Гель-фильтрование хроматография

В последние годы возросло число исследований по гель-фильтрованию синтетических и природных полимеров [246]. Этот метод (называемый также гель-проникающей хроматографией) основан на том, что молекулы исследуемого вещества в зависимости от размера удерживаются в порах сорбента различное время. Растворителем вымываются молекулы большего размера в первую оче- [c.103]

Для разделения асфальтенов применяются коагуляционные [253], селективно-экстракционные [254], адсорбционные [255, 256] методы, гель-фильтрование [249, 247] и комбинирование последнего с ионообменным разделением [257], ионообменная, координационная, адсорбционная [258], тонкослойная хроматография [259] и др. Разделение асфальтенов на фракции, различающиеся по молекулярной массе, содержанию гетероатомов и металлов, представляет собой трудную задачу. К настоящему времени эта задача не решена. Предложенные методы позволяют получать фракции, отличающиеся друг от друга только по одному параметру, который плохо коррелируется с другими. Так, при разделении асфальтенов, выделенных петролейным эфиром методом дробного осаждения смесями бензола и изооктана, можно получать фракции, различающиеся молекулярной массой и полярностью [253] С ростом концентрации изооктана осаждаются наиболее низкомо- [c.105]

Наиболее полные методы, сочетающие разделение мальтенов с учетом их химической природы и размеров включают комбинации ионообменной хроматографии с гель-фильтрованием. Очередность приме- [c.58]

Гидрофильные гели. Фильтрование с помощью геля (гель-фильтрация) является одним из новейших методов распределительной хроматографии, в процессе которого гели, обладающие пространственной сетчатой структурой и свойствами молекулярных сит, широко используются для очистки и разделения веществ. [c.60]

В соответствии с определением, данным в статье 11, а], при гель-фильтрации используют водные растворы и гидрофильные гели, а при гель-проникающей хроматографии — органические растворители и гидрофобные гели. Фильтрование через гель применяется при биохимических исследованиях и при изучении природных соединений, гель-прони-кающая хроматография — для исследования синтетических высокомолекулярных соединений. Указанные методы включают также хроматографирование, или фильтрование , на молекулярных ситах 12]. Гель обычно характеризуют размерами молекул (точнее, интервалом молекулярных весов молекул), которые он достаточно эффективно разделяет. [c.399]

Подготовка исследуемого материала. Раствор белка, наносимый на колонку, должен иметь тот же состав и те же значения pH и ионной силы, что и исходный буферный раствор, которым уравновешен ионообменник. Образец переводят в исходный буферный раствор, подвергая его предварительно диализу или гель-хроматографии. Если объем пробы, предназначенный для ионообменной хроматографии, невелик, образец можно развести исходным буферным раствором. Нерастворимые компоненты удаляют центрифугированием или фильтрованием. Если [c.110]

Компоненты элюента должны иметь квалификацию не ниже указанной в выполняемой методике. После смешения элюент должен быть отфильтрован и не содержать механических примесей. После фильтрования элюенты для обращенно-фазовой хроматографии должны быть дегазированы от растворенного кислорода. Дегазацию можно производить барботажем через элюент гелия или созданием невысокого разряжения любым лабораторным вакуумным насосом (можно водоструйным насосом или даже пылесосом). Дегазация прекращается при резком охлаждении сосуда с элюентом или по времени. [c.62]

Прежде всего гель-хроматография является методом отделения очень крупных молекул от очень мелких. Это означает, что молекулярный вес первых находится за пределами границ эксклюзии данного геля, в то время как последние диффундируют в гель беспрепятственно. Эту операцию можно скорее всего сравнить с просеиванием или фильтрованием. Поэтому для нее следует употреблять термин гель-фильтрация. Однако когда речь идет о разделении близких по размерам молекул, то следует подбирать гель с такой рабочей областью, чтобы молекулярные веса всех компонентов находились в ее пределах (см. гл. II). Естественно, что в этом случае вследствие чрезвычайно малых различий между объемами выхода необходимо очень тщательно подбирать условия эксперимента. Этот вид разделения мы будем называть гель- [c.134]

В большинстве случаев по окончании хроматографирования, после того как все низкомолекулярные компоненты (соли) прошли через хроматографический слой, он остается пригодным для последующего применения и регенерировать его не требуется. Это большое преимущество гель-хроматографии. Однако после длительного использования колонки может оказаться, что твердые частицы, содержавшиеся в пробах и не удаленные при фильтровании или центрифугировании перед вводом проб, задерживаются на поверхности геля. Это приводит к закупорке колонки и снижению скорости фильтрации. В таких случаях достаточно извлечь из колонки непосредственно тот тонкий слой, в котором находятся эти примеси. [c.374]

Приготовление пробы. Обычно препаративный электрофорез в полиакриламидном геле не используют в качестве одного из начальных этапов в очистке белков и нуклеиновых кислот. Для предварительного грубого фракционирования компонентов омесей применяют методы хроматографии, высаливания или осаждения. Чтобы провести электрофоретическое разделение, пробу необходимо сконцентрировать до 5 мл для однородной системы и до 10—20 мл для неоднородной. От избытка солей можно избавиться при помощи диализа или гель-фильтрации. Концентрация солей в исследуемом растворе должна быть такой же, как в буфере концентрирующего геля. Если же этот гель не попользуется, то пробу диализуют против буфера разделяющего геля, разведенного в 5 раз. Медленное вхождение пробы в гель во время электрофореза свидетельствует о слишком высокой концентрации солей. Любой осадок, присутствующий в пробе, следует удалять центрифугированием или фильтрованием через миллипоровый фильтр, так как он может закупорить разделяющий гель. [c.117]

В настоящее время появились наиболее полные методы, сочетающие разделение мальтенов с учетом их химической природы и размеров комбинации ионообменной хроматографии с гель-фильтрованием. По-видимому, очередность применения хроматографии и гель-фильтрования не имеет значения. Например, из остаточных нефтяных фракций ионообменной хроматографией выделены кислые и основные фракции [249] и найдено, что в природных асфальтах, промышленных остаточных фракциях и окисленном битуме содержание основных компонентов выше, чем кислых. Основные фракции имеют азот- и серусодержащнх компонентов в 2—3 раза больше, чем кислородсодержащих. Содержание углерода в кислых фракциях более, а в остальных менее 80 %. В содержании водорода не наблюдается закономерностей. [c.104]

Показано, что сефадекс G-10 удобно применять для разделения сложных смесей азокрасителей, используемых в качестве хелатных агентов при флуорометрическом анализе. Эти соединения получают из о, о -диоксиазобензола путем введения одной и двух метилениминодиацетатных групп [19]. Сефадекс G-25 применяли для хроматографирования некоторых пищевых красителей [20], причем использовали как колоночную, так и тонкослойную хроматографию (в последнем случае на предметных стеклах). Эти результаты приведены в табл. 47.1. Величины Rp для тартразина, индиго-кармина и оранжевого G в 0,1%-ном растворе сульфата натрия соответствуют относительным расстояниям, пройденным красителями на колонках с сефадексом смесь этих красителей разделяли на колонке длиной б см в 0,1%-ном растворе сульфата натрия. Выход чистых красителей превышал 98%. Исследовали влияние молекулярной массы красителя на его извлечение из сефадекса водным раствором ацетона [21]. Была изучена корреляция между характеристиками набухания и параметрами элюирования для нескольких лищевых красителей в процессе гель-фильтрования [22—24]. [c.263]

Гель-проникающая хроматография представляет собой разновидность метода фракционирования на колонке, в которой разделение осуществляется по принципу молекулярного сита. Этот принцип был известен уже в начале 50-х годов, но лишь после того, как Порат и флодип [101 вновь открыли и широко использовали этот метод, он получил признание и широкое применение в научных исследованиях. Порат и Флодин опубликовали свою первую работу по фильтрованию через гель, как они назвали этот метод, в мае 1959 г. Начиная с этого момента и до 1964 г. было опубликовано более 300 работ, посвященных этому новому методу фракционирования. [c.111]

Название гель-проникающая хроматография выбрано как раз потому, что здесь разделение обусловлено различной проницаемостью гранул геля в отношении молекул растворенного вещества. Порат и Флодин назвали этот метод фильтрованием через гель, но такое название предполагает фильтрование через пластинку или короткую колонку и тем самым, вероятно, вызывает неверные представления о сущности метода. К тому же при истинном фильтровании более крупные частицы задерживаются на фильтре, а менее крупные проходят через него. В отличие от предлон енного Поратом и Флодином название гель-проникающая хроматография , очевидно, более точно отражает существо принципа разделения молекул. [c.112]

Попено и сотр. [30] обнаружили, что 90% пептидной части -кислого гликопротеипа можно удалить с помощью Flavoba terium, выращенных на 1-кислом гликопротеипе как единственном источнике углерода. После очистки смеси фильтрованием через гель и хроматографией на ионообменных смолах выделена фракция, содержащая то же количество гексоз, гексозамина и сиаловой кислоты, которое было найдено в исходном препарате. Эта фракция не содержала аминокислот. Молекулярный вес ее значительно больше 1000 (пентасахарид). [c.93]

Разделение смеси веществ цроисходит в том случае, если размеры молекул этих веществ различны, а диаметр пор зерен геля постоянен и может пропускать лишь те молекулы, размеры -которых меньше диаметра отверстий пор геля. При фильтровании раствора анализируемой смеси более мелкие молекулы, проникая в поры геля, задерживаются в растворителе, содержащемся в этих порах, и движутся вдоль слоя геля медленнее, чем крупные молекулы, не способные проникнуть в поры. Таким образом, гель-хроматография позволяет разделять смесь веществ в зависимости от размеров и молекулярной массы частиц этих веществ. Этот метод разделения достаточно прост, быстр и, что самое главное, он позволяет разделять смеси веществ в более мягких условиях, чем другие хроматографические методы. [c.225]

За последние годы широкое применение для разделения высокомолекулярных веществ и определения их молекулярной массы нашел предложенный Л. Поратом и П. Флодином метод гель-фильтрации (гель-хроматографии). Гель-хроматография состоит в фильтровании исследуемого раствора через колонки, заполненные зернами набухающего трехмерного полимера (сефадекса). Набухшие зерна сефадекса представляют собой своеобразные клетки , внутрь которых могут проникнуть путем диффузии только молекулы (ионы) подходящего размера. Более крупные молекулы проходят с фильтрационным потоком мимо зерен сефадекса (рис, 10.8). Набор различных марок сефадексов с возрастающим размером клеток позволяет отделять низкомолекулярньк вещества от высокомолекулярных, разделять макромолекулы, изучать образование ассоциатов в макромолекулярныхрастворах. [c.299]

Молекулярне-массовое распределение полимеров. Синтетические полимеры — смесь молекул различной массы. Для построения кривых распределения исходную смесь фракционируют добавлением нерастворителя, центрифугированием и хроматографией (обычно фильтрованием через гели). Затем определяют молекулярную массу каждой фракции. Кривые распределения полимергомологов по молекулярной массе подобны соответствующим кривым распределения частиц по размерам, получаемым седиментационным анализом суспензий. [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология