Клетки дикого типа

Рост в полной питательной среде, в которой могут расти как клетки дикого типа, так и мутанты [c.450]

Избирательное бактерицидное действие пенициллина на растущие клетки дикого типа [c.450]

Клетки дикого типа растут на обеих средах, а ауксотрофные мутанты - только на полной среде. Пересев мутантов [c.450]

Получить накопительную культуру мутантов, устойчивых к антибиотикам, ядам или бактериофагам, довольно легко. На среде, к которой добавлен соответствующий агент, выживают только устойчивые к нему мутанты, а клетки дикого типа гибнут. [c.450]

Метод с применением пенициллина антибиотик убивает клетки дикого типа, растущие при более высокой температуре, например при 37° С [c.452]

В настоящее время мы знаем, что клетка умеет синтезировать фермент р-галактозидазу как в диком штамме, так и в конститутивном штамме z i , но во втором случае утрачена способность к регулированию синтеза этого фермента, и он всегда производится с максимальной скоростью, независимо от потребностей клетки. Иначе говоря, мутант 1 — это штамм клеток с испорченным механизмом регулирования. Соответственно такие клетки растут хуже, чем клетки дикого типа, так как избыточный синтез одного фермента происходит за счет синтеза других необходимых белков. Локус i получил название гена регулятора. [c.483]

Очень низкая частота возникновения мутаций Str -Str объясняется, по-видимому, причиной, в корне противоположной рассмотренным причинам молчащих мутаций. Ранее указывалось, что гены, при мутировании которых возникает фенотип Str , контролируют образование компонентов, обеспечивающих синтез белков, и, следовательно, контролируют незаменимую функцию в том смысле, как это обсуждалось в предыдущей главе. Легко можно понять, что любая мутация, приводящая к утрате незаменимой функции, является летальной. Клетка, которая не может нормально осуществлять процесс сборки полипептидных цепей, неизбежно погибнет, и ее нельзя спасти добавлением в среду каких-либо факторов роста. Поэтому, чтобы клетка приобрела мутантный признак Str , требуется не утрата, а изменение функции белка, контролируемого затронутым мутацией геном. Это изменение белка должно не только сохранить незаменимую функцию, но и сделать ее нечувствительной к воздействию стрептомицина, который подавляет эту функцию в клетках дикого типа. По-видимому, к таким изменениям третичной и четвертичной структуры, которые удовлетворяют этому жесткому функциональному критерию, приводят лишь очень немногие из всех возможных изменений первичной структуры полипептидной цепи. Поэтому не удивительно, что частота возникновения мутаций, изменяющих функцию, намного ниже частоты возникновения мутаций, приводящих к утрате функции,. i [c.153]

A. При скрещивании ревертанта А с клетками дикого типа все потомство (100 %) было прототрофным. [c.57]

B. При скрещивании ревертанта С с клетками дикого типа было получено 996 прототрофных клона и 4 ауксотрофных. [c.57]

Измеряли радиоактивность в осадке и в супернатанте. Результаты этого эксперимента и контрольных опытов (проведенных только на мутантных клетках или только на клетках дикого типа) представлены в табл. 8-2. [c.119]

Инфицированные мутантные клетки, слившиеся с неинфицированными клетками дикого типа [c.119]

Достичь одновременно и высокого уровня синтеза чужеродного белка, и высокой плотности культуры часто не удается из-за накопления вредных побочных продуктов (в первую очередь ацетата), подавляющих рост клеток и синтез белка. Чтобы уменьшить накопление ацетата в богатой среде, не нарушая роста клеток, можно снизить скорость поглощения глюкозы, добавив в среду ее аналог, метил-а-глюкозид. Альтернативный подход состоит в использовании клеток Е. соИ, несущих мутацию в гене ptsG, который кодирует фермент II глюкозофосфотрансферазной системы. Максимальная плотность культуры Е. соИ дикого типа составила примерно 10 г/л, а культуры Е. соИ с мутацией в гене ptsG - 15 г/л. Кроме того, уровень синтеза Р-лактамазы в мутантных клетках был на 25% выше (на 1 г массы сухого вещества), чем в клетках дикого типа, так что суммарное различие достигает примерно двукратной величины. [c.129]

Таблица 12.4. Синтез ксантановой слизи в трансформированных клетках X. ampestris и клетках дикого типа, растущих в среде с разными источниками

Можно создать особые условия, при которых мутанты с нужными свойствами не растут. В этом случае применяется так называемый метод обогащения, когда активно растущие клетки дикого типа погибают, а нерастущие мутантные выживают, Так, например, пенициллин или нистатин вызывает гибель растущих клеток бактерий или грибов соответственно. При работе с грибами недостаток в среде инозитола приводит к автолизу растущих, но не покоящихся клеток. [c.297]

На обычных твердых средах лишь немногие мутации можно непосредственно обнаружить по изменению пигмента, измененному росту колоний или иным признакам. Некоторые мутантные признаки выявляются при добавлении индикаторов или красителей. Для идентификации мутантов, отличающихся от родительских клеток пониженными или повышенными требованиями к питанию, приходится сравнивать рост тех и других на двух средах. Если, например, мутант утратил способность к синтезу лейцина, которой обладали клетки родительского (дикого) типа, то он будет расти только на той среде, к которой добавлена эта аминокислота. Мы называем такого мутанта ауксотрофны(м по лейцину, т.е. нуждаюнщмся в лейцине (1еи ), а также дефектным по лейцину, противопоставляя ему прототрофный дикий тип (leu ). Если в клеточной суспензии присутствуют одновременно и мутантные клетки 1еи , и про-то трофные клетки дикого типа, то эти два типа можно различить по росту на двух разных средах. Метод, обычно применяемый для выявления таких дефектных мутантов, представлен на рис. 15.8. [c.449]

Клетки дикого типа, растущие на среде с глюкозой, содержат лишь едва заметные следы -галактозидазы. Если же выращивать их на среде с лактозой или иным -галактозидом, то -галактозидазная активность увеличивается в 1000 раз этот фермент может составлять около 3% всего клеточного белка Он обычно образуется только в присутствии индуцирующего вещества-лактозы. Изучению механизма регуляции существенно помогло применение не используемого бактерией индуктора-2-пропил-р-тиогалактозида. Добавление этого вещества приводит к обманной индукции -галактозидазы фермент образуется, но не может гидролизовать соединение, индуцировавшее его синтез, и сделать его доступным для дальнейших превращений. [c.474]

Мутанты, конститутивно образующие катаболические ферменты. Накопительные культуры такого рода мутантов можно получить путем частой смены субстратов. Если клетки конститутивно образуют ферменты, необходимые для использования субстрата А, то после переноса клеточной популяции с субстрата В на субстрат А они точас начинают расти с максимальной скоростью клеткам же индуцибельного дикого типа для достижения максимальной скорости роста необходима определенная лаг-фаза (чтобы синтезировать ферменты для роста на субстрате А). После ряда генераций клетки снова переносят на среду с субстратом В и дают им расти до тех пор, пока ферменты, участвующие в использовании субстрата А, не будут достаточно сильно разбавлены . После многократного повторения такой процедуры конститутивные мутанты сильно обгоняют в росте клетки дикого типа с индуцибельными ферментами. Таким путем были выделены, например, мутанты Е. соН, конститутивно образующие ферменты, необходимые для использования Лактозы. В других методах отбора пользуются таким приемом, как подавление индукции при помощи структурных аналогов субстрата. Метилтио алактозид может, например, подавить у Es heri hia oli индукцию й(а/ Оперона, вызываемую галактозой. [c.498]

Мутации, обусловливающие конститутивное расщепление антиметаболитов. При этом клетка разрушает антиметаболит и тем самым обезвреживает его. С точки зрения отбора мутантов с нарушенной регуляцией интерес представляют только первые два типа мутаций. Дерепрессия синтеза анаболических ферментов и утрата способности подчиняться аллостерическому ингибированию часто приводит к перепроизводству й выделению в среду конечного продукта данного биосинтетического пути (метаболита). Для мутантной клетки это существенно потому, что метаболит вытесняет антиметаболит из реакции, обеспечи-вая таким образом рост клеток и образование колоний. Образующийся в избытке метаболит выделяется, диффундирует в агар и в зоне диффузии устраняет влияние антиметаболита на клетки дикого типа. Такие клетки начинают расти и образуют мелкие колонии их называют вторичными или сателлитными колониями. Центральную же колонию образуют клетки мутанта, выделяющего метаболит (рис, 16.15). Рост сателлитов указывает на то, что произошла мутация, нарушившая нормальную работу регуляторных механизмов. Но для того, чтобы установить, какого рода дефектом обусловлено накопление и выделение метаболита, в каждом случае требуется специальный анализ. [c.499]

Погибает большое число нрототрофных клеток, мутанты же, которые не способны расти на минимальной среде, выживают. Затем клетки отмывают от яда и засевают на чашки Петри, со-держаш,ие агар и минимальную среду с некоторой добавкой универсальной среды. На этой среде оставшиеся неубитыми клетки дикого типа образуют большие колонии, а мутанты растут медленнее и дают мелкие колонии. В результате обогащения мутантов с помощью пенициллина удается обнаружить события, происходящие с очень малой вероятностью, например порядка 10 . Найдя на поверхности агара ауксотрофные мутанты, мы можем провести детальный анализ их недостаточности, пересевая их на пластинки с промежуточными средами, как говорилось выше. Метод Ледерберга и Зиндера — весьма важное развитие приемов селекции бактерий. [c.297]

Ка к только на рубеже этого века для лечения болезней, вызываемых бактериями, стали использовать лекарственные препараты, сразу заметили, что воздействие на бактериальную культуру того или иного лекарственного препарата часто приводит к тому, что чувствительная к этому препарату культура превращается в форму, устойчивую к нему. Лекарственный препарат, взятый в таких количествах, которые наверняка убили бы исходных, чувствительных бактерий, не оказывал влияния на культуру устойчивых бактерий. С началом широкого использования сульфамидных препаратов (в 30-х годах) и антибиотиков пенициллина и стрептомицина (в 40-х годах) развитие у бактерий устойчивости к лекарственным препаратам превратилось в явление обычное и стало (и все еще остается) проблемой огромной практической важности. При попытках объяснить природу этого явления исходили из широко распространенного тогда мнения, что бактерии приобретают устойчивость к лекарствам только после того, как последние на них подействуют. Одним из наиболее выдающихся защитников этого взгляда был Сирил Хиншельвуд, который развил в своей книге Химическая кинетика бактериальной клетки негенную теорию адаптации к лекарственным препаратам. Хиншельвуд считал, что в тех немногих устойчивых бактериях, которые пережили воздействие лекарственного препарата, это лекарство вызвало сдвиг равновесного состояния метаболических реакций с обычного уровня на новый, уже менее подверженный влиянию этого препарата. Книга Хиншельвуда вышла в свет в 946 г., через три года после того, как Лурия и Дельбрюк уже показали спонтанное происхождение устойчивых к фагу мутантов бактерий. Поэтому казалось бы естественным сделать допущение, что наблюдаемое у бактерий изменение от чувствительности к лекарственному препарату к устойчивости также возникает в результате спонтанного мутирования небольшой части популяции чувствительных к лекарству бактерий. В присутствии лекарственного препарата происходит, по-видимому, жесткий отбор таких устойчивых мутантов, так как они могут расти в этих условиях, тогда как все чувствительные клетки дикого типа погибают. Но на Хиншельвуда флуктуационный тест не произвел впечатления, и он опубликовал несколько правдоподобных критических разборов его интерпретации. Он был настолько уверен в правильности своей кинетической теории адаптации, что даже уже в 1953 г. писал Путем, подобным тому, который предполагается рассматриваемой [кинетической] моделью, адаптационные изменения должны происходить настолько легко, что если бы это было не так, то трудно было бы уклониться от вопроса, почему это не так . Авторитет Хиншельвуда в области химической кинетики придавал вес его взглядам, и это, вероятно, на несколько лет задержало развитие генетики бактерий на его родине, в Великобритании. [c.148]

Однако иногда наблюдается исключение из правила, что комплементировать могут только различные гены,-это в том случае, когда ген кодирует полипептид, представляющий собой субъединицу гомомультимерного белка. В клетке дикого типа активный белок состоит из нескольких идентичных субъединиц. В клетке, содержащей два различных мутантных аллеля, их продукты могут смешиваться, образуя мультимерные белки из субъединиц обоих типов. Иногда происходит взаимная компенсация мутаций, и в таком случае белок со смешанными субъединицами может быть активен, тогда как белки, содержащие только по одному типу мутантных субъединиц, неактивны. Такое явление называют межаллельной комплементацией. [c.19]

Существуют серьезные различия между ситуациями, когда кодон узнается своей собственной аминоацилиро-ванной тРНК и когда мутация позволяет супрессорной тРНК узнать новый кодон. В клетке дикого типа опреде- [c.100]

С/гьструктуры найдены только в клетках дикого типа, но не обнаружены в мутантах гесА ". Следовательно, их существование коррелирует со способностью клетки к генетической рекомбинации. Этот факт еще раз подтверждает, что /ii-структуры не случайные примеси, а имеют прямое отнощение к генетической рекомбинации. [c.448]

Когда в качестве реципиентных используются клетки агаЗ, а донорными клетками для фага Р1 служат aral, ага 2 или клетки дикого типа, и отбираются трансдуктанты Ага" , то на селективной среде наряду с крупными колониями появляются крощечные колонии, неразличимые невооруженным глазом. Сформулируйте гипотезу об их происхождении. [c.258]

Для того чтобы понять механизм неменделевского (цитоплазматического) наследования митохондриальных генов, рассмотрим, что происходит с такими генами, когда две гаплоидные клетки сливаются, образуя диплоидную зиготу. В случае, представленном на рис. 9-65, одна дрожжевая клетка несет мутацию, определяющую резистентность митохондриального белкового синтеза к хлорамфениколу, тогда как другая-клетка дикого типа-чувствительна к этому антибиотику. Мутантные гены легко выявить, выращивая дрожжи на среде с глицеролом, использовать который способны только клетки с ин-тактными митохондриями поэтому в присутствии хлорамфеникола на такой среде смогут расти только клетки, несущие мутантный ген. Наша диплоидная зигота вначале будет иметь митохондрии как мутантного, так и дикого типа. От зиготы в результате митоза отпочкуется диплоидная дочерняя клетка, которая будет содержать лишь небольшое число митохондрий. После нескольких митотических циклов в конце концов какая-то из новых клеток получит [c.59]

В принципе подобное сопряжение должно обеспечивать метаболическую кооперацию клеток, так как внутриклеточные малые молекулы, производимые лишь какой-то субпопуляцией клеток данной ткани, могут использоваться и остальными ее клетками. Хотя до сих пор не удалось прямо продемонстрировать такую метаболическую кооперацию in vivo, было показано, что она имеет место в тканевых культурах. Например, мутантные линии клеток, у которых отсутствует фермент тимидинкиназа, не способны включать в ДНК радиоактивный тимидин. Но радиоавтография после добавления в среду радиоактивного тимидина показывает, что при совместном культивировании таких клеток с нормальными клетками (клетками дикого типа), имеющими тимидинкиназу, ДНК мутантных клеток, непосредственно соприкасающихся с нормальными, оказывается меченой (рис. 12-30). Это означает, что какой-то предшественник ДНК, содержащий радиоактивный тимидин, переходит из клетки дикого типа в контактирующие с ней мутантные клетки. В аналогичных экспериментах с мутантными клетками, неспособными образовывать щелевые контакты, подобной метаболической кооперации не наблюдается. [c.215]

Выделение и исследование мтДНК позволило разрешить еще одну загадку вегетативных Pet -мутантов, с которой столкнулись Б. Эфрусси и его коллеги (1955). При скрещивании клеток некоторых гйо -мутантов с клетками дикого типа с разной частотой [c.241]

При получении ревертантов была обнаружена интересная мутация у мутанта 5. Когда этот ревертант скрестили с клетками дикого типа, потомство на 90 % бьшо протогрофным и на 10 % ауксотрофным. Объясните эти результаты. [c.57]

Для мутанта niel было получено три прототрофных клона А, Б V. В). Ютетки каждого из них скрестили с клетками дикого типа. В этих скрещиваниях были получены следующие результаты [c.57]

Б. При скретцивании ревертанта Б с клетками дикого типа 78 % потомства было прототрофным и 22 % - ауксотрофным. [c.57]

У гриба N. rassa, клетки которого имеют мутацию Arg (неспособность синтезировать аминокисло гу аргинин), был получен ревертант Arg (независимость от аргинина). В скрещивании между таким ревер-тантом и клетками дикого типа было получено потомство (гаплоидное). Какая часть этого потомства будет аргининнезависимой, если [c.61]

Какого типа потомство будет образовываться и в каком соотношении в скрещивании между двойным мутантом О Р и клетками дикого типа О Р , если эти хены находятся на расстоянии 16 сМ [c.63]

После индукции в лизогенных клетках дикого типа расщепленный репрессор можно обнаружить в клеточных экстрактах. Необходимым условием расщепления являются УФ-облучение и наличие продукта гена гес А. Если клетка-хозяин повреждена, так что ген гес А инактивирован, репрессор не расщепляется и индукция фага становится невозможной. В случае клеток, несущих некоторые мутантные формы гена гес А, УФ-облуче-ние в определенных условиях может не понадобиться индукция лизогенов в этом случае происходит просто при повышении температуры, без всякого облучения. [c.118]

В ходе второго эксперимента использовали плазмиду, детерминирующую синтез Сго под контролем /ас-репрессора. Эту плазмиду вводили в одном случае в лизогенные клетки дикого типа, а в другом-в лизогенные клетки, мутантные по Or 3. Когда синтез Сго индуцировали добавлением ИПТГ, происходила индукция только лизогена дикого типа, но не мутантного лизогена. Таким образом, связывание Сго с 0 3 запускает индукцию. [c.119]

Генотип клетки-реципиента также может определять уровень митотической стабильности YA . Например, фактором ее повышения могут явиться мутации генов SRM, которые вызывают у дрожжей координированные изменения стабильности природных и рекомбинантных генетических структур. Нами обнаружен стабилизирующий эффект мутаций srml и srm8 скорость утраты YA снижается на порядок по сравнению с этой величиной в клетках дикого типа (Смирнова и др., 1995), [c.76]

А. Предполагая, что продукты генов гесА и uvrA участвуют в различных механизмах репарации повреждений, вызванных ультрафиолетом, ответьте, какой путь более предрасположен к ошибкам Какой механизм преобладает в клетках дикого типа [c.17]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология