Порат

Объем геля, доступный для молекул растворенного вещества, очень упрощенно можно представить в виде конуса. Впервые эта модель была предложена Поратом [20]. Если предположить, что молекулы имеют сферическую форму, то вполне очевидно, что они проникнут в конус тем глубже, чем меньше их радиус г по сравнению с радиусом конуса Я. Разделив объем этого конуса Ка-У в уравнении (4)) на объем всего конуса У , Порат получил тем самым выражение для рабочей части внутреннего объема Кс/, в которое, кроме коэффициента пропорциональности к, входят только оба радиуса [c.116]

Допущения, сделанные Поратом и Сквайром относительно геометрической формы доступных областей геля, довольно произвольны однако они вполне наглядно объясняют связь между параметрами элюирования и молекулярным весом. Во всяком случае, тот факт, что выведенные уравнения подтверждаются экспериментом, говорит в пользу исходной концепции, согласно которой часть фазы геля недоступна Для молекул вещества. [c.117]

В некоторых случаях такое комплексообразование применяли для препаративного разделения низкомолекулярных соединений. Порат и др. [29] использовали тот факт, что в условиях экстракции из ацетонового порошка физиологически активные циклопептиды задней доли гипофиза (окситоцин и вазопрессин) прочно ассоциированы с сопутствующими белками (фиг. 25). Сначала эти гормоны элюируются на сефадексе [c.147]

Идея методов разделения белков, основанная на сродстве молекул, которое обнаружено в биологических системах, известна несколько десятилетий (с тех пор, как стали привязывать ферменты к нерастворимым носителям). Нерастворимые гетерогенные катализаторы имеют определенные преимущества легкость выделения из реакционной смеси, возможность осуществления непрерывного катализа и повышение стабильности ферментов. Тем не менее по ряду причин полного развития аффинная хроматография и связывание ферментов с нерастворимыми носителями достигли лишь в последние годы. Развитие обоих направлений началось с использования высокопористых гидрофильных носителей, главным образом агарозы, после разработки подходящих методов связывания (Аксен и др. [1], Порат и др. [32]). [c.10]

Впервые гели для ситового анализа жидких смесей (сефадексы) были применены Поратом и Флодином в 1959 г. [45]. Примерно в это же время было освоено промышленное производство гранулированных гелей, разделение на которых наиболее эффективно. [c.225]

Допущения, предложенные Поратом относительно геометрической формы доступных областей геля, произвольны. Однако они удобны, так как достаточно наглядно объясняют связь между размерами частиц хроматографируемых веществ и параметрами их выл1ывания из колонки. Заметим, что выведенные уравнения, несмотря на сделанные допущения, достаточно удовлетворительно согласуются с экспериментом. Изложенный Поратом принцип требует выполнения уравнения (VIII.4). В этом случае требуется, что- [c.229]

За последние годы широкое применение для разделения высокомолекулярных веществ и определения их молекулярной массы нашел предложенный Л. Поратом и П. Флодином метод гель-фильтрации (гель-хроматографии). Гель-хроматография состоит в фильтровании исследуемого раствора через колонки, заполненные зернами набухающего трехмерного полимера (сефадекса). Набухшие зерна сефадекса представляют собой своеобразные клетки , внутрь которых могут проникнуть путем диффузии только молекулы (ионы) подходящего размера. Более крупные молекулы проходят с фильтрационным потоком мимо зерен сефадекса (рис, 10.8). Набор различных марок сефадексов с возрастающим размером клеток позволяет отделять низкомолекулярньк вещества от высокомолекулярных, разделять макромолекулы, изучать образование ассоциатов в макромолекулярныхрастворах. [c.299]

Гель-фильтрацию открыли в 1959 Д. Порат и П. Флодин, к-рые показали возможность фракционирования водорастворимых макромолекул, в т. ч. белков, по мол. массе, в качестве сорбента они использовали сшитый декстрановый гель. В 1964 Д. Мур предложил с помогцью гель-проникающей хроматографии определять ММР полимеров, фракционируя их на стирол-дивинилбензольном геле. [c.413]

По Дж. Порату (1974), идеальные материалы, используемые для иммобилизации ферментов, должны обладать следующими основ-ньп и свойствами нерастворимостью высокой химической и биологической стойкостью значительной гидрофильностью достаточной проницаемостью как для ферментов, так и для коферментов, субстратов и продуктов реакции способностью носителя легко активироваться (переходить в реакционноспособную форму). [c.86]

Иммобилизация ферментов на носителях, обладающих гидроксо-группами. Наиболее расхфостраненным методом образования ковалентной связи между ферментом и полисахаридным носителем или синтетическим диольным соединением является бромциано-вый метод, который был предложен Р.Аксеном, Дж.Поратом и С.Эрнбаком в 1967 г. При обработке носителя бромцианом возникают реакционноспособные цианаты и имидокарбонаты, которые при взаимодействии с нуклеофильными аминогруппами фермента образуют производные изомочевины и уретанов [c.91]

Для проведения электрофореза на порошкообразных носителях было сконструировано большое число различных приборов. Одним из наиболее эффективных является аппарат Пората [52], в котором разделение веществ осуществляется на вертикальной термостатированной колонке, наполненной целлюлозой. После окончания процесса разделения вещества элюируют буфером и собирают при помощи автоматического коллектора фракций. [c.537]

С тех пор как Порат и Флодин в 1959 г. в качестве носителя при фракционировании белков применили первые гели из сетчатого декстрана сефадекса (Sephadex), произошло очень суш,ественное развитие этой техники. Она стала повседневной во всех лабораториях и даже в промышленных производствах, нуждаюш,ихся в выделении белков. Разработано много других носителей, все более расширяющих возможности их применения. [c.73]

Разработанная Поратом И Флодиным в 1959 г. [15] гель-фильтрация явилась большим достижением в развитии фракционирования белков по молекулярному весу. Материал, используемый в этом методе в качестве неподвижной фазы, носит фирменное название [c.23]

Предварительное разделение смеси пептидов в соответствии с их электростатическим зарядом можно осуществить с помощью свободного ионофореза (или многокамерного электрофореза), который успешно применяли Сэнгер и Туппи [72]. Однако этот метод в настоящее время полностью вытеснен гель-фильтрацией, т. е. разделением в соответствии с размерами молекул. После появления первых работ в этом направлении [44, 83] чрезвычайно полезный метод гель-фильтрации был разработан Поратом и Флодиным [61 ] позднее Флодин теоретически обосновал его [20]. [c.37]

Электрофорез на колонках по Порату То е [c.130]

За открытие распределительного варианта хроматографии Мартин и Синг в 1952 г. получили Нобелевскую премию. В 1952—53 гг. Мартин и Джеймс осуществили вариант газовой распределительной хроматографии, разделив смеси на смешанном сорбенте из силикона ДС-550 и стеариновой кислоты. С этого времени наиболее интенсивное развитие получил метод газовой хроматографии Метод привлекал внимание своей экспрессностью и простотой и быстро завоевал признание исследователей. После этого развитием хроматографических методов разделения и анализа занялась большая группа талантливых ученых и инженеров, которые развили теорию метода, создали постепенно усложнявшиеся приборы, нашли оригинальные и часто остроумные приемы и комбинации хроматографических вариантов, колонок, детекторов, систем включения и переключения колонок и детекторов. Стали регулярно проводиться хроматографические конференции и симпозиумы, первый из которых состоялся в 1956 г. в Лондоне. Хроматография стала не только интересным полем реализадИи творческих замыслов, но и весьма полезным аналитическим мето-дом. Часть блестящих ученых занимались развитием самого метода, другие — его применением. Например, Сиборг осуществил разделение нескольких десятков атймов трансурановых элементов. Исключительное значение имело создание в 1956 г. Голеем капиллярного варианта хроматографии, а в 1962 г. Порат и Фло-дин создали вариант ситовой хроматографии и применили его для разделения высокомолекулярных соединений. С середины 70-х годов начинается период интенсивного развития жидкостной хроматографии, с середины 80-х годов практическое использование флюидной хроматографии и полная компьютеризация всего хроматографического процесса. [c.15]

Гели были впервые применены для разделения жидких смесей Поратом и Флодином в 1959 г. В гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость, т е. растворитель. Часть жидкости, протекающая вдоль зерен геля (твердого носителя), выполняет роль подвижной фазы и переносит компоненты смеси вдоль колонки. Но другая часть жидкости проникает в поры зерен геля и играет роль неподвижной фазы. [c.441]

Подлинный успех хроматографии полимеров связан с открытием в 1959 г. Поратом и Флодиным [7] гель-проникающей хроматографии, впервые использованной ими для фракционирования биополимеров на сшитых декстрановых гелях. В отличие от метода Бейкера — Вильямса фракционирование здесь осуществляется намного проще и быстрее вследствие диффузионного обмена макромолекулами между фазой пористого сорбента и свободным пространством хроматографической колонки, а молеку-лярно-массовые. распределения получают автоматическим пересчетом хроматограмм в соответствии с характерной для данной хроматографической системы молекулярно-массовой зависимостью удерживаемых объемов. [c.11]

Для разделения компонентов с близкими Кл Порат и Бених предложили использовать циркуляционную хроматографию [8]. Этот прием может найти широкое применение в тех видах колоночной хроматографии, где разделение не зависит от концентрации веществ. [c.426]

В 1959 г. Флодин и Порат [30] получили продукт взаимодействия растворимого декстрана с эпихлор-гидрином этот продукт оказался универсальным гелем, который вскоре начали вырабатывать в промышленных масштабах и выпускать в продажу под торгов-вым названием сефадекс . Следствием этого открытия явилось быстрое и повсеместное распространение хроматографического метода разделения по молекулярному весу, известного теперь под названием гель-фильтрации. Первые образцы геля обладали низкой [c.24]

При рециркуляционной хроматографии и при работе на гелях с невысокой механической прочностью (см. стр. 80) оказалось целесообразным промывать столбик геля элюентом снизу вверх. Поскольку в таком случае наполнитель должен быть зафиксирован между двумя подвижными поршнями, этот способ требует специального конструктивного оформления. Порат и Бенних [44] описали первую колонку подобного типа (ее модификация выпускается фирмой ЬКВ см. табл. 11). Большинство выпускаемых колонок изготовлены из прецизионной (малированной) стеклянной трубки, в которую может быть вставлен стандартный поршень. В литературе встречаются описания и других моделей [44]. Недавно очень простую модель колонки описали Фоцетт и Моррис [16] ее легко изготовить собственными силами в любой лаборатории. В колонках, предназначенных для работы с органическими растворителями, следует применять лишь материалы, которые достаточно инертны в условиях эксперимента. [c.59]

Подобную схему использовали Порат и Бенних [44] (фиг. 15). Холостой объем колонки (5), шлангов, детектора (5) и микронасоса (/) должен быть по воз- [c.82]

Опыты с применением центрифуги были описаны впервые Флодином, Желоттом и Поратом [104], которые концентрировали таким путем фильтрат культуральной жидкости Polyporus versi olor. С помощью сефадекса G-25 (грубого), добавляемого в количестве 300 г на 1 уг фильтрата, им удалось сконцентрировать (в несколько приемов) 7,5 л до 410 мл. Целлю-лазная активность возросла при этом с 0,532 ед мл до 8,48 ед/мл, а потери общей активности составили лишь 13%. Несколько позже этот убедительный эксперимент был повторен в большем масштабе, когда 85 л сконцентрировали до ИЪ мл [105]. [c.96]

Принцип диффузии будет верен в том случае, если значения эффективных радиусов, приведенные Эккер-сом [33] в таблице, будут всегда совпадать с величинами, вычисленными по формуле (12) путем подстановки в нее значений Ка и г. Недавно Зигель и Монти [34] на основании собственных измерений и аналогичных данных других авторов вновь показали, что все три требования выполняются наилучшим образом. Независимо от них Андерсон и Штоддарт [35], преобразовав выведенные уравнения, попытались объединить обе концепции, не вдаваясь при этом в детали иных представлений о модели геля. Им удалось показать, что зависимость log г// [см. уравнения (7) и (12)] от значения Kd в некоторой области можно считать линейной. Однако, исходя из допущений, сделанных при построении моделей геля Поратом [20] и Эккерсом [33], вряд ли можно приравнивать радиус конуса [ в уравнении (7)] эффективному радиусу пор [R в уравнении (12)]. Согласно аргументации авторов, чисто формально можно считать, что обе концепции выражаются в итоге следующей общей зависимостью [c.122]

Ранее для объяснения этих аномальных явлений мы развили концепцию распределения . В большинстве же случаев наблюдаемую задержку некоторых веществ при проведении гель-хроматографии [42, 43] называют обратимой адсорбцией. Порат [42], систематически исследовавший поведение аминокислот и их производных, пептидов и небольших белков, уже давно показал, что в слое геля, помимо гель-филь-трации , имеют место и иные явления, которые в значительной степени зависят от состава элюента. Одновременно Желотт [43] определил Ка большого числа [c.125]

Состав системы растворителей на колонке с сефадексом G-25 можно изменить таким образом, что некоторые компоненты станут нерастворимыми и благодаря этому задержатся на колонке, в то время как растворимые компоненты будут элюироваться. Подобное явление имеет место, например, при дифференцировании по В. Эпштейну и М. Тану [152] так называемых эуглобулинов и псевдоглобулинов сыворотки человека. Если образец сыворотки в 1М поваренной соли поместить на колонку с G-25, уравновешенную предварительно очень разбавленным буфером, и элюировать тем же самым буфером, то вначале белки отделяются от соли. Хорошо растворимые в разбавленном растворе соли псевдоглобулины (главная часть белков сыворотки) элюируются с колонки гораздо раньше, чем Na l. Однако эуглобулины, отделившись от соли, становятся нерастворимыми. При дальнейшем элюировании они вновь растворяются в солевом растворе и так далее. В итоге они выходят с колонки вместе с фронтом поваренной соли. Порат [153] развил этот принцип дальше. Вначале в колонке с сефадексом G-100 создают возрастающий градиент концентрации соли (сверху вниз). Если теперь на колонку нанести смесь белков и элюировать водой, то компоненты смеси будут мигрировать быстрее, чем будет изменяться градиент соли. Таким образом, белки в соответствии с их растворимостью в солевых растворах выпадают в осадок в разных местах колонки, вновь растворяются по мере сдвига градиента и так далее. Таким путем (т. е. зонным осаждением) можно разделить белки одинаковых размеров, но с различной растворимостью. [c.200]

Сефадексы разработаны в 19 59 г. Поратом и Флодином (Р о г а t h J., F 1 о -d i n P., Nature, 1959, v. 183, No. 4676, p. 1657—1659) в качестве молекулярных [c.55]

Биоспецифические сорбенты (БСС) образуются в результате закрепления на поверхности носителя веществ (лигандов) с определенной биохимической специфичностью. Связанный с носителем лиганд сохраняет, по крайней мере частично, способность к взаимодействию со строго определенными веществами. Результатом этого взаимодействия является адсорбция веществ на БСС. Адсорбция имеет обратимый характер вещество можно десорбировать посредством изменения ионной силы раствора или же специфическими элюентами. Первые БСС получены Аксеном, Поратом и Эрнбаком в 1967 г. (А х e n R., Porath J., Ernba k S., Nature, 1967, v. 214, No. 5095, p. 1302—1304). [c.219]

Тот факт, что объем растворителя в неподвижной фазе, доступный для растворенного вешества, уменьшается при увеличении молекулярного веса последнего, позволил в ранних работах предложить простые геометрические теории ситового разделения. Одна из первык моделей предложена Поратом /5/. Согласно Порату, поры в неподвижной фазе имеют коническую форму, поэтому глубина, на которую могут проникнуть молекулы растворенного вещества, тем меньше, чем больше их радиус. Лаурент и Килландер /6/ предложили более реалистическую модель они допустили, что полимерные цепи, образующие матрицу неподвижной фазы, представляют собой хаотически распределенные жесткие стержни. Они использовали формулу, выведенную Огстоном /7/, чтобы показать, как изменяется коэффициент распределения сферических молекул в зависимости от их радиуса, а также от концентрации стержней и радиусов последних. Порат, а также Лаурент и Килландер подтвердили свои модели экспериментально, но примененные критерии были, возможно, недостаточно чувствительны. Исходя из данных теорий можно было бы ожидать, что разделе- [c.112]

Если сильноосновные аниониты используются нри анализе биологических материалов, то в большинстве случаев перед разделением необходимо удалить органические вещества путем сухого или мокрого озоления. Как правило, сочетание мокрого озоления хлорной кислотой с ионообменным разделением нежелательно, так как ионы перх.пората столь прочно удерживаются ионитом, что его регенерация становится затруднительной. Если определению подлежат только кальций и магний, то следует нредночесть сухое озоленпе. При анализе некоторых растворов, содержащих органические вещества, щелочноземельные металлы можно определить непосредственно в вытекающем растворе. В качестве примера упомянем метод определения кальция в моче титрованием, принадлежащий Фоссу [57]. [c.264]

Однако в последние несколько лет наблюдается широкое развитие метода. Толчком послужило открытие Поратом н сотр. [2, 3, 18] присоединения аффинанта к агарозе, активированной бром- [c.16]

Среди ионов тяжелых металлов для образования комплексов с тиольными группами белков и пептидов следует упомянуть Zn + и Си2+. Для метода, основанного на использовании хелатных гелей, содержащих эти ионы, Порат и др. [48] ввели термин ме-таллохелатная аффинная хроматография . Этот метод детально рассмотрен в разд. 7.6. [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология