Гидролиз инсулина

При действии ЦФ на инсулин (pH 9,0) оказалось [20, 21], что из 4 остатков тирозина Туг А19 и Туг В16 реакционноспособны, а Туг А14 и Туг В26 инертны (см. рис. 2). Присутствие щелочи довольно быстро активирует Туг В26, тогда как активация Туг А14 длится несколько часов. По-видимому, именно эти остатки обнаруживаются по спектральным смещениям при триптическом гидролизе инсулина или подкислении триптического гидролизата [22—25]. Присутствие двух аномальных остатков тирозина установлено также по оценке влияния растворителя на спектр поглощения [26]. [c.351]

Метод распределительной хроматографии применяется не только для разделения аминокислот, но и для разделения производных аминокислот [45, 50], а также пептидов [51, 52]. Так, этим методом были получены ценные результаты при разделении продуктов неполного гидролиза инсулина [53] и грамицидина [54]. Методом распределительной хроматографии было показано, что норвалин и норлейцин не являются составными частями белковой молекулы [29]. Выяснилось, что норлейцин представляет собой смесь й- и /-лейцина [55]. Отсутствие норвалина в гидролизате желатины было подтверждено спектроскопией по Раману [56]. Из списка природных аминокислот необходимо исключить также оксиглутаминовую кислоту, присутствие которой в казеине не было подтверждено хроматографическим методом [57]. Возможно, что так называемая фракция оксиглутаминовой кислоты представляет собой смесь аспарагиновой кислоты с другими веществами [58]. [c.30]

Порядок чередования аминокислот в небольших полипептидных цепях, содержащих 5—10 аминокислотных остатков, может быть установлен прн помощи весьма трудоемких и сложных аналитических методов. Таким путем была установлена, например, структура циклопептида — грамицидина С (см. гл. XV). Структура различных пептидов, получаемых при частичном гидролизе инсулина и гемоглобина, была установлена главным образом путем метки концевых групп динитрофторбензолом [17,89]. Результаты этих анализов показали, что как инсулин, так и гемоглобин построены из гетерогенных фрагментов. Так, например, пептид А, полученный из инсулина, содержал глицин, изолейцин, валин и тирозин. Определение аргинина, гистидина, лизина, фенилаланина и треонина в этом пептиде дало отрицательные результаты. Пептид В, выделенный из того же препарата инсулина, содержал фенилаланин, валин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин, треонин и аланин [89] (см. гл. 111 и ХП1). Полученные данные указывают на то, что в пептидах, выделенных из инсулина, нет того периодического чередования аминокислот, о котором говорит Бергман [90]. [c.135]

А — выяснение последовательности расположения аминокислот в фенилаланиновой цепочке путем изучения обрывков цепочки. Номера в вертикальных колонках указывают положеиие каждой аминокислоты в молекуле (см. прилагаемую табличку). Каждый обрывок цепи представлен заштрихованной полоской, пересекающей соответствующие колонки. Более короткие обрывки (верхняя группа) были получены путем гидролиза инсулина кислотой. Более длинные 3-, 4- и 5-я группы) были получены под действием ферментов. Б—полная формула молекулы инсулина. Молекула состоит иэ 51 аминокислоты. Располагаются аминокислоты в виде двух цепочек, соединенных атомами серы (8 — 8). Одна из них (верхняя) состоит из 21 аминокислоты и называется глициновой, так как начинается с глицина. Вторая, начинающаяся с фенилаланина, называется фенилаланиновой. [c.101]

СТИН, полученные при ферментативном и частичном кислотном гидролизе инсулина и расфракционированные при помощи высоковольтного электрофореза, подвергали окислению надмуравьиной кислотой. Изучение строения окисленных пептидов и сравнение установленных последовательностей с известной уже структурой цепи позволило установить положение дисульфидных мостиков. Результатом всех проведенных исследований было установление полной формулы строения инсулина [385]. [c.135]

Примером белка установленного строения является инсулин. Инсулин [847, 848] различного происхождения имеет одинаковые кристаллическую форму, элементарный состав, точку плавления, оптическое вращение и физиологическую активность. Удалось установить и суммарный аминокислотный состав, причем во многом этому способствовало применение бумажной хроматографии [849, 850]. Путем частичного гидролиза инсулина и определения последовательности аминокислот в осколках был установлен порядок расположения аминокислот. С помощью динитрофторбензола [851, 852] можно определить концевые аминокислоты со свободными аминогруппами, а именно, гликоколь и фенилаланин. Концевые карбоксильные группы принадлежат аланину. Состав и последовательность аминокислот в инсулине могут различаться в зависимости от его происхождения [853, 854]. [c.126]

Гидроксильная группа свободного серина, подобно другим первичным спиртовым группам, химически мало активна. Однако она оказывает существенное влияние на свойства участка белка, соседнего с остатком серина. Близлежащие пептидные связи становятся менее прочными и легко разрываются при кислотном гидролизе Так, например, при гидролизе инсулина соляной кислотой пе удалось получить пептиды, содержащие связи, образованные аминогруппами остатков серина и треонина, — они разрушались в первую очередь. [c.207]

После определения последовательности в каждой цепи нужно было еще установить, какие полуцистиновые остатки связаны между собой. Санжер решил эту проблему (1955) частичным гидролизом инсулина в таких условиях, в которых связь S—S остается незатронутой. Образовавшиеся цистинпептиды, без отделения от других компонентов, фракционировали и окисляли до цистеиновых пептидов. Цистеино-вые пептиды каждой фракции отделяли электрофорезом и идентифицировали. Таким образом была выяснена полная структура этого белкового гормона (см. Схему ва стр. 699). [c.698]

Наиболее обстоятельными исследованиями по распаду ци-стина во время гидролиза являются, вероятно, исследования Сал-лнЕаиа, Гесса и пх сотрудников. Салливаи, Гесс и Смит [600] нашли, что при гидролизе инсулина 20 < соляной кислотой определяется несколько меньше цистина, чем при нагревании с 20% соляной в 90 г муравьиной кислоте (время гидролиза— 12 час., нагревание на масляной бане при 125—135"). Они подчеркивают, что если гидролизаты хранятся в течение некоторого времени, то наблюдается значительное уменьшение количества цистина, определяемого полярографическим методов по Брдичка или колориметрическим методом по Салливану. [c.187]

Кислотный гидролиз инсулина приводит к выделению 6 моль аммиака, что соответствует шести амидным группам аспарагина или глутамина. Чтобы определить их положение в цепях, проводилось восстановление с помощью натрийборгидрида в тетрагидрофуране, при котором (о-карб-оксильные группы аспарагиновой или глутаминовой кислот восстанавливались до спиртовых групп, а амидные группы—СО—КН, аспарагина и глутамина оставались незатронутыми. Присутствие в гидролизате аминоспиртов позволяет судить о количестве и природе дикарбоновых аминокислот. [c.163]

В цикле работ по определению структуры инсулина Сенгер и др. [35—37] впервые наблюдали дисульфидный обмен при частичном гидролизе белка в конц. НС1 на холоду. При более детальном исследовании на модельных системах, включающих бис-2,4-динитрофенил-ь-цистин (бис-ДНФ-цистин) и цистилбис-глицин или окисленный глутатион, установлено, что реакция дисульфидного обмена протекает как в концентрированных минеральных кислотах, так и в слабоосновной среде, правда, по различному механизму. В кислой среде обмен ингибируется тиолами, в основной среде тиолы служат катализаторами, а SH-реагенты ингибиторами [35]. В этой же работе найдены условия частичного гидролиза инсулина с сохранением положения дисульфидных мостиков, благодаря чему было определено их положение в молекуле гормона. В работе [41] на примере взаимодействия цистина с окисленным глутатионом изучена стабильность дисульфидных связей в различных условиях при этом показано, что дисульфидный обмен минимален при pH 2—6,5. Кроме того, при протеолизе рибонуклеазы в условиях, способствующих дисульфидному обмену, получены ци-стинсодержащие пептиды, включающие лишь две из четырех [c.165]

Приведенные в табл. 6.1 данные показывают, что аминокислотный состав представленных белков существенно различается. Например, в гормоне инсулине отсутствуют триптофан и метионин, а В миоглобине — цистеин н цистин. В табл. 6.1 содержание различных аминокислот выражено в граммах на 100 г исходного белка при суммировании получим, что на 100 г белка приходится 118 г аминокислот (с учетом одной молекулы воды на каждую гидролизуемую пептидную связь). Если же при расчете содержания аминокислот учитывать массу аминокислотных остатков, а ие свободных аминокислот, то суммарное содержание аминокислот в белке, не содержащем неаминокислотных компонентов, должно составлять 100%. Приведем пример такого расчета. При гидролизе инсулина образуется 8,6 г свободного фенилаланина на 100 г белка (табл. 6.1). В пересчете на массу аминокислотного остатка это составляет 8,6-147/165=7,7 г на 100 г белка, поскольку молекулярная масса фенилаланина 165, а масса остатка фенилаланина в белках 147. [c.168]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология