Разделение основных аминокислот

Вытеснительная хроматография на синтетических ионообменных смолах. Разделение основных аминокислот [260]. [c.219]

Адсорбционный анализ аминокислот. Сообщение III. Попытки разделения основных аминокислот [275]. [c.220]

Разделение основных аминокислот адсорбций на вофатите С [298]. [c.221]

ЭТОМ оказалось, что оптимальная скорость элюирования основных аминокислот достигается лишь при использовании более концентрированных буферных растворов. Однако при значительном изменении концентрации и pH буфера наблюдалось увеличение объема набухшего ионита и возрастание гидродинамического сопротивления колонки. Одновременно повышался уровень базовой линии. Кроме того, в этих условиях после каждого опыта приходилось извлекать иониты из колонки, а затем, после их регенерации, вновь набивать колонку. В итоге оказалось удобнее проводить анализ образца на двух колонках. На первой осуществляли анализ кислых и нейтральных аминокислот, а сумму основных аминокислот вытесняли в конце анализа гидроокисью натрия. На второй, более короткой колонке вначале в виде суммарного пика элюировали смесь кислых и нейтральных аминокислот, а затем осуществляли разделение основных аминокислот. После получения более качественных ионитов и усовершенствования метода детектирования был разработан современный одноколоночный аминокислотный анализ. [c.306]

ВЫДЕЛЕНИЕ И РАЗДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ АМИНОКИСЛОТ (ПО КОС- [c.13]

ИЗОЛИРОВАНИЕ И РАЗДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ АМИНОКИСЛОТ ПО МЕТОДУ ТУРБА [622] [c.44]

В настоящее время широко распространен достаточно точный нингидриновый метод определения аминокислот при помощи хроматографического разделения на бумаге. Однако разделение некоторых аминокислот обычной хроматографией на бумаге требует большой затраты времени например, для разделения основных аминокислот, необходимо минимум 4— 5 суток. Применение электрофоретического разделения позволило сократить время разделения лизина, аргинина и гистидина до 3 часов и за счет этого сократить общее время, необходимое для количественного анализа этих аминокислот, с 5—б дней до 6—7 часов. [c.254]

Разделение основных аминокислот. Турба [210] подробно описал количественное разделение аргинина, [c.65]

В ряде работ [434, 435] описано хроматографическое разделение некоторых белковых гидролизатов на колонне, наполненной крахмалом, с последующим определением в элюате отдельных аминокислот нингидринным методом. Такой же способ был применен для разделения тимина, урацила, аденина и некоторых других пуринов и пиримидинов [266]. Для разделения смеси некоторых аминокислот использована хроматография на бумаге, а также и ионообменные емолы (амберлит Ш-4В) [229, 238, 263, 271] для разделения основных аминокислот предложен пермутит [479]. [c.222]

Б. При хроматографии, высушивании, нанесении пробы, проявлении, оценке разделения, документации и т. д. можно применять ранее разработанные хорошо известные способы тонкослойной хроматографии. Например, для разделения основных аминокислот в аминокислотном анализаторе применяют буфер, имеющий концентрацию Ыа" 0,35 М и pH 5,23 этот же буфер пригоден для разделения основных аминокислот на пластинке Фиксион 50 х 8 . При этом, кроме основных, хорошо разделяются и идентифицируются ароматические аминокислоты Тир и Фен. [c.245]

Менее эффективным методом является элюентная хроматография на ионитах, по емкости на два порядка уступающая вытеснительной технике. Однако ее несомненным преимуществом является возможность получения хроматографически чистых аминокислот. Еще в 1950 г. был разработан предельно простой метод препаративного разделения аминокислот на смоле дауэкс 50-Х8 в ступенчатом градиенте соляной кислоты [91]. Аминокислоты выделяли из элюата простым упариванием досуха. Однако в этом случае плохо разделяются серин и треонин, а также лейцин и изолейцин. Основные аминокислоты элюируют 4 н. раствором НС1, и тем не менее элюирование занимает много времени. Поэтому авторами была разработана новая схема элюирования — аммоний-ацетатным и аммоний-формиатным буферами, при которой достигалось полное разделение всех аминокислот. Первой стадией является элюирование ацетатными буферами на колонке с дауэксом 50-Х8 высотой 15 см. При этом происходит разделение основных аминокислот. Первые два пика содержат смесь аминокислот, которая разделяется при рехроматографии. Второй пик, соответствующий тирозину и фенилаланину, хроматографируют на колонке (высотой 60 см) с дауэксом 50-Х8. Материал, соответствующий первому пику, фильтруют через колонку (высотой 15 см) с ам- [c.356]

Катиониты с карбоксильными группами используются для специальных аналитических целей. Значительный интерес представляет применение катионитов этого типа для разделения основных аминокислот и для отделения сильных органических оснований от слабых. Разделение может быть облегчено переведением ионита в смешанную форму нредварительной обработкой буферными растворами с различными значениями pH. [c.147]

Бенсон [81] описал ускоренную хроматографию аминокислот, связанных с фенилкетонурией, лейцинозом и другими врожденными дефектами метаболизма. Эти анализы выполнены на одной колонке, заполненной сферической катионообменной смолой типа РА-35, которая может быть также использована для хроматографического разделения основных аминокислот, присутствующих в физиологических жидкостях. [c.16]

На колонку наносят пробу аминокислот в количестве, составляющем половину пробы для 150-сантиметровой колонки. Элюцию проводят при 50° буферным раствором pH 5,28 со скоростью 30 мл час. Первым пиком из колонки выходит смесь кислых и нейтральных аминокислот, затем смешанный пик фенилаланина и тирозина после этого основные аминокислоты и аммиак в последовательности лизин, гистидин, NHз, аргинин. Удерживаемый объем последнего составляет около 115—120 мл, т. е. для анализа требуется около 4 час. Положение гистидина, как и цистина, на выходной кривой весьма чувствительно к pH буферного раствора, значение которого должно быть таким, чтобы гистидин выходил между пиками лизина и КНд. Для лучшего разделения основных аминокислот рекомендуют вместо 15-сантиметровой колонки использовать колонку длиной в 30 см. Короткая колонка работает без регенерации, так как в большинстве исследуемых смесей нет нингидринположительных веществ, сорбирующихся па колонке сильнее аргинина. При необходимости регенерировать колонку через нее пропускают 10 мл 0,35 н. раствора МаОН, содержащего детергент, а затем 80 мл буферного раствора pH 5,28. [c.135]

ЗОН является мерой количественного содержания индивидуальных аминокислот. При определении анионно мигрирующих аминокислот в качестве индикаторов, очерчивающих границы зоны аминокислот, добавляют УФ-поглощающие вещества в метилцел--люлозе и р-аланин. В процессе разделения основных аминокислот для точного определения ширины зоны используется произ- [c.338]

Применение ионитов для разделения основных аминокислот может итти по двум направлениям приготовление смесей для концентрирования в технических масштабах аргинина, гистидина II лизина и разделение основных аминокислот для целей анализа. [c.305]

Ионообменная хроматография — развитие того простого метода ионного обмена, о котором говорилось выше как о методе отделения ионогенных веществ от нейтральных. Ионообменная хроматография проводится на тз[ких же полимерных ионообменных смолах, но более тщательно подготовленных (полученных по строго определенной методике из очень чистого сырья, с одинаков й величиной зернения и т. д.). В таких условиях можно проводить разделение близких веществ, используя сравнительно небольшие различия в свойствах разделяемых соединений. Одно из очень важных для биоорганической химии приложений ионообменной хроматографии — ко-яичественный аминокислотный анализ, производимый иа специальных автоматических анализаторах. При этом благодаря строгой стандарт-ности всех операций каждая. 22 аминокислота всегда элюи- руется в определенный мо- мент (см. рис. 4, где в каче-стве примера указано разделение основных аминокислот и аммиака). Измеряя объем пика каждой аминокислоты, можно количественно определить соотношение различных аминокислот в данном образце (т. е. провести аминокислотный анализ). [c.25]

Попытку создать метод количественного определения для характеристики белковых препаратов предпринял В. Гаусман, предложивший характеризовать белки по распределению азота в трех основных группах продуктов их гидролитического расщепления. Он проводил количественное определение азота аммиака, а также азота оснований я неосновного азота гидролизата [243, 244]. Этот метод в модификации Т. Осборна, добавившего определение четвертой фракции — азота меланина, или, по современной терминологии, азота гумина,— стал одним из наиболее распространенных методов аналитической химии белков [348]. Но это был групповой метод и он не мог дать никаких сведений об отдельных компонентах белковой молекулы или отдельных продуктах ее гидролитического распада. Метод разделения основных аминокислот, предложенный А. Косселем и Ф. Кутчером, имел ограниченное значение [282], как это будет видно в дальнейшем. [c.65]

Синтетические смолы применяются также для разделения основных аминокислот по Блоку и др. [211—212]. Виланд [213] показал, что основная АЬОз-колонка (т. е. АЬОз, содержащий ионы Na) будет задерживать аргинин и лизин, тогда как гистидин и моноаминокислоты вымываются нейтральным раствором. Виланд [212с] применял также синтетическую смолу вофатит-С. В своей кислой форме она удерживает гистидин, лизин и аргинин, а в виде калиевой соли — только лизин и аргинин. Колонка с вофатитом может удерживать в 20 раз больше, чем основная АЬОз-колонка такого же веса. [c.67]

РИС, 9.5. Разделение основных аминокислот на энаитиомеры на колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) п воде. Температура комнатная, скорость потока 0,2 мл/мин. [c.340]