется фенольная [c.234]

Все живые организмы, будь то растения или животные, требуют энергии. Эта энергия получается при контролируемом окислении жиров и углеводов (или белков, если в пище их избыток). Например, полное окисление 1 моля глюкозы приводит к выделению 2814 кДж энергии (рис. 15.2). Одинаковое суммарное количество энергии высвобождается как при окислении глюкозы при ее непосредственном сгорании, так и при многостадийном процессе, включающем гликолиз, цикл лимонной кислоты и цикл дыхания (разд. 15.2, 15.4 и 13.3). [c.309]

Сверх того, имеется большое количество антибиотиков с установленной суммарной формулой, например актиномицин, и антибиотики неустановленного состава, например лизоцим, присутствующий почти во всех выделениях и тканях млекопитающих, а также в яичном белке и многих растениях и микроорганизмах. Лизоцим сильно действует на ряд бактерий, причем некоторые из них полностью лизируются. В качестве других примеров можно привести такие как стрептотрицин, сильно действующий на микробы чумы и холерный вибрион, и фитонциды—большую группу антибиотиков растительного происхождения. [c.430]

Существование количественного соотношения между теплотой и упорядоченностью, открытое в конце XIX столетия, в принципе дает нам возможность рассчитать какое количество теплоты должна выделить клетка, чтобы компенсировать определенную степень упорядоченности внутри нее (такой, как сборка белков из аминокислот), причем суммарный процесс должен увеличивать степень неупорядоченности всей Вселенной. Такое соотношение можно получить, рассмотрев характер изменения движения молекул в результате перехода определенного количества тепловой энергии от горячего тела к холодному. Здесь нет необходимости представлять детальный расчет подобного процесса, отметим только, что химические реакции, которые протекают с выделением тепла, должны быть тесно связаны на молекулярном уровне именно с процессами, приводящими к упорядочению. Такие связанные между собой реакции, называются сопряженными мы их рассмотрим позднее Неразрывная связь между образованием тепла и повышением степени упорядоченности и отличает метаболизм клетки от расточительного процесса сгорания топлива. [c.80]

Последующие операции при выделении суммарных белков общие для обопх видов экстракции. [c.176]

В зависимости от целей и задач последования из тканей растений выделяют все белковые вещества и получают препараты так называемых суммарных белков, либо выделяют отдельные белковые фракции с различной степенью дробности. Выделенные белковые препараты затем подвергают тщательной очистке и сушке. [c.46]

Действие синтетического трикозапептида на человека исследовали Дановский и сотр. [565] (ср. [1039]). Ежедневное внутримышечное-введение взрослым мужчинам 160 единиц а -АКТГ в желатине в течение 7 дней сопровождается усиленным выделением И-окси-, П-дезокси- и 17-кетостероидов с мочой. Кроме того, наблюдается снижение содержания в плазме калия, суммарного белка, альбумина, кальция и связанного с белком иода. Сравнивая действие синтетического продукта и продажного АКТГ, следует отметить, что сходный эффект вызывается введением 200 единиц последнего. Продажный АКТГ вызывает ги-полипемический эффект, а синтетический продукт, напротив, лишь в очень редких случаях приводит к снижению уровня холестерина и триглицеридов. Различные образцы АКТГ отличались друг от друга при испытании на максимально допустимые дозы инсулина и глюкозы, а синтетический препарат вообще не давал при этом какого-либо заметного и воспроизводимого эффекта. Количественные и качественные различия в поведении различных образцов АКТГ объясняются присутствием примесей других биологически активных соединений, в то время как о[1-23-АкТГ химически однороден. Кроме того, авторы отмечают различия в абсорбционных свойствах и скоростях гидролиза [c.299]

При определении пищевой ценности изолированных экстракцией мочевиной суммарных белков из дрожжей рода Тогп1а было найдено, что выделенный продукт значительно лучше усваивается и переваривается, чем сами клетки дрожжей [7]. [c.514]

Порядок работы. Подготовительные операции. Экстракция белков и тканей растений основана на способности белков прн разрушении клеток (обработка детергентами, ультразвуком, растирание материала в ступке с кварцевым песком, гомогенизация п блен-доре, размалывание на ударных п шаровых мельницах сухого растительного материала) растворяться в воде, растворах солей, органических соединениях, кислотах й щелочах, буферных растворах. Буферные растворы обеспечивают мягкие условия выделения белкпп, при которых сохраняется природная структура их молекул. Для выделения большей части белковых веществ (препарат суммарного белка) используют буферные растворы с pH 8. [c.175]

Фракцию очищенных митохондрий разрушали ультразвуком на ультразвуковом диспергаторе УЗДН-1, после чего использовали для выделения суммарных и термостабильных водорастворимых белков. [c.8]

Методы, собранные в этих двух книгах, весьма разнообразны и охватывают почти все стороны исследований этой важнейшей грунны соединений. Здесь можно найти методы выделения и анализа отдельных компонентов нуклеиновых кислот (пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов), методы выделения, разделения и анализа олигонуклеотидов, изолирования отдельных клеточных органелл, выделения и фракционирования нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), а также изолирования их суммарной фракции для различного рода исследований, способы идентификации нуклеиновых кислот, методу. модификации их молекул, методы изучения их синтеза как in vivo, так и in vitro, методы изучения нуклеиновых кислот в связи с процессом биосинтеза белка и, наконец, методы изучения биологических свойств нуклеи1говых кислот, в том числе их иммунологических свойств. [c.5]

Выделяют препарат Кейлина—Хартри из двух сердец быка (с. 407). Препарат тщательно суспендируют в 0,25 М сахарозе и доводят содержание белка до 40 мг/мл, замораживают при —20° С. Все процедуры выделения проводят при температуре О—4° С. В стакане на 0,5 л к 75 мл замороженного и тщательно суспендированного препарата добавляют буфер I до суммарного объема 120 мл и 5 мл 1 М сукцината натрия. Смесь инкубируют 20 мин. Затем при хорошем перемешивании по каплям из делительной воронки добавляют 125 мл [c.424]

Суммарное получение белков основано на растворении их в воде, в солевых, водоспиртовых и слабощелочных растворах. Выделение белков заключается в экстрагировании их тем или иным растворителем после измельчения исследуемого материала. [c.44]

Во-первых, совершенно естественно, что, когда мы получили данные о том, что величина оптической активности дезоксирибонуклеопротеидов (даже если рассчитывать только на концентрацию ДНК, входящей в комплекс) значительно ниже, чем тот же параметр для ДНК, возник вопрос об аддитивности. Исследование оптической активности отдельно суммарного гистона не спасает положения, так как элементарные расчеты, предпосылкой которых является аддитивность, указывают на то, что аддитивности нет. Однако исследование активности гистонов само по себе не является строгим, поскольку нет полной уверенности в том, что обычные методы выделения гистонов не приводят к изменению вращения этого белка. Чтобы исключить это обстоятельство, А. И. Горин в нашей лаборатории исследовал оптическую активность фракций ДНП, полученных ступенчатой депротеинизацией, в которых прогрессивно уменьшалось количество белка. И в этом случае экстраполяция величины оптического вращения в зависимости от количества белка в ДНП на нулевую концентрацию белка приводит к значениям этого параметра примерно на 50% ниже, чем это характерно для нативной ДНК. Вместе с тем указанные значения величины вращения приближаются к тако- [c.25]

Первый вопрос, который возникает каков суммарный аминокислотный состав данного белка Техника определения этого состава со времени Э. Фишера ушла далеко вперед по точности (достигающей 99%) и по скорости операции. После кислотного или щелочного гидролиза (кислотный гидролиз разрушает триптофан и приходится комбинировать оба способа расщепления) раствор смеси аминокислот при pH 2 пропускают черев ионообменник (сульфированный полистирол в виде натриевой соли), который связывает все аминокислоты за счет их аммонийной функции, и аатем постепенно элюируют кислыми буферными растворами с pH, увеличивающимися от 3,5 до 5,5 и затем до И, т. е. все менее кислыми. Акинокислоты вымываются в порядке уменьшающейся кислотности под конец, при буфере pH 11, идет вымывание диаминокислот. В настоящее время все операции разделения производятся на автоматических аналива-торах, в которых смена буферных растворов совершается автоматически, а количество выделенных аминокислот определяется фотометрически по интенсивности сине-фиолетовой окраски, возникающей при реакции с нингидрином, который образует со всеми аминокислотами один и тот же краситель в результате следующих реакций [c.696]

При выделении карбоангидразы из эритроцитов млекопитающих стало очевидным, что у каждого биологического вида можно обнаружить несколько электрофоретически различных белков с карбоангидразной активностью [34—40, 46]. У быка это ферменты А и В [34], у человека — карбоангидразы В и С [35—38]. Наиболее существенные отличия физико-химических свойств таких изоферментов определяются различием их аминокислотного состава (табл. 16.2) и последовательности аминокислот. А это в свою очередь проявляется в функциональных и структурных особенностях (см. ниже). Например, для изоферментов человека наблюдается значительная разница в уровне активности. При гидратации СОг карбоангидраза В проявляет удельную активность около 40 000 ед./мг белка, а тип С — примерно 1200000 ед./мг белка [47] (подробнее см. разд. 7). С физиологической точки зрения интересно, что содержание этих изоферментов в организме неодинаково — количество высокоактивной карбоангидразы С в 5—10 раз меньше, чем фермента типа В. Результатом этого является примерно равное распределение суммарной карбоангидразной активности между двумя изоферментами. [c.565]

Постепенное дефосфорилирование яичного альбумина было подтверждено электрофоретическим выделением дифосфояичного альбумина Ль частичным дефосфорилированием яичного альбумина фосфатазой предстательной железы, в результате которого образуется монофосфорное производное Л2, и полным дефосфорилированием производного Л2 кишечной фосфатазой с образованием альбумина Лз, не содержащего фосфора [150в]. За исключением содержания фосфора и характера подвижности, все три белка А, Л2 и Л3 обладают сходными свойствами. Как и в случае превращения яичного альбумина в плакальбумин, изменение подвижности, которым сопровождается процесс дефос-форилирования, можно использовать для оценки изменения суммарного заряда белков. Эти результаты показывают, что в удалении каждого из атомов фосфора принимают участие два способных ионизироваться атома водорода. Установление взаимосвязи между тремя формами яичного альбумина помогает объяснить электрофоретическую гетерогенность свежеприготовленных растворов этого белка и изменения, наблюдающиеся при старении. [c.335]

Для использования непосредственно в пищевых целях выделенных из микробиологического сырья белков надо устранить присущие дрожжам нежелательные факторы (неприятный цвет, запах, посторонний вкус). По своей биологической ценности такие белки могут быть доведены до уровня лучших Гелков животного происхождения. Удалось, например, показать [6], что изолированный суммарный белок М1сгососсиз glutami us по аминокислотному составу не отличается от белка куриных яиц. [c.514]

Выделение белков из растворов после прибавления различных солей называется высаливанием. Высаливание белков, так же как и растворение, зависит от природы применяемых солей. Растворы разных солей одинаковой концентрации влияют по-разному на растворение, оседание, на электрический заряд и глектрофоретическую подвижность коллоидов. Основную роль при этом играет ионная сила, величина которой определяется концентрацией и валентностью ионов в растворе. Многовалентные ноны, несущие несколько положительных или отрицательных ионов, влияют больше на гидратацию белка, чем одновалентные ионы. Если водный раствор содержит несколько ионов, то их действие выражается в виде суммарного эффекта 2 тг Бсех имеющихся ионов. Ионная сила определяется по следующей формуле [c.8]

Мартин и Синдж [6] показали, что при разделении и определении индивидуальных компонентов из одной порции смеси аминокислот можно получить более точную картину суммарного анализа белка, чем при выделении различных аминокислот (или их производных) из отдельных порций гидролизата. В последнем случае получаемые величины будут независимо искажаться ошибками, возникающими за счет потерь определяемой аминокислоты и примесей других аминокислот, так что суммарная величина будет содержать сумму этих независимых ошибок. Если аминокислоты разде.лять непрерывным элюированием одной порции гидролизата, то, хотя ошибки этого рода еще могут влиять на индивидуальные величины, при суммировании они аннулируются, так как индивидуальные ошибки в этом случае зависят друг от друга. Это дает более надежные основания для расчета числа аминокислотных остатков каждого типа, присутствующих в молекуле белка. Далее, поскольку ионообменная хроматография включает только одну операцию, метод характеризуется высокой разрешающей способностью и проводится в мягких условиях температуры и значений pH, ошибки в определении индивидуальных аминокислот малы. Метод ионообменной хроматографии Мура и (Стейна представляет собой поэтому успешное практическое осуществлеш1е стремления к простому, универсальному и точному методу аминокислотного анализа, начало которому положили Мартин и Синдж. [c.121]

Имеются некоторые доказательства, что в гликопротеине ПЖБ, приготовленном по методике, принятой в лаборатории Пигмана, часть простетических групп связана с белком связями, более чувствительными к щелочи, чем 0-гликозидные связи с серином и треонином. Так, через 24 час обработки в мягких щелочных условиях (см. раздел 2) скорость выделения гексозамина резко уменьшается, и через 144 час при суммарной потере 68,9 моля гексозамина потеря а-амипо-р-оксикарбоновых кислот на 100 мг ПЖБ составляет только 51,5 мкмоль. Согласно данным Танака и сотр. [221, высокая степень чувствительности к щелочи связей, соединяющих 17% остатков гексозамина с белком, может быть отнесена за счет ацилгликозидных связей. [c.295]

Недавно были опубликованы данные об экспрессии u/Zn-супероксид-дисмутазы человека (СОД) в виде негибридного белка в клетках Е. соИ [37]. Белок находился в растворимом состоянии, обладал ферментативной активностью и составлял примерно 13% суммарного клеточного белка. Выделение СОД из фракции растворимых белков Е. соИ включает несколько стадий [c.130]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология