Сопряженные ферментативные реакция

ПОЛИФЕРМЕНТНЫЕ СИСТЕМЫ. СОПРЯЖЕННЫЕ ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ РЕАКЦИИ В АНАЛИТИЧЕСКОЙ БИОХИМИИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИМИТИРУЮЩЕЙ СТАДИИ ПРОЦЕССА [c.170]

Указанные критерии могут быть весьма полезны при интерпретации кинетических данных, описывающих протекание различных сопряженных ферментативных реакций. [c.179]

Использование сопряженных ферментативных реакций. Суть этого способа регенерации заключается в том, что в реакцию, катализируемую ферментом А, дополнительно вводится фермент Б, в функционировании которого участвует сопряженная форма кофермента [c.142]

Многие ферментативные процессы взаимосвязаны, т. е. продукт одной ферментативной реакции, как правило, является субстратом другой. Если инструментально трудно идентифицировать продукт первой реакции, то берется второй фермент, который превратит первый продукт в легко детектируемое вещество. С помощью таких сопряженных ферментативных реакций не только расширяется круг определяемых веществ, но во многих случаях значительно увеличивается чувствительность анализа. [c.84]

Имеется ряд других примеров сопряженных химических реакций. Однако в непрерывных методах определения активности ферментов значительно шире используются сопряженные ферментативные реакции. Принцип здесь прост, однако встречается много подводных камней , особенно при использовании этого метода для определения активности в сыром экстракте. Продукт Р превращается сопрягающим ферментом Ер в другой продукт Q [c.296]

При выборе подходящего медиатора для амперометрического биосенсора весьма полезным может оказаться метод постояннотоковой циклической вольтамперометрии. Этот метод позволяет установить многие важные свойства медиатора. Обычно желательно, чтобы медиатор имел низкий окислительНо-восстановительный потенциал и высокую константу скорости электрохимической реакции. Последнее условие связано тем, что сигнал биосенсора не должен лимитироваться кинетикой электродных процессов. Оба параметра можно определять с помощью одноимпульсной циклической вольтамперометрии. По изменению формы вольтамперных кривых во времени можно оценивать также стабильность медиатора в зависимости от pH, давления кислорода, присутствия ингибиторов и мешающих примесей. Еще более важно, что метод дает качественную и количественную информацию об электрохимически сопряженных ферментативных реакциях, на которых основано функционирование медиаторных амперометрических биосенсоров. [c.203]

Электрохимически сопряженные ферментативные реакции [c.205]

ЭНЕРГЕТИЧЕСКИ СОПРЯЖЕННЫЕ ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ РЕАКЦИИ [c.66]

Промежуточный метаболизм складывается из двух фаз-катаболизма и анаболизма. Катаболизм-это фаза, в которой происходит расщепление сложных органических молекул до более простых конечных продуктов. Углеводы, жиры и белки, поступившие извне с пищей или присутствующие в самой клетке в качестве запасных веществ, распадаются в серии последовательных реакций до таких соединений, как молочная кислота, СО 2 и аммиак. Катаболические процессы сопровождаются высвобождением свободной энергии, заключенной в сложной структуре больших органических молекул. На определенных этапах соответствующих катаболических путей значительная часть свободной энергии запасается благодаря сопряженным ферментативным реакциям в форме высокоэнергетического соединения - аденозинтрифосфата (АТР). Часть ее запасается также в богатых энергией водородных атомах кофермента никотинамид адениндинуклеотидфосфата, находящегося в [c.379]

Механизм Ф. состоит из двух стадий — световой и темновой. Световая стадия включает собственно фотохимич. реакции и сопряженные с ними энзиматические, к-рые завершают окисление воды и образуют восстановленный никотинамид-аденин-динуклеотид-фосфат (НАДФ-Нз) и аденозинтрифосфорную кислоту (АТФ). Далее во второй стадии процесса Ф. НАДФ-На и АТФ восстанавливают молекулу СО, в цикле сопряженных ферментативных реакций, к-рые могут идти и в темноте. [c.273]

Сопряженные ферментативные реакции часто используют для количественного определения концентраций некоторых биооргани- [c.173]

В последние годы системы сопряженных ферментативных реакций находят все большее применение в тонком органическом синтезе. В качестве примера назовем реакцию окисления стероидов в присутствии 17-р-оксистероиддегидрогеназы. [c.142]

Использование для аналитических целей сопряженных ферментативных реакций открывает принципиально новые возможности ферментных электр одов. Суть их сводится к подбору мультиферментных систем, катализирующих последовательные превращения, в начале которых находится определяемое вещество, а в конце — электрохимически активный продукт ферментативной реакции. Одним из вариантов этого подхода служит создание электродов на основе иммобилизованных клеток, которые исходно содержат сопряженные мультиферментные системы. Этот метод позволяет проводить определение требуемого компонента на- основе ферментов, являющихся малостабильными in vitro, и избежать сложности, связанные с иммобилизацией нескольких ферментов. Однако время измерения на таких электродах резко возрастает, а чувствительность анализа падает. [c.82]

Существуют различные варианты иммуноанализа на основе ферментных каналов , но все они основаны на том, что в результате иммунологического связывания один из участников сопряженной пары (как правило, второй фермейт) попадает в микросреду, содержащую комплементарный фермент. Катализ эффективен только в том случае, когда молекулы двух ферментов находятся в близком контакте. Несвязавшийся конъюгат, содержащий второй фермент, вносит пренебрежимо малый вклад в аналитический сигнал, так как концентрация промежуточного продукта в растворе очень низка. Следовательно, нет необходимости в разделении связанных и свободных компонентов реакционной смеси. Особенности детектирования с помощью сопряженных ферментативных реакций обсуждены в обзоре Ал-мана и др. (Ullman et al., 1983), а применение метода для определения белков рассмотрено в данной книге (гл. 8). [c.132]

По окончании этой стадии полоску целиком погружают в проявитель. Иммунологически связанный конъюгат пероксидазы катализирует окисление 4-хлорнафтола пероксидом водорода, выделяющимся в реакции глюкозы с Ог под действием глюкозооксидазы. При этом образуется нерастворимый голубой продукт, прилипающий к полоске. Хотя пероксид водорода выделяется равномерно вдоль всей полоски, окрашенный продукт появляется только на тех участках, где локализован конъюгат пероксидазы с антигеном. Применение системы детектирования, основанной на сопряженных ферментативных реакциях, позволяет обходиться без сравнительно нестойких проявителей, содержащих пероксид водорода. Окраска формируется за 5 мин, при этом появляется цветная зона или ракета с остроконечным фронтом, высота которого зависит от концентрации антигена в образце (рис. 10-15). [c.151]

Все рассмотренные выше электрохимически сопряженные ферментативные реакции огут быть использованы для разработки медиаторных амперометрических биосенсо-эв. Кроме того, изучение такого переносчика электронов, как белок цитохром с, эказывает, что пет необходимости ограничивать круг медиаторов синтетическими гдокс-соединениями. [c.209]