Электрофорез препаративный

Методы разделения с высокой разрешающей способностью обычно имеют ограниченную емкость, и для разделения больших количеств материала не используются. При препаративном разделении первая из применяемых стадий обычно имеет большую емкость, но как следствие этого может давать плохое разрешение. Здесь применяют такие методы, как осаждение, диализ, адсорбция, жидкостно-жидкостная хроматография на колонке и противоточное распределение, Хотя их разрешающая способность хуже, чем у многих других, зато они позволяют разделить большие количества материала. На конечных стадиях очистки используют методы с высоким разрешением, например ионный обмен, препаративный гель-электрофорез, препаративную газожидкостную хроматографию. [c.139]

Электрофорез применяют для очистки различных фармацевтических препаратов. В Фармакопее СССР (изд. 10) предусмотрено установление степени чистоты по электрофоретической однородности ряда антибиотиков, витаминов и других веществ. Электрофорез (ионофорез) является одним из методов введения лечебных препаратов в организм человека. Широкое применение как аналитический и препаративный метод разделения и выделения различных лекарственных веществ и биологически активных соединений нашел электрофорез на бумаге, а также в агаровом или крахмальном геле. Эти методы применяют также при диагностике ряда заболеваний путем сравнения фракционного состава (по числу и интенсивности зон на электрофореграмме) нормальных и патологических биологических жидкостей. [c.408]

Применение электрофореза в биологических и медицинских исследованиях. В биологии и медицине щироко используются аналитические и препаративные методы, основанные на различии скоростей движения частиц или макроионов под действием приложенной разности потенциалов. В гл. XI рассматривается разделение белковых молекул в различных средах. Здесь же остановимся на применении электрофоретических методов к изучению клеточных частиц. [c.99]

Разработана препаративная сортировка клеточных частиц, основанная на различии их электрофоретической подвижности. Этот метод, названный свободным распределительным электрофорезом, нашел применение в иммунологических исследованиях. Через вертикально устанавливаемую камеру, боковыми стенками которой служат электроды, с постоянной скоростью протекает среда, в которой могут быть суспендированы клетки. В эту же камеру вводится взвесь клеток. Их путь в камере зависит [c.101]

Поскольку разные ионы обладают разной подвижностью, на основе электрофореза возможно разделение веществ, молекулы которых могут быть заряжены. К их числу относятся важнейшие биополимеры— белки и нуклеиновые кислоты. Белки содержат, как правило, много NH2- и других групп, способных присоединять протоны и тем самым заряжаться положительно. Они содержат также много карбоксильных групп (СООН), которые, ионизуясь, дают отрицательно заряженные ионы СОО . Степень протонирования и степень ионизации отдельных групп, а следовательно, и заряд белковой молекулы зависят от pH среды. В кислой среде белки заряжены положительно, в щелочной — отрицательно. Нуклеиновые кислоты содержат остатки фосфорной кислоты, которые уже в слабо кислой, а тем более в нейтральной и щелочной средах ионизированы, т. е. несут отрицательный заряд, в связи с чем нуклеиновые кислоты находятся в растворе в виде полианионов. Поэтому электрофорез является важнейшим методом препаративного разделения и анализа смесей белков и смесей нуклеиновых кислот. [c.330]

Двумерное разделение пептидов, наиример гидролизатов белков, на целлюлозных н силикагелевых пластинках, где в одном (чаш е первом) направлении используется электрофорез в тонком слое (ТСЭ) при кислом pH буфера, а во втором — распределительная ТСХ. Оно применяется как для целей идентификации и сопоставления родственных белков (например, для выявления мутационных или патологических изменений), так и в качестве препаративного метода для последуюш,его анализа аминокислотной последовательности в пептидах. [c.460]

Необходимо еще упомянуть о двух побочных явлениях, которые могут иметь место, когда пространство между электродами разделено мембраной [4, 5]. Первое из них — электроэндоосмос, сущность которого состоит в том, что через мембрану в анодное или в катодное пространство перемещается вода. Поскольку это явление в ряде случаев препятствует проведению препаративного ионофореза и электрофореза, оно подробно рассматривается в соответствующей главе. Сущность второго побочного явления состоит в том, что мембрана со стороны анодного пространства заряжается отрицательно, а со стороны катодного пространства — положительно. Данные об этих явлениях и их зависимости от качества мембран приведены в работах Мангольда [20, 21]. [c.195]

Прибор для электрофореза должен быть сконструирован так, чтобы разделенные вещества снова не смешивались и чтобы его можно было использовать для разделения в препаративном масштабе. Такие конструкции показаны на рис. 469, 470 и 471. В первом случае (рис. 469) прибор снабжен поперечными перегородками. Этот тип прибора выгоден в тех случаях, когда имеющиеся разделяемые вещества сильно отличаются по своим электрофоретическим свойствам (например, при разделении веществ противоположного знака). Во втором приборе (рис. 470) отделение чистого вещества осуществляют в коленах электрофоретической кюветы, причем плотность отдельных зон повышается в направлении ко дну кюветы. В данном случае в чистом виде можно получить только две части смеси — наиболее кислую и наиболее основную. Совсем иначе обстоит дело, когда прибор, изображенный на рис. 471, предназначен для разделения веществ в инертной пороШ- [c.530]

Несмотря на это ограничение, препаративный вариант электрофореза по Тизелиусу позволил решить ряд задач по выделению высокомолекулярных органических соединений. Для иллюстрации приведем лишь некоторые из них разделение фикоцианина и фикоэритрина [751, аллергена [151, токсинов [431 и бактериальных полисахаридов [791. [c.535]

Кроме того, электрофорез можно проводить при непрерывном пропускании растворителя через бумагу (непрерывный электрофорез). При этом избирательность разделения хотя и не повышается, но увеличивается препаративная емкость всего процесса. [c.541]

Принципиальная схема метода непрерывного электрофореза представлена на рис. 488. Теоретически этот принцип дает возможность разделить любые количества веществ, однако на практике препаративное разделение больших количеств сопряжено с целы рядом трудностей. [c.541]

Хорошее представление о кислотно-основных равновесиях в растворах аминокислот особенно важно при их разделении в аналитических н препаративных целях с помощью электрофореза и ионообменной хроматографии. [c.34]

В этом разделе будут в широком аспекте рассмотрены два опубликованных обзора [119, 75]. Совокупность, которую принято называть растворимыми белками, оказывается разнородной, даже если альбумины и глобулины рассматривать по отдельности. Их можно фракционировать, а некоторые компоненты — очищать методами, традиционно применяемыми для белков, среди которых наиболее популярными являются высаливание сульфатом аммония, ионообменная хроматография и препаративный электрофорез. [c.181]

Электрофорез — метод разделения смесей, основанный на разной подвижности компонентов в электрическом поле. Он обладает высокой разрешающей способностью и применяется как в аналитических, так и в препаративных целях. [c.243]

Разработан ряд электрофоретических методов для анализа белков и их смесей. В методе движущейся границы, или фронтального электрофореза, определяется скорость перемещения в электрическом поле резкой границы между раствором исследуемого вещества и растворителем. Для препаративного разделения смесей более удобен метод зонального электрофореза, в котором раствор исследуемого вещества помещают вначале в виде узкого слоя между двумя слоями растворителя. За достаточно большой промежуток времени вещества с различной подвижностью расходятся на значительное расстояние, их зоны перестают перекрываться и продукты разделения могут быть [c.172]

Часто целесообразно при разделении комбинировать электрофоретический и хроматографический методы. Для препаративных целей последним лучше проводить электрофорез, чтобы получить более компактные полосы и избежать возможной частичной деструкции некоторых аминокислот из-за кислотного гидролиза после элюирования с бумаги. [c.395]

Препаративный электрофорез в крахмальном блоке. Принцип метода. Под влиянием электрического поля происходит миграция белков в крахмальном блоке, в результате которой белки разделяются, а после разделения их можно элюировать из крахмала. [c.83]

С помощью электрофореза на бумаге можно выделять препаративные и идентифицировать малые количества аминокислот. Кроме того, электрофорез на бумаге лежит в основе анализа сложных [c.95]

Когда электрофорез ставят в препаративном варианте, на электрофореграмме окрашивают только края зон, как показано на фиг. 17. Согласно этим окрашенным полоскам, размечают остальные части электрофореграммы и проводят элюирование фракций. [c.99]

А. Препаративный электрофорез при pH 6,5. Б. Электрофорез в перпендикулярном направлении фракций, содержащихся в полоске 2 после окисления. В. Определение локализации компонента X, сместившегося при электрофорезе в сторону от диагонали. Г. Препаративный диагональный электрофорез. [c.107]

Ультрацентрифугирование. Как и электрофорез, ультрацентрифугирование сравнительно редко используется для препаративного выделения [c.487]

То же, выпускается также в рулонах шириной 1 м. 20—22. Мягкая бумага ( быстрая ). 23—27. Средняя бумага. 28—31. Жесткая бумага ( медленная ).. 32—37. Промытые сорта бумаг W 20—31. 38—40. Для препаративных работ. 41. Для высоковольтного электрофореза. 43— [c.151]

Зонный электрофорез предполагает использование неподвижного носителя, по поверхности или через объем которого осуществляется миграция ионов. Носители могут применяться в виде полос (например, бумаги), колонок, дисков, тонких слоев и т. д. Для зонного электрофореза чаще всего используют фильтровальные бумаги (Ватман № 1 и № ЗММ), а также ацетат целлюлозы, гели агара, крахмала и полиакриламида 24, 25]. Электрофорез осуществляется под действием электрических полей низкого (<1000 В) и высокого (от 1000 до 10000 В) напряжения. При непрерывном электрофорезе (препаративный метод с использованием низкого напряжении) образец непрерывно подается на носитель (чаще всего бумага Ватман № ЗММ или Шлейхер-Шюлль 2230). Электрофорез с высоким напряжением электрического поля проводят, как правило, на бумаге этот метод дает хорошие результаты при анализе аминокислот и других небольших молекул и непригоден для анализа больших молекул. [c.403]

Начиная с середины 60-х годов наблюдается возрастающее применение методов коллоидной химии широкое использование гемодиализа, появление гемофильтрации и сорбционной экстракорпоральной детоксикации организма, разработка препаративного электрофореза клеток и т. д. Выпускникам медико-биологических факультетов отводится особая роль в прогрессе медицины и ее техническом оснащении, в том числе в дальнейшем развитии методов коллоидной химии. [c.3]

А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 34, а), прибор Тизелиуса отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентрация белков на различных участках прямоугольной ячейки регистрируется по изменению показателя преломления. Изучение градиента показателя преломления при электрофорезе дает возможность проводить качественный анализ смеси белков и их препаративное разделение по различию электрофоретической подвижности. Этот метод назван свободным электрофорезом. [c.216]

Как и в коллоидных растворах, в растворах белков может происходить электрофорез и электроосмос. Электрофорез белков выражается в движении электрически заря/кенных частиц белка в электрическом поле. Электро4>орез белкон приобрел большое значение для препаративных н аналитических работ. Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови (иногда и мочи, СП1Н1И0М03Г0В0Й жидкости, желудочного сока и т. п.) в настоящее время— однн из широко применяемых клинических анализов. [c.218]

ТСГФ удобно использовать в качестве экономного пробного метода для выбора типа геля и скорости элюции при подготовке препаративной очистки белка гель-фильтрацией на колонке. Малое количество необходимого препарата и возможность одновременного обследования нескольких препаратов делает метод ТСГФ привлекательным и для клиники, где он может дополнить, а иногда и заменить электрофорез и электрофокусирование. [c.165]

М мочевины, 1 мМ ДТТ и 0,5% метиламина. На колонке СМ-целлюлозы (1 X 30 см) линейным градиентом концентрации Na l (О—0,4 М) смесь белков удавалось разделить примерно на 20 фракций (рис. 122). Конечно, по своему качеству это разделение уступает двумерному электрофорезу рибосомальных белков, но зато его можно вести в любом препаративном масштабе и нет проблемы элюции белков из геля. [c.311]

Тонкослойная хроматография (ТСХ английское TL ) и предшествовавший ей метод хродгатографии на бумаге до середины 70-х годов занимали центральное место в исследованиях структуры белков и нуклеиновых кислот. В последнее десятилетие эти методы были явно оттеснены электрофорезом и высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографией при высоком давлении. Оба метода превосходят ТСХ но разрешающей способности, а второй из них — и по скорости анализа. Кроме того, в результате ЖХВД экспериментатор получает уже разделенные жидкие фракции исходного препарата, в то время как после ТСХ ему надо еш,е локализовать пятна на пластинке, а в случае необходимости дальнейшего анализа — выполнить длительные операции элюции из них веш,ества. Точное и проводимое в ходе самого фракционирования определение микроколичеств вещества во фракциях прп ЖХВД, которое позволяют осуществить высокочувствительные детекторы и интегрирующие устройства современных жидкостных хроматографов, оставляет далеко позади соответствующие возможности ТСХ — ввиду плохой воспроизводимости процессов элюции из пятен и высокого уровня фона или самопоглощения в слое носителя при использовании оптических, флюоресцентных и радиоактивных методов оценки количества вещества в пятнах на пластинке без его элюции. Наконец, в препаративном варианте фракционирования количественные возможности ТСХ на несколько порядков меньше, чем у обычной колоночной хроматографии и даже у электрофореза. [c.457]

Индивидуальные рРНК в препаративных кол-вах получают из изолнр. субчастиц рибосом или ультрацентрифугированием суммарной РНК в градиенте концентрации сахарозы. Для аналит. целей индивидуальные рРНК м.б. получены с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. [c.266]

Ф. с 5 п<30-35. Разделяются методами хроматофафии и электрофореза, нек-рые низшие соли получены препаративно. Известны кристаллич. соед. NaзMglP,Ol6, Са-РвО, , [Со(Шз) (РбО )2-2Н,0. [c.128]

Для препаративного разделения полисаридов применяют колонки, наполненные стеклянным порошком, и буферный раствор 0,05 М раствор ЫагВЮт- ЮНгО). Электрофорез проводят при напряжении примерно 450 в (1,8 в/см) и силе тока 28—30 ма [34]. [c.50]

Имеется ряд аналогичных конструкций, позволяющих осуществить разделение больших количеств смесей. К ним относятся конструкция Свенсона [651, прибор Машбефа [46] и препаративный аппарат для электрофореза конструкции Тизелиуса [74]. [c.535]

Недавно предложено [30] заменять раствор УМЦ буферным раствором 0,1М трис-НС1, pH 8,4 с 2 % ДДС-Na, который эффективнее для экстрагирования белков и лучше приспособлен к их фракционированию гель-фильтрацией и электрофорезом. Для извлечения глиадинов и глютенинов с невосстановленными дисульфидными связями из обезжиренной муки рекомендуются [56] буферные растворы с нейтральным pH, содержащие ДДС-Na. Благодаря простоте этот метод экстрагирования в данном случае представляется подходящим для их препаративного извлечения. [c.179]

Гель-фильтрация особенно широко используется для удаления глютенинов, альбуминов и глобулинов, которые можно извлекать одновременно с глиадинами. Однако 7-глиадин очищали [94] гель-фильтрацией в 70 %-ном этаноле и 10 мМ трисе на носителе сефакриле G 200 в сочетании с препаративным электрофорезом в полиакриламидном геле с кислым pH. [c.183]

Если электрофорез и хроматографию на бумаге можно отнести к микропрепаративным методам, то метод разделения смеси пептидов с помощью ионообменной хроматографии следует, пожалуй, считать макропрепаративным. Его главное преимущество заключается в том, что он позволяет обрабатывать большие количества материала и получать несомненно большие выходы фракций. Применение при ионообменной хроматографии летучих буферов дает возможность избежать трудоемкой процедуры обессоливания, которая осложняла ранее предложенные методики [49, 92]. Большим достижением в области ионообменной хроматографии является введение сферических смол. Их применение способствует увеличению скорости потока фракционируемых веществ через колонку и значительно сокращает продолжительность препаративного разделения. Сферические смолы в автоматических аминокислотных анализаторах обеспечивают воспроизводимую сравнительную хроматографию пептидов с высокой разрешающей способностью, т. е. позволяют автоматически проводить анализ методом отпечатков пальцев . [c.38]

Сначала полученный гидролизат подвергают препаративному электрофорезу на бумаге, например при pH 6,5. Закончив электрофорез, бумагу высушивают и окрашивают контрольную полоску 1 (фиг. 22,А). Ориентируясь по ней, определяют месторасположение тех компонентов гидролизата, которые мигрировали на наибольшее расстояние от линии старта в сторону катода и анода, и в соответствии с этим вырезают полоску 2 шириной 1 см. Ее помещают в эксикатор, содержащий надмуравьиную кислоту [смесь перекись водорода — муравьиная кислота (1 5)], и создают вакуум. Через 2 ч инкубации при комнатной температуре полоску переносят в другой вакуумный эксикатор с NaOH и удаляют пары надмуравьиной кислоты. Затем сухую полоску пришивают к новому листу (фиг. 22,Б) на том же расстоянии от края бумаги, на [c.106]

Проведя аналитический диагональный электрофорез, определяют локализацию зоны компонента X на препаративной электрофореграмме и вырезают участок, содержащий искомую фракцию 3 (фиг. 22,В). Этот отрезок бумаги точно так же, как и аналитическую электрофореграмму, обрабатывают надмуравьиной кислотой, затем пришивают к новому листу бумаги и подвергают электрофорезу при pH 6,5 (фиг. 22,Г). На окрашенной контрольной полоске обычно можно обнаружить две зоны. Одна из них содержит компоненты, локализующиеся диагонально в данном случае они не представляют для нас интереса. Другая зона располагается ближе к аноду, чем первая. Именно в ней находятся пептиды, содержащие цистеиновую кислоту, причем чаще всего в достаточно гомогенном виде. [c.108]

Установив с помощью аналитического диагонального электрофореза локализацию зоны пептидов с гистидином на препаративной электрофореграмме, ее вырезают и после обработки парами аммиака вновь подвергают электрофоретическому разделению в препаративном масштабе. [c.111]

Боратный буфер используют и для электрофореза полисахаридов на бумаге , но в этом случае возникают трудности, связанньГе с обнаружением полисахаридов на бумаге и с сильным взаимодействием разделяемых полисахаридов с целлюлозой. Для преодоления этих трудностей в качестве носителя при электрофорезе была предложена бумага из стекло-Еолокна . Электролитом в этом случае служит 2 н. раствор едкого натра, а лля обнаружения полисахаридов могут быть использованы такие реагенты, как реактив Молиша или щелочкой раствор перманганата калия. С помощью этого метода была установлена гетерогенность многих препаратов полисахаридов, например аравийской и трагакантовой камедей, ряда галакто- и глюкоманнанов и пентозанов. Препаративный вариант этого метода — электрофорез на колонке со стеклянным порошком — был успешно использован при выделении сложного гетерополисахарида из одноклеточной зеленой водоросли hlorella pyrenoidosa . [c.487]

Выпускаются также в катушках, шириной 2 5 7,5 10 и 12,5 см и общей длиной 100 или 30 м. 1. Универсальная бумага, используется наи более часто. 4. Для электрофореза. 5. Для быстрого разделения сравнительно простых смесей 7. Для препаративных работ и электрофореза. 8. Бумага с повышенной разрешающей способностью. 9. Для электрофо. реза высокомолекулярных веществ. 13—17. Бумаги с повышенной прочностью. 18. фильтровальная бумага, покрытая с одной стороны полиэтиленовой пленкой для предохранения рабочих поверхностей от загрязнений с бумаги, Используется для работ с радиоактивными и агрессивными веществами, в, бактериологических лабораториях, в вивариях (подстилка в клетках) и т. п. Выпускается также в рулонах, шириной 46 или 92 см и общей длиной ЯО м. [c.151]

Talaromy es emersoni Осаждение сульфатом аммония, гель-фильтрация через Сефадекс О-150, хроматография на ДЕАЕ-сефа-дексе, препаративный электрофорез Четыре эндоглюканазы с одинаковой специфичностью, активностью, отличающиеся р1, Мг, содержанием углеводов [14] [c.122]

Хроматография и электрофорез являются важными и удобными методами разделения смеси веществ с целью анализа и препаративной их очистки. Исключительное значение в контроле производства промежуточных продуктов и красителей приобрела жидкостная распределительная хроматография на бумаге, в колонках и в тонком слое на различных носителях (адсорбентах). [c.275]

Сульфопроизводные удобно делить электрофоретически на бумаге или препаративно на носителе в специальной кювете. Обнаруживают зоны для неокрашенных веществ, проявляя пятна на бумаге, наложенной на носитель после электрофореза. [c.280]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология