Лейцинаминопептидаза

Рис. 48. Неконкурентная активация катионами М ++ реакции гидролиза /1-нитроанилида Ь-лейцина, катализируемого лейцинаминопептидазой. Концентрации активатора (а) — 0

При изучении гидролиза п-нитроанилида Ь-лейцина, катализируемого лейцинаминопептидазой, было найдено, что добавки катионов приводят к возрастанию каталитической константы, [c.96]

И наконец, определение N-концевой аминокислоты может быть предпринято с помощью лейцинаминопептидазы. [c.368]

Молекулярный вес папаина равен примерно 20500 его молекула содержит Приблизительно 180 остатков аминокислот, но при инкубировании с лейцинаминопептидазой от N-концевого участка цепи папаина отщепляется до двух третей остатков аминокислот без потери исходной ферментной активности [148]. [c.210]

В связи с повышенной гидролизуемостью развернутых белковых молекул представляет интерес то, что лейцинаминопептидаза сохраняет некоторую активность в 8 М растворе мочевины и 6 М растворе ацетамида и что происходящее инактивирование имеет полностью обратимый характер. Однако в растворах хлоргидрата гуанидина инактивирование протекает быстро и необратимо. [c.238]

Экскреторные ферменты синтезируются главным образом в печени (лейцинаминопептидаза, щелочная фосфатаза и др.). В физиологических условиях эти ферменты в основном выделяются с желчью. Еще не полностью выяснены механизмы, регулирующие поступление данных ферментов в желчные капилляры. При многих патологических процессах выделение экскреторных ферментов с желчью нарушается, а активность в плазме крови повышается. [c.579]

В моче человека можно обнаружить активность ряда ферментов липазы, рибонуклеазы, ЛДГ, аминотрансфераз, урокиназы, фосфатаз, а-амила-зы, лейцинаминопептидазы и др. Основные трудности при определении активности ферментов мочи, кроме а-амилазы и некоторых других, заключаются в необходимости сгущения (концентрирования) мочи и предотвращении ингибирования ферментов в процессе этого сгущения. [c.622]

Под действием лейцинаминопептидазы (ЛАП) отщепляется Ы-концевой аминокислотный остаток белка или пептида. Место атаки фермента показано на следующей схеме [c.287]

Комплекс фермент-металл обратим. Его диссоциацию можно вызвать диализом и подавить повышением концентрации иона металла. Для лейцинаминопептидазы, у которой к каждому активному центру присоединен один ион марганца, при 40°С и рН=8,0 константа диссоциации комплекса фермент-металл равна 4- 10 моля. Связь в комплексе координационного типа. Соединение иона марганца и фермента идет медленно —в продолжение нескольких часов. [c.264]

Неспособность карбоксипептидазы переваривать белок еще не указывает на отсутствие С-концевого остатка. Подобная устойчивость к действию карбоксипептидазы может быть обусловлена структурой белка. В этом случае необходима предварительная денатурация белка [39]. Устойчивыми являются также С-концевые амидные остатки и /)-формы любых аминокислот. Так же, как и в случае лейцинаминопептидазы, для получения однозначных результатов белок должен быть высокой степени чистоты, а карбоксипептидаза свободна от примеси эндопептидаз. Эндопептидазы могут быть инактивированы добавлением диизопропил-фторфосфата, который не влияет на активность карбоксипептидазы [62, 144]. [c.406]

Рис. (76. Неконкурентная активация ионами Mg гидролиза п-нит-роанилида 1-лейцина, катализируемого лейцинаминопептидазой [33], если концентрация активатора, М 1 — 0-, 2— Ы0- 3 — 5-10- 4 — МО- 5 —

Содержащие металл ферменты, такие как лейцинаминопептидаза, катализируют гидролиз Ы-концевой пептидной связи за счет образования хелатного соединения между ферментом, субстратом и ионом металла. Колмен (1963) сообщил о селективном Ы-концевом гидролизе простых пептидов ионами с-оксиа каотриэтилентетрамминкобаль-тиата. [c.692]

При деградации пептидов с N-кoицa аналогичным образом можно работать с лейцинаминопептидазой. [c.373]

Активность лейцинаминопептидазы, выражаемая числом молей субстрата, расщепляемых в минуту весовой единицей фермента, значительно выше активности карбоксипептидазы, которая в свою очередь активнее папаина—одной из наиболее эффективных протеиназ [297]. Вследствие высокой активности лейцинаминопептидазы даже менее чувствительные связи в полипептидных цепях могут гидролизоваться с заметной скоростью. Кроме того, специфичность действия лейцинаминопептидазы не ограничивается остатками определенного типа, как в случае карбоксипептидазы. Так, фермент освобождает полуцистиновые остатки из пептидных связей. Пролин и аминокислоты с полярными боковыми группами также отщепляются, хотя скорости гидролиза могут быть небольшими. В некоторых случаях подобный широкий спектр активности выгоден, но он увеличивает трудности при попытках установить последовательность сцепления аминокислот на основании данных о скорости отщепления аминокислот при разрыве пептидных связей [149]. [c.236]

Нативные р-лактоглобулин и гормон роста медленно гидролизуются лейцинаминопептидазой нативные альбумины плазмы крови человека и быка, лизоцим и рибонуклеаза оказались устойчивыми к гидролизу. Однако предварительное окисление альбумина плазмы крови челов>ека, лизоцима и рибонуклеазы надмуравьиной кислотой привело к тому, что указанные субстраты гидролизовались ферментом и аминокислоты отщеплялись в ТРИ ПРСЛедовательчости, которая была [c.236]

Окситоцин лейцинаминопептидазой гидролизуется довольно медленно, что, возможно, обусловлено наличием Ы-конце-вого полуцистинового остатка, поскольку гипертенсин [98] (см. рис. 9) примерно такого же молекулярного веса быстро расщепляется до аминокислот. Глюкагон (см. рис. 3)—полипептид с открытой цепью — также полностью гидролизуется до свободных аминокислот [149]. [c.237]

Примером наиболее полного расщепления белковой цепи при действии лейцинаминопептидазы является гидролиз меркурипапаина. При низких концентрациях фермента первые девятнадцать аминокислотных остатков отщепляются за 24 час в примерно стехиометрических количествах. Реакция, по-видимому, прекращается тогда, когда остаток аргинина становится Й-концевым. При более высоких соотношениях фермент/субстрат расщепление происходит в большей степени, пока 2/з белка не расщепится До свободных аминокислот. Белковый остаток после активации полностью сохраняет активность (в расчете на 1 моль) по отношению к бензоил арг инил амиду. Это свидетельствует о том, что активный центр молекулы находится на С-концевом участке цепи. [c.237]

Короткие последовательности с Л/-конца белков часто идентифицируют, используя ферментативную деградацию. Промышленность производит несколько аминопептидаз, отличающихся специфичностью. Лейцинаминопептидаза из почек свиньи, как следует из ее названия, гидролизует преимущественно лейцин и сходные аминокислоты с гидрофобными боковыми группами. Несмотря на то, что скорости расщепления, Л/-концевых аминокислот лежат в широких пределах, гидролиз желательно продолжать до конца, за исключением аминокислоты, предшествующей пролину. Вследствие столь широкого изменения скоростей расщепления следует соблюдать осторожность при интерпретации результатов анализа деградации, катализируемой этим ферментом. Чрезвычайно важно отбирать пробы для анализа в течение деградации. Например, при анализе белка с Л/-концевой последовательностью А1а-Ьеи-Ьеи. .. на ранних стадиях деградации выход аланина превышает выход лизина, однако при большом времени гидролиза соотношение меняется на обратное [24]. Другой фермент, выделенный из почек свиньи, ами-нопептидаза М, гораздо менее специфичен и, по-видимому, более пригоден для расщепления белков. [c.271]

Аминопептидазы. В кишечном соке открыты два фермента—аланинаминопептидаза, катализирующая преимущественно гидролиз пептидной связи, в образовании которой участвует N-концевой аланин, и лейцинаминопептидаза, не обладающая строгой субстратной специфичностью и гидролизующая пептидные связи, образованные любой N-концевой аминокислотой. Оба фермента осуществляют ступенчатое отщепление аминокислот от N-конца полипептидной цепи. [c.423]

Аминопептидазы вырабатываются в клетках слизистой оболочки кишечника (энтероцитах) сразу в активной форме. Из кишечного сока выделены два типа аминопептидаз, различающиеся по субстратной специфичности — ала-нинаминопептидаза и лейцинаминопептидаза, первая из которых гидролизует пептидную связь, образованную Л -концевым аланином, а вторая способна гидролизовать практически любую пептидную связь, образованную Л -конце-вой аминокислотой. [c.364]

Пептидгидродазы, отщепляющие N-концевые аминокислотные остатки пептидов и белков, составляют группу аминопептидаз. Необходимым условием для действия аминопептидаз является наличие у субстрата свободной а-аминогруппы. Ферменты этой группы гидролизуют и дипептиды. В структурных исследованиях белков наибольшее применение нашли лейцинаминопептидаза (ЛАП) и аминопептидаза М (АПМ), выделяемые из почек свиньи. [c.69]

Для установления точной последовательности аминокислот четыре больших пептидных фрагмента, полученных из окисленной рибонуклеазы при гидролизе ее трипсином, подвергались гидролизу с химотрипсином [78]. Миллиграммовые количества были выделены и освобождены от солей для уменьшения потерь при последующем анализе. Эти пептиды были исследованы всеми доступными методами белковой химии (автоматический аминокислотный анализ [162], ступенчатое расщепление фенилизотиоцианатом [50, 156, 157], динитрофенилирование и определение К-концевых аминогрупп [57, 77], гидролиз концевых групп карбоксипептидазой [57] и лейцинаминопептидазой [161]). [c.415]

В результате действия протеазы (так называемой лейцинаминопептидазы) на ртутное соединение папаина удалось отщепить 120 из 180 амипокислотпых остатков, содержащихся в молекуле этого фермента. Однако оказалось, что ферментативная активность остаточного фрагмента (после его выделения из ртутного соединения) не уменьшается. Подобные работы наводят на мысль, что окажется возможным выявить каталитически активную область молекул белковых ферментов. Аналогичным методом было установлено, что активные центры фосфоглюкомутазы и химотрип-сина содеря ат одну и ту же последовательность аминокислот асп-сер-гли-глу-ала (Турба, 1955 г. Кошланд, 1957 г.). [c.801]

Органическая химия. Т.2 (1970) -- [ c.692 ]

Аминокислоты Пептиды Белки (1985) -- [ c.177 , c.368 , c.373 , c.387 ]

Успехи органической химии Том 1 (1963) -- [ c.170 , c.233 ]

Аминокислоты, пептиды и белки (1976) -- [ c.288 ]

Теоретические основы биотехнологии (2003) -- [ c.2 ]

Установление структуры органических соединений физическими и химическими методами том 2 (1967) -- [ c.405 , c.406 ]

Основные начала органической химии том 1 (1963) -- [ c.813 ]

Механизмы биоорганических реакций (1970) -- [ c.125 ]

Биохимия растений (1968) -- [ c.108 ]

Методы химии белков (1965) -- [ c.181 ]

Пептиды Том 2 (1969) -- [ c.193 , c.201 , c.217 , c.273 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.301 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология