динитрофенил пептиды

Аминогруппа аминокислоты или пептида реагирует в этом случае с 2,4-динитрофторбензолом с образованием К-(2,4-динитрофенил)производного, имеющего желтый цвет. [c.521]

Наиболее специфичным из ферментов является трипсин. Он расщепляет только пептидные связи, образованные карбоксилом аргинина и лизина. Его действие можно еще более ограничить, если динитрофени-лировать в-аминную группу лизина. Химотрипсин расщепляет связи, образованные ароматическими аминокислотами. Недавно было обнаружено, что он гидролизует и лейциновые пептиды. Менее специфичны папаин, пепсин и субтилизин. Последний позволяет, однако, получать смесь низкомолекулярных пептидов, что часто оказывается удобным прн исследованиях. [c.516]

Взаимодействие пептида с 2,4-динитрофторбензолом ДИФ-метод, Сенджер, 1945 г.). Последующий гидролиз и идентификаш1Я Н-(2,4-динитрофенил) производного а-аминокислоты хроматографическими методами позволяет определить Ы-коицевую а-аминокислоту. [c.652]

Динитрофенил аминокисл оты (ДНФ-аминокислоты) ифенилтиогидантоины (ФТГ-аминокислоты) образуются при действии динитрофторбензола [151 — 154] или фенилгорчичного масла [155] на протеины или пептиды продукты конденсации разделяют соответствующим методом. Их выделение из реакционной смеси, и в особенности их идентификация, имеет большое практическое значение, так как указанная последовательность реакций делает воз- [c.412]

Особый интерес представляет общий метод выделения триптофансодержащих пептидов, разработанный на примере сывороточного альбумина человека и цитохрома с лошади [50]. Остатки триптофана в белках количественно модифицировали с использованием высокоспецифичного реагента, 2,4-динитрофенил-сульфинилхлорида, проводили триптический гидролиз, после чего соответствующие пептиды избирательно извлекали на колонке с фиксированными анти-ДНФ-антителами. Получение сор- [c.416]

Когда влажную бумагу помещают в электрическое поле, неподвижная бумажная фаза, будучи заряжена отрицательно, вызывает эндосмотический поток жидкости по направлению к катоду. Полярность бумаги можно изменить химической обработкой [6], но обычно мирятся с наличием этого потока или нейтрализуют его до некоторой степени наложением противоположно направленного гидростатического течения. Эндосмотический поток приблизительно пропорционален градиенту потенциала и уменьшается с увеличением ионной силы буферного раствора. Его можно измерить при помощи электронейтральных или имеющих очень малую подвижность веществ. В тех случаях, когда требуется внести поправку на эндосмос в величины подвижности, подбирают такое вещество, молекулярный объем которого близок к молекулярному объему исследуемых молекул.В опытах по электрофорезу белков для этой цели используют декстраны, а в опытах по электрофорезу несложных ионов, таких, как аминокислоты или пептиды, используют глюкозу, сахарозу, перекись водорода, о-нитроанилин [6] или 2,4-динитрофенил-этаноламин [7]. [c.248]

В дальнейших исследованиях Сенгер разработал, а впоследствии довел до полного совершенства, метод, позволивший определять последовательность аминокислотных остатков в полипетидных цепях. При этом он исходил из следующих, сформулированных им на симпозиуме по аминокислотам и белкам в Колд Спринг Харборе в 1949 г. положений Методом динитрофенилирования можно определить природу концевых групп путем идентификации ДНФ-аминокислот (динитрофенил-амино-кислот.—Л. Ш.), полученных при гидролизе ДНФ-белка. Однако, если гидролизовать ДНФ-белок лишь частично, можно получить ДНФ-пептиды, исследование строения которых дает указания относительно природы аминокислот, расположенных в пептидных цепях вблизи концевых групп. ДНФ-пептиды довольно хорошо поддаются отделению от незамещенных пептидов и аминокислот путем экстракции органическим растворителем из подкисленного раствора и хроматографическим фракционированием на силикагеле. Смеси ДНФ-пептидов, полученные этим способом, гораздо менее сложны, чем продукты частичного гидролиза необработанного белка, так как отделяются только пептиды, содержащие М-концевые группы исходного белка. Для дальнейшего упрощения анализа последовательности аминокислот вместо инсулина были взяты очищенные фракции А и В, образующиеся при его окислении и содержащие только по одной концевой группе [37]. [c.133]

Пептиды обнаруживали, с одной стороны, путем нагревания бумаги до 105° с наблюдением флуоресценции в ультрафиолетовом свете, с другой стороны, опрыскиванием хроматограммы 0,025%-ным раствором нингид-рииа в этаноле. Положение на хроматограмме пептидов нейтральной (N) и кислой (К) фракций можно видеть на рис. 192. Отдельные пептиды были элюированы из хроматограммы, и методом Зангера (динитрофенил-произ]юдные) были определены N-кoпцeвыe аминокислоты. [c.494]

В цикле работ по определению структуры инсулина Сенгер и др. [35—37] впервые наблюдали дисульфидный обмен при частичном гидролизе белка в конц. НС1 на холоду. При более детальном исследовании на модельных системах, включающих бис-2,4-динитрофенил-ь-цистин (бис-ДНФ-цистин) и цистилбис-глицин или окисленный глутатион, установлено, что реакция дисульфидного обмена протекает как в концентрированных минеральных кислотах, так и в слабоосновной среде, правда, по различному механизму. В кислой среде обмен ингибируется тиолами, в основной среде тиолы служат катализаторами, а SH-реагенты ингибиторами [35]. В этой же работе найдены условия частичного гидролиза инсулина с сохранением положения дисульфидных мостиков, благодаря чему было определено их положение в молекуле гормона. В работе [41] на примере взаимодействия цистина с окисленным глутатионом изучена стабильность дисульфидных связей в различных условиях при этом показано, что дисульфидный обмен минимален при pH 2—6,5. Кроме того, при протеолизе рибонуклеазы в условиях, способствующих дисульфидному обмену, получены ци-стинсодержащие пептиды, включающие лишь две из четырех [c.165]

Рнс. 4.9. Реакция аминокислоты с 1-фтор-2,4-динитробензолом (реагентом Сенгера). Реагент назван в честь нобелевского лауреата (1958 г.) биохимика Фредерика Сенгера, который использовал его для определения первичной структуры инсулина. Вначале арилируют (с количественным выходом) всех свободные аминогруппы, после гидролиза пептида образуются 2,4-динитрофенил-производные аминокислот, обладающие яркой желтой окраской. Количественный анализ этих производных осуществляют спектрофотометрическими методами. С динитрофторбензолом реагируют также Е-аминогруппа лизина, имидазольная группа гистидина, ОН-группа тирозина и 8Н-группа цистеина. Динитрофе-нильные группы не отщепляются при кислотном гидролизе и используются для идентификации N-кoнцeвыx аминокислот в полипептидах. [c.38]

ДинитрофениЛ ПротвоАЯые пептидов-субстраты нового типа для определения активности протеолитических ферментов. Определение активности карбоксипептидаз.— Биохимия , 1973, т. 38, с. 790—796. Авт. Л. А. Люблинская, Т. И. Вогаиова, Т. С. Пасхина, В. М. Степанов. [c.372]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология