Гидразинолиз пептидной связи

Белки и пептиды при нагревании с безводным гидразином подвергаются гидразинолизу. При такой обработке расщепляются все пептидные связи, и все аминокислоты, составлявшие пептидную цепь, превраш,аются в гидразиды, за исключением С-концевой, присутствующей в реакционной смеси в виде свободной аминокислоты [13]. [c.290]

Известные в настоящее время методы определения С-концевых остатков менее удовлетворительны. Для этого определения может быть использован фермент карбоксипептидаза (представляющий собой, по существу, группу сходных ферментов). Карбоксипептидаза действует только на свободные а-карбоксильные группы, подобно тому как лейцинаминопептидаза действует на свободные а-аминогруппы. Другой метод, разработанный Акабори, основан на полном гидразинолизе полипептида. Гидразин реагирует с каждой пептидной связью, превращая все аминокислоты (за исключением С-кон-цевой, карбоксил которой не участвует в образовании пептидной связи) в ацилгидразипы. С-концевую аминокислоту отделяют и идентифицируют хроматографически. Значительно реже используется метод, основанный на восстановлении С-концевой карбоксильной группы до спиртовой с помощью подходящих доноров гидрид-иона. При последующем полном гидролизе полипептида образуется аминоспирт, соответствующий С-концевой аминокислоте. Этот аминоспирт может быть выделен и идентифицирован. [c.88]

Срюди химических методов определения С-концевых аминокислотных остатков заслуживают внимания метод гидразинолиза, предложенный С. Акабори, и оксазалоновый метод В. Матсуо. В первом из них при нагревании пептида или белка с безводным гидразином при 100 — 120 °С пептидные связи гидролизуются с об- [c.38]

Условия гидразинолиза являются достаточно жесткими (80 °С, 64%-ный гидразин, 10 мин), что приводит к частичному расщеплению пептидных связей, а общий выход реакции присоединения не превышает 30 — 55%. [c.65]

Защитные группы ацильного типа не используются в качестве временных защитных группировок из-за невозможности их удаления без расщепления пептидных связей (например, бензоильная или ацетильная группы) и легко происходящей рацемизации при получении активированных производных. Формильная и трифтор-ацетильиая группы (I—2) находят применение для защиты N -групп лизина. Фталильную (3) и тозильную (4) группы используют редко из-за жесткости условий их удаления (гидразинолизом и обработкой Na в жидком аммиаке соответственно). Для получения фталиламинокислот свободные аминокислоты ацилируют в водно-щелочном растворе при 20 С карбэтоксифталимидом [c.130]

ЛОТ с гидразингидратом расщепляется предпочтительно сложный эфир, а не фталимидное кольцо и образуются гидразиды фталиламинокислот [2373] напротив, грет-бутиловые эфиры очень устойчивы к гидразинолизу, и в этом случае отщепляется только фталильный остаток [48, 230, 2280]. Лич и Линдлей [1354] отмечали, что отщепление фталильной группы у пептидов, содержащих С-концевой остаток аспарагина, связано со значительными трудностями. В обычных условиях гидразинолиза фталильных производных разрыва пептидных связей не наблюдалось, однако такой разрыв происходит при более жестких условиях реакции [25, 1622]. Для отщепления фталильной группы, кроме действия гидразиигидрата, предложена также обработка избытком фенилгидразина в присутствии три-н-бутиламина в этанольном растворе [1984—1986]. Полагают, что этот метод обладает преимуществом в отношении легкости выделения пептидов. Отщепление фталильной группы можно осуществить в очень мягких условиях действием уксуснокислого гидразина в нейтральном растворе [2005]. С этой же целью можно использовать ацетат меди в водном растворе в присутствии основного карбоната меди [848]. Экспериментальные детали этого метода не опубликованы. [c.40]

Сложноэфирные связи способны расщепляться путем гидразинолиза, аммонолиза или аминолиза. Эти свойства используются в химии пептидов для синтеза соответствующих гидразидов и амидов, а в случае подходящих эфиров — и для образования пептидных связей. В определенных условиях активированные эфиры можно использовать в качестве защитных групп для карбоксильной функции. Некоторые сложные эфиры, обладающие более высокой реакционной способностью, чем, например, метиловые или этиловые эфиры, находятся на промежуточном уровне между активированными эфирами и С-защитными группами. Такие эфиры недостаточно реакционноспособны, чтобы вызывать побочные реакции в процессе пептидного синтеза главное же их преимущество состоит в легкости превращения в соответствующие амиды и гидразиды. Осуществить такое превращение, особенно в случае высших пептидов, исходя из обычно [c.101]

Химический метод идентификации остатков, несущих а-карбоксильные группы, основан на реакции белка (или пептида) с гидразином в безводной среде при 100°С. При расщеплении пептидной связи с помощью гидразинолиза в гидразиды аминокислот превращаются все аминокислотные остатки, кроме СООН-концевого, который остается в виде свободной аминокислоты и может быть выделен и идентифицирован с помощью хроматографических методов [c.177]

Классический метод удаления фталильной группы — обработка гидразингид-ратом в воде или этаноле. Побочный продукт, гидразид, отделяется при осаждении. Гидразин— хороший нуклеофил (так называемый а-эффект), атакующий ангидридоподобную фталильную группировку в условиях, при которых не затрагиваются пептидные связи. Тем не менее при наличии эфирных связей существует опасность гидразинолиза. На другие защитные группы обработка гидразином не влияет. Обработка гидразином в гидроксилсодержащих растворителях может быть заменена обработкой фенилгидразином в других органических растворителях, причем в этом случае гидразид остается в растворе, а аминокислота выпадает в осадок. [c.74]

В альбумине С-концевого аланипа. Однако более поздние исследования с использованием метода гидразинолиза Акабори и Ниу и Френкель-Конра-та [100] показали, что в яичном альбумине С-концевым остатком является пролин с концевой последовательностью аминокислот. ..Уа1-Зег-Рго. Известное в литературе наблюдение, что аланин является С-концевым остатком, можно объяснить либо тем, что исследованный белок был разновидностью плакальбумина (раздел 10), либо тем, что связь карбоксила этого остатка аланина менее устойчива к химическим воздействиям, чем обычные пептидные связи в цепи. Поэтому наиболее вероятно, что молекула яичного альбумина [c.17]

Присутствие со-амидных связей также может способствовать протеканию побочных реакций, поскольку такие связи расщепляются гидразином гораздо легче, чем соответствующие а-амид-ные и пептидные связи. По-видимому, устойчивость ю-амидных группировок к действию гидразина зависит от природы N-защитных групп. В частности, Мак-Ларен и сотр. [1491] при взаимодействии Tos-Glu(NH2)- ys(Bzl)-OEt с гидразингидратом в н-бутаноле в течение 18 час при 40° получили Tos-Glu(NHNH2)- ys(Bzl)-NHNH2, в то время как при аналогичной реакции с соответствующим карбобензоксипроизводным образования бис-гидразида не наблюдалось. Для гидразинолиза а-амидных или пептидных связей требуется применение безводного гидразина и значительно более высокая температура реакции вплоть до 125° [25, 1622]. Таким образом, при гидразинолизе эфиров пептидов в обычных условиях не следует ожидать побочных реакций. [c.123]

Пептиды, содержащие валин, представляют интерес с двух точек зрения. Во-первых, из-за пространственных препятствий некоторые реакции (образование пептидной связи, щелочной гидролиз и гидразинолиз) затруднены в случае пептидов с С-концевым валином во-вгорых, было проведено систематическое изучение влияния валинсодержащих пептидов на рост бактерий. [c.192]

ДИТЦ-метод неприменим в случае пептидов, имеющих С-концевой Arg, поэто1му остаток Arg гидразинолизом превращают в Огп [28, 45]. Одпако при гидразииолизе часто наблюдается расщепление пептидных связей внутри молекулы, иапример по остаткам Asn, что усложняет интерпретацию результатов отщепления аминокислот. Поэтому ДИТЦ-метод не рекомендуется использовать для пептидов, содержащих С-копцевой Arg. [c.388]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология