Локализация белков

ЦИИ трансляции не проходит далее сквозь мембрану, а остается вставленным в мембрану как трансмембранный белок. Можно привести еще ряд аналогичных примеров интегральных мембранных белков, синтезируемых с отщепляемой N-концевой сигнальной последовательностью (гемагглютинин вируса гриппа, тяжелая цепь антигенов гистосовместимости А и В, гликофорин А красных кровяных клеток, цитохром Р-448 и т. д.). Получается, что в синтезе как секреторных, так и интегральных мембранных белков используется один и тот же механизм сигнального пептид-мембранного узнавания, вхождения растущего пептида в мембрану и затем отщепления N-концевого сигнального фрагмента, но терминация трансляции может приводить либо к прохождению конечного продукта сквозь мембрану в случае водорастворимых секреторных белков, либо к его солюбилизации в мембране в случае более гидрофобных белков, предназначенных для внутримембранной локализации. Белки, оставшиеся в мембране. эндоплазматического ретикулума, далее могут подвергаться посттрансляционному транспорту через секреторные пузырьки в мембранные структуры других типов, включая клеточную плазматическую мембрану. [c.281]

Особый интерес вызывает локализация белка S4. Дело в том, что [c.112]

Сердцевинное положение РНК и более периферическая локализация белков в рибосомных частицах может быть продемонстрирована также с помощью специальной техники электронной микроскопии, где частицы погружены в среды с разной электрон-рассеивающей плотностью. Здесь используется тот же принцип контрастирования, что и в случаях диффузного рассеяния в растворе. Так, когда частицы погружены в глюкозу, то электрон-рассеивающие плотности среды и белкового компонента оказываются уравненными и видна только РНК. В других средах видны как белок, так и РНК. Этим методом удалось подтвердить как тот факт, что РНК образует центральное ядро в рибосомной частице, так и многочисленные указания, что в то же время РНК далеко не вся покрыта белками, а в ряде мест образует поверхность частицы. [c.106]

Локализация белков в мембранах 124 [c.6]

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕМБРАНЫ 25.3.5.1. Локализация белков в мембранах [c.124]

Аналогичные способы локализации белков на бумажных хроматограммах были разработаны Джонсом и Михаэлем [70], которые использовали кислотный краситель, обладающий сродством к белкам, но не к целлюлозным волокнам. Белки обнаруживаются в виде пятен фиолетового цвета на белом фоне. [c.332]

Локализацию белков в мем-бр анах изучают также с применением радиоактивных реаген-Если [c.319]

Рис. 4.2. Локализация белков в мембранах.

Локализацию белка в различных компартментах клетки. [c.342]

ПОВЕРХНОСТНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ БЕЛКОВ [c.223]

Рис. 2.47. Варианты секреции и конечной локализации белков в клетках Е. соИ. Черным треугольником отмечено место отщепления сигнального пептида

Локализация белков в биологических мембранах наиболее изучена в эритроцитах. Для этого используют процессы ферментативной деградации мембранных белков, проникающие и непроникающие реагенты, связывающиеся с определенными группами белков, антитела и химические зонды. [c.29]

Рис 10 2 Механизм секреции белков у F соИ В левом нижнем углу схемы стрелками указаны возможные места конечной локализации белков [c.327]

Локализацию белков, обладающих ферментативной активностью, можно определить косвенным путем. Для этого гель помещают в раствор субстрата данного фермента, и, если продукт реакции окрашен, сразу выявляется его местоположение, а следовательно, и местоположение фермента. [c.127]

Основное преимущество метода гибридом определяется возможностью получения моноклональных антител против неочищенных молекул, содержащихся в сложной смеси в качестве минорного компонента. Это преимущество обеспечивается реальностью выбора индивидуальных гибридом, образующих антитела определенного вида, из сложной смеси различных гибридных клеток, продуцирующих множество разных антител. Таким образом в принципе можно получить моноклональные антитела против любого белка, содержащегося в клетке. Каждый тип антител можно затем использовать в качестве специфического зонда как для локализации белков с помощью цитологических методов, так и для очистки белков. Получив белки в чистом виде, мы можем исследовать их структуру и функцию. К настоящему времени выделено не более 5% из 1000 или более различных белков, которые, судя по имеющимся данным, содержатся в типичной клетке млекопитающих. Использование моноклональных антител и технологии клонирования генов (см. ниже) снимает многие сложности в идентификации и определении новых белков и генов. Проблемой для исследователей остается определение их функций. [c.227]

Левитт [34] сделал попытку определить локализацию белков в цитоплазме клеток клубней картофеля. Он пришел к выводу, что содержание крахмальных и белковых зерен (нерастворимых в кислоте) выше в покоящихся клубнях, чем в развивающихся. В то же время альбумины, видимо, являются муко-протеинами. Как показали микроскопические наблюдения [27]. туберин легко осаждается и находится в клеточном соке. Другой глобулин, по всей видимости, локализован в периферийных слоях клубня и в центральной сердцевинной части. Анализы туберина показали, что он обладает энзиматической активностью и образуется впервые в хондриосомах и сферосомах. Это наблюдение поддерживает гипотезу, согласно которой в клубнях нет запасных белков в прямом смысле, а имеются только функциональные белки, играющие роль в жизнедеятельности клубня [5]. Поскольку аккумулированные запасные вещества в клубнях разнообразны, вполне нормально, что эти белки неодинаковы по составу у разных растений. [c.276]

Особый интерес представляют, конечно, взаимодействия рибосомных белков с высокополимерными рибосомными РНК (16S и 23S РНК прокариот или 18S и 28S РНК эукариот), ибо они представляют собой основной ковалентный каркас и структурное ядро рибосомных субчастиц. По-видимому, больщинство рибосомных белков контактируют и так или иначе взаимодействуют с высокополимерными рибосомными РНК. Однако среди них можно выделить специальные сердцевинные РНК-связывающие белки, которые прочно взаимодействуют с соответствующей рибосомной РНК, более или менее независимо от других белков. Такими белками малой (30S) рибосомной субчастицы Е. соИ, независимо вступающими в комплекс с 16S РНК, являются S4, S7, S8, S15, S17 и S20. Каждый из них связывается только со специфическим местом на 16S РНК, узнавая его нуклеотидную последовательность и пространственную структуру. Эту последовательность можно выявить таким путем изолированный белок добавляется к рибосомной РНК, в результате чего образуется специфический белок-РНК-комплекс комплекс переваривается рибонуклеазой, так что негидролизованной остается лищь та часть нуклеотидной последовательности, которая закрыта белком эта защищенная последовательность определяется и, таким образом, идентифицируется. Другой метод локализации белков на первичной структуре рибосомной РНК — ковалентная сщивка (например, фотоиндуци-рованная) белка с РНК непосредственно в составе рибосомы, с последующим удалением несшитых белков, перевариванием РНК с помощью РНКазы и идентификацией сшитого олигонуклеотида. Расположение мест связывания вышеуказанных шести белков вдоль цепи 16S РНК схематически показано на рис. 59, а. Видно, что белки [c.100]

Известно, что антибиотик тиострептон, препятствующий связьшанию EF-G (так же как и EF-Тц) с 50S субчастицей, присоединяется в районе локализации белка L11 и защищаемой им последовательности 23S РНК 1052—1112, представляющей собой составную шпильку, с больщой боковой петлей, в домене II (см. рис. 45). Кажется вероятным, что этот район 23 S РНК находится вблизи места связьшания EF-G с 50S субчастицей. [c.145]

Особенно полезным для изучения локализации белков оказался лактопероксидазный метод [15] (рис. 3.8). [c.77]

Рис, 3.8. Лактопероксидазный метод иодирования остатков тирозина в белках. Ферментативное иодирование затрагивает только поверхностные белки п поэтому может использоваться для локализации белков в клеточной мембране, [c.78]

Гипотеза сигнальной последовательности, первоначально предложенная для эукариотических клеток, применима и к бактериям. Мутации в N-концевой лидерной последовательности могут нарушить секрецию. Однако их можно супрессировать мутациями в других генах, в число которых входит по крайней мере один из генов рибосомных белков. Таким образом, сама рибосома каким-то образом участвует в механизме прикрепления к мембране. Это означает, что сигнальная последовательность взаимодействует не только с мембраной и что при этом должны существовать другие белок-белковые контакты с рибосомой. Как и в случае эукариот, у бактерий могут существовать дополнительные сигналы, необходимые для правильной локализации белка после его проникновения в мембрану. Например, С-концевая область Р-лактамазы Е. соИ нужна для того, чтобы белок вышел из мембраны и поступил в переплазматическое пространство. [c.130]

До недавнего времени изучение клеточных белков было ограничено лищь мажорными фракциями, т.е. белками, содержащимися в клетках в относительно больщом числе. С помощью обычных методов хроматографии и электрофореза из нескольких сот граммов клеточной массы можно получить примерно 0,1 г (100 мг) одного из мажорных белков, составляющих 1% или более от всего количества клеточных белков. Этой массы белка вполне достаточно для изучения его аминокислотной последовательности, детального анализа биологической или ферментативной (если таковая имеется) активности и получения антител, которые могут быть использованы для локализации белков в клетках. Более того, когда удается вырастить подходящие кристаллы, то с помощью рентгеноструктурного анализа можно установить трехмерную структуру молекулы. Именно таким образом была определена структура и функция многих распространенных белков, в том числе гемоглобина, трипсина, иммуноглобулина и лизоцима. [c.243]

Рис. 13-35. Эта электронная микpoфoтoqзaфия показывает, что протеинкиназа, кодируемая онкогеном -sr вируса саркомы Рауса, прикреплена к внутренней поверхности плазматической мембраны как полагают, белок sr , образующийся под действием белка -sr , по-видимому, находится там же, но его труднее обнаружить, так как он обычно присутствует в очень малых количествах Локализация белка sr была определена на этом препарате по его реакции со специфическими антителами, к которым были присоединены электроноплотные частицы

С помощью радиохимических, цитохимических и иммунохимических методов установлена внутриклеточная локализация белка S-100. Основная масса (до 85%) этого белка сосредоточе- [c.72]

Важная особенность мембраны — асимметрия бислоя, создаваемая за счет действия внутриклеточных ферментов, различий ионного состава цитоплазмы и интерстициальной жидкости, а также особенностей структуры молекул фосфолипидов и асимметричной локализации белков и липидов в бислое. Асимметрия бислоя — это фактор, обеспечивающий создание градиента кривизны, складок, сморщиваний, отшнуровку частей мембраны в виде везикул. [c.31]

Как уже отмечалось, процессинг экспортируемых белков осуществляется сигнальной пептидазой, которая расположена в мембране так, что каталитический участок фермента находится на ее наружной поверхности. Непосредственно перед окончанием трансляции или же вскоре после окончания происходит отщепление сигнального пептида и зрелый белок перемещается в определенные отделы клетки или за ее пределы. Однако в лидер-ном пептиде содержится не вся информация, необходимая для правильной локализации белка в клетке. Зрелый белок может включать дополнительные последовательности (стоп-трансфер-ные сигналы, мембранные якоря), которые определяют, в частности, его расположение в пределах мембраны. Обычно это гидрофобные участки, напоминающие аналогичные последовательности сигнальных пептидов, детерминирующие задержку белка в липидном двуслое. В зависимости от характера расположения этих участков в пределах полипептидной цепи белок может или целиком размещаться в пределах мембраны, или же присоединяться к ней за счет концевой области. По-видимому, некоторые ферменты, которые остаются всегда связанными с поверхностью клетки, фиксированы в мембране подобным образом. [c.66]

Следует однако оговори гься, что эти данные являются прнблигштельными, количество отдельных белкпз колеблетсн в значительных пределах, так как их содержание зависит от иида и возраста животного, локализации белков в тех или иных отделах нервной системы, а также от способа извлечения и разделения белков. [c.134]

Неоднократно продемонстрировано, что Т-клетки, рестриктированные в отношении распознавания антигена молекулами МНС класса I (например, Тц), распознают синтезированные клет-кой-мишенью эндогенные антигены, тогда как Т-клетки. рестриктированные молекулами МНС класса II (в частности, Тх), распознают экзогенные антигены. Произвольно меняя локализацию белка, можно вызвать иммунный ответ, рестрик-тированный молекулами МНС либо класса I, либо класса II. Например, гемагглютинин вируса гриппа (НА), представляющий собой гликопротеин, ассоциированный с мембранами клеток организма, вызывает лишь слабый Тц-ответ. Одна- [c.162]

Номенклатура ротавирусных белков до конца не разработана, а локализация белков орбивирусов может быть неодинаковой у разных вирусов. Подробнее см. гл. 20. [c.259]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология