Пуллуланаза

Большинство разновидностей крахмала, важных в промышленном отношении, содержит 80% амилопектина, который лишь частично расщ.епляется в ходе ферментативного гидролиза. Под действием а-амилаз из него образуются производные декстринов, которые далее уже гидролизоваться не могут. Так как по точкам ветвления гидролиз под действием глюкоамилаз идет медленно, используют а-1,6-глюкозидазы, из них в промышленном масштабе—пуллуланазу (пуллулан-6-глюканогидролазу). [c.169]

Изучений тонкой структуры патологических гликогенов с расчленением молекулы на линейные цепи при помощи ферментов типа пуллуланазы — изоамилазы имеет большое значение для изучения гли-когенозов. Приведем в качестве примера результаты исследования гликогена при IV типе гликогеноза, называемом амилопектинозом и характеризующемся гликогеном, сходным с амилопектином (при отсутствии в тканях ветвящего фермента). Недавние исследования Уилана и сотрудников [46] подтвердили, что гликоген IV типа очень близок амилопектину по йодной реакции (пики при 525 и 540 нм соответственно), по средней единице цепи (21,7 и 21,8), средней длине наружных (14,1 и 15) и внутренних (6,6 и 5,8) ветвей. Однако профили элюции расчлененных пуллуланазой полисахаридов оказались весьма различными. [c.114]

Пуллуланаза, открытая в бактериях Aeroba ter [184], действует аналогично изоамилазе. Она легко может быть выделена в чистом состоянии. Применяется для исследования строения ветвистых глюканов (см. с. 112). Пуллуланаза отличается фантастической термостабильностью после нагревания при 100° С в течение 10 мин остается около 80% активности. [c.198]

В дальнейшем был открьгг новый фермент — пуллуланаза, избирательно расщепляющий связи а-1 6, который вместе с другими ферментами был применен для дальнейшего изучения строения а-глюканов. Результаты этих исследований привели к пересмотру схемы Мейера (см. с. 111). [c.97]

Таким образом, можно сделать заключение, что в амплопек-тинах существуют участки, в которых точки ветвления — а-1,6-связи отделены очень небольшим числом глюкозных остатков — тремя, двумя или даже одним. Косвенным подтверждением возможности близкого расположения 1,6-связей является следующий факт. Недавно из кислотных гидролизатов крахмала наряду с панозой была выделена изомальтотриоза [44] (рис. 104, III, IV), что свидетельствует о наличии в молекулах амилопектинов участков, содержащих следующие одна за другой а-1,6-глюкозидные связи. О применении для изучения строения фермента пуллуланазы см. стр. 191. [c.181]

Из ферментов микробного происхождения, катализирующих разрыв а-1,6-глюкозидных связей в крахмале, известны пуллуланаза, обнаруженная в бактериях Aeroba ter aerogenes. При добавлении его к ферментам солода крахмал полностью гидролизуется. [c.120]

Более перспективными оказались ферменты типа пуллуланазы из простейших. Недавно японские исследователи Иокобаяши и другие [c.112]

Фермент инактивируют при 140 °С в течение 10 мин. Гидролизат при 45—55 °С и pH 5,5—5,8 обрабатывают р-амилазой (100 ед/кг) и декстриназой (пуллуланазой) (1600 ед/кг) в течение 40 ч. Образуется до 75 % мальтозы. [c.150]

Известны многочисл. ферменты (гл. обр. амилазы), катализирующие гидролиз К. Избират. гидролиз а-1 - 6-связей в К. может быть осуществлен под действием изоамилазы и пуллуланазы. При действии трансглюкозилаз нек-рых бактерий К. превращ. в циклич. олигосахариды-циклоамилозы (циклодекстрины). [c.498]

Гликоген, называемый также животным крахмалом и содержащейся в печени, мускульной ткани и в особенно больших количествах в моллюсках, является двойником крахмала в животном Ш1ре и играет роль депо питательных веществ и запасного углевода животных тканей. В незначительных количествах гликоген содержится также в грибах и дрожжах. Гликогеноподобные полисахариды встречаются также в зёрнах злаков и в бактериях. Молекулярная масса гликогена составляет от 400 тыс. до 4 млн (по другим источникам от 270 тыс. до 100 млн) даже в одном препарате гликогена наблюдается широкий разброс по размерам молекул. Так, гликоген растворяется в горячей воде, образуя коллоидный раствор, дающий с иодом жёлто-красную окраску однако гликоген, извлекаемый из животных клеток, имеет частицы гораздо меньшего размера, а его легко образующаяся дисперсия в воде окрашивается иодом в красно-фиолетовый цвет (подобно амилопектину). При кислотном гидролизе гликоген превращается в В-глюкозу, так как является полисахаридом, образованным за счёт а-(1,3)-, а-(1,4)- и а-(1,6)-глюкозидных связей, причем 1,6-связи возникают и в ветвях гликогена. Из-за большей степени разветвлён-НОСТИ молекулы гликогена имеют более плотную, более компактную форму, чем молекулы амилопектина. Как и а шло-пектин, гликоген гидролизуется а-амилазами до мальтозы и изомальтозы 1,6-связи гликогена расщепляются бактериальным ферментом пуллуланазой. [c.101]

Таким образом, повышение уровня экспрессии клонированных генов бактериальных целлюлаз хотя бы до значений, свойственных исходным культурам, также насущная задача. Однако имеющийся уже сейчас арсенал методов генетической инженерии, отработанный на амилазах и пуллуланазах, дает основания полагать, что эта задача может быть успешно решена [1]. [c.105]

Если целевой продукт представляет собой растворимый Метаболит или он синтезируется внутри клетки и не секретируется вовне, то прибегают к другим методам выделения экстр)акцни, сорбции, осаждению, хроматографии, выделению с помощью мембран. Экстракцию проводят органическими растворителями из клеток (твердая фаза), например, антибиотика гризеофульвина ацетоном, или бензилпенициллина при pH 2,0—3,0 — бутил-ацетатом из культуральной жидкости после отделения клеток продуцента (система "жидкость-жидкость"), или, наконец, экстракция ферментов (в частности, пуллуланазы) в двуфазных водных системах, например, глюкана-декстрана и несовместимого с ним поли-этиленгликоля (ПЭГ-6000). [c.388]

В заключение этого раздела необходимо указать, что фермент пуллуланаза, давший так много для изучения строения крахмала и гликогена, в самое последнее время получает и практическое применение при осахаривании крахмала с промышленными целями. [c.135]

Особенно большое значение имело расщепление ветвистых а-глюканов ферментами типа пуллуланазы на цепи Л, 5 и С и изучение этих цепей, что позволило исследовать тонкую структуру амилопектина 141] и гликогена. [c.111]

Однако бактериальная пуллуланаза имеет ограниченное применение для изучения гликогена, потому что хотя она и способна гидролизовать некоторые связи ветвлений в деградированном гликогене, она не действует или мало действует на недеградированную молекулу. Другой фермент этого типа — изоамилаза дрожжей [42] — гидролизует ограниченную часть внутренних связей амилопектина и гликогена. [c.112]

На рис. 15 кривая 1 принадлежит нормальному печеночному гликогену. Резистентный к пуллуланазе, он выходит в виде однога пика [c.114]

В разделе, посвященном гликогену, приводилась новая схема строения гликогена и амилопектина, предложенная Уиланом и сотрудниками на основании применения ферментов типа пуллуланазы (см. с. 112). [c.133]

В 1974 г. Маршаллом и Уиланом [98] была определена длина цепей А и В большого числа амилопектинов и гликогенов. На полисахарид действовали -амилазой, отщепляющей мальтозные остатки и приводящей к образованию -декстринов, в которых остатки ( культи ) наружных ветвей содержали 2 и 3 глюкозных остатка. Далее на одну часть -декстрина действовали одной изоамилазой, расщепляющей все а-1,6-связи, кроме соединяющих с культями , имеющими 2 глюкозных остатка. Другую часть -декстрина обрабатывали изоамилазой -h пуллуланаза. Редуцирующая способность продукта действия изоамилазы, равная а, объясняется присутствием цепей В + 0,5 А (в -декстрине число культей с двумя и тремя глюкозными остатками статистически должно быть равным а так как изоамилаза не расщепляет а- [c.134]

Как упоминалось (см. с. 112), некоторые разновидности пуллуланазы, выделенные из простейших, способных полностью расщеплять связи а-1,6 даже в таких сильно ветвистых глюканах, к каким относится t-ликоген. К ним относится изоамилаза ytophaga. [c.198]

Применение пуллуланазы для изучения строения гликогенов и амилопектинов. Уилан [60а, 341] предложил метод определе-иия единицы цепи ветвистых полисахаридов при помощи пуллуланазы (стр. 258) — фермента, расщепляющего связи 1,6, и Р-амилазы. При совместном действии этих ферментов полностью расщепляются все цепи 1) имеющие четное число глюкозных остатков с образованием мальтозы 2) имеющие нечетное число остатков с образованием мальтозы и глюкозы. Последняя определяется специфически глюкозоксидазой. Средняя единица цепи вычисляется исходя из допущения, что полисахарид имеет одинаковое число цепей с четным и нечетным числом глюкозных остатков. Гринвуд успешно использовал этот метод для определения единицы цепи амилопектинов [60 б]. [c.191]

Б 1967 г. Уилан [60 в] разработал метод более детального изучения тонкой структуры ветвистых полисахаридов, заключающийся в 1) гидролизе 1,6-связей >при помощи пуллуланазы 2) фракционировании освобожденных цепей на молекулярных ситах 3) характеристике отдельных цепей. В соответствии со статистической картиной распределения цепи А составили 25% веса молекулы со средней длиной цепи, равной половине общей средней единицы цепи. Для цепей В найдены отклонения от статистической картины распределения. [c.192]

Биотехнология (1988) -- [ c.169 ]

Химия и биохимия углеводов (1978) -- [ c.198 ]

Углеводы успехи в изучении строения и метаболизма (1968) -- [ c.258 ]

Биотехнология - принципы и применение (1988) -- [ c.169 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.277 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология