Стабилизация ферментов солями

Говоря о тепловой денатурации, важно обратить внимание на возможность протеолиза. Протеазы, как и другие ферменты, активируются при повышении температуры. Они обычно довольно стабильны, так что даже в том случае, когда нужный фермент сохраняет активность, вполне может произойти частичное расщепление белка или его небольшая модификация, что неблагоприятно скажется на качестве препарата. Именно по этой причине предпочтительно проводить нагревание в присутствии сульфата аммония (несмотря на то что под влиянием соли белки могут стабилизироваться настолько, что для их денатурации потребуется более высокая температура), поскольку высокие концентрации соли в значительной мере ингибируют протеолиз. Есть также примеры стабилизации фермента его субстратом, однако присутствие субстрата может также и дестабилизировать фермент. [c.86]

Имеющиеся в продаже детергенты редко содержат по весу более 30% поверхностно-активного соединения. К числу остальных компонентов относятся оптические отбеливатели, отбеливатели-окислители, вспомогательные пенообразователи, антикоррозийные добавки и (в ряде случаев) ферменты. Основную массу составляет носитель (наполнитель). Наполнители нужны для 1) уменьшения концентрации свободного кальция и магния с ] елью предотвращения образования неорганических осадков в противном случае выпадут в осадок соли щелочноземельных металлов и аниона детергента 2) диспергирования агрегатов почвенных частиц и стабилизации почвенных суспен- [c.294]

Способы второго типа следующие а) влияние многоатомных спиртов (типа глицерина и т. п.) в) влияние углеводов, моно- и дисахаридов, а также некоторых полисахаридов в) влияние неорганических электролитов, ионов минеральных солей г) специфическое действие некоторых ионов металлов (Са +, и др.) д) действие одних белков на другие, в том числе на ферментные белки е) действие нуклеиновых кислот ж) действие солей жирных кислот, детергентов и иных органических длинноцепочечных ионов в малых концентрациях з) действие некоторых кислых красителей и) влияние определенных видов химических модификаций, которые могут приводить к повышению устойчивости макроструктуры. К этому типу относятся еще четыре способа стабилизации, характерные для ферментов и связанные с воздействием на их активный центр. Это влияние субстратов, продуктов реакции, коферментов, простетических групп, специфических ингибиторов ферментов. [c.163]

Крахмал и лактоза замедляют скорость поглощения ферментными препаратами водяных паров. Наполнитель, используемый для стандартизации препаратов ферментов, не должен необратимо ингибировать ферменты. Крахмал оказывает стабилизирующее действие при хранении амилолитических ферментов. Показано, что после стандартизации препаратов пектолитических ферментов диатомитом, бентонитом или желатином ферментативную активность (пектиназы) следует определять после растворения препарата не в воде, а в буферном растворе с pH 3,5—4,0, что способствует десорбции фермента (аллостерического центра) с поверхности контактных участков наполнителя, т. е. возможна обратимость аллостерической специфичности. В отдельных случаях возможна необратимость конформации аллостерических участков (действие аммонийных солей на амилолитические ферменты). Наполнители могут вызывать также стабилизацию аллостерических участков (стандартизация крахмалом амилолитических ферментов). [c.170]

Полученный столь простым способом технический препарат, помимо разнообразных возможностей его технического применения, оказался удобным для дальнейшей, в том числе высокой, очистки. Из разработанных способов заслуживает наибольшего внимания кристаллизация. Технология проведения ее следующая а) растворение технического препарата в семикратном количестве воды (5+2 объема), причем нерастворившаяся часть отбрасывается б) введение в раствор сухого сульфата аммония из расчета около 600 г соли на 1 л раствора в) кристаллизация белка, протекающая 40—48 ч при комнатной температуре г) центрифугирование кристаллического осадка, растворение его д) диализ против 0,0005 МСаСЬ для удаления сульфата аммония и стабилизации фермента е) лиофильное высушивание. [c.209]

Экспериментально было показано, что стрессовый ответ у бактерий и высших растений выражается сходно. И у растений, и у бактерий начинается усиленный синтез молекул осмопротекторов, механизм действия которых состоит в установлении осмотического баланса между цитоплазмой и окружающей средой, а также стабилизации белковых молекул. В бактериях биоситнез пролина хорошо изучен, известны гены, кодирующие ферменты этого процесса. Избирательная экспрессия генов осмопротекторов может привести к увеличению адаптационных качеств растения и, следовательно, к увеличению его продуктивности. Поэтому следующим шагом на пути создания устойчивых к стрессам растений было клонирование бактериальных генов, получение векторных конструкций на основе Ti-плазмиды и введение их в растения. Полученные трансгены синтезировали и накапливали пролин в 4—6 раз интенсивнее, чем обычные растения. Трансгенные побеги могли укореняться и расти при концентрации соли в среде 20 г/л (350 мМ). [c.156]

Внутренний аппарат экстремальных галофилов, по-видимому, весьма хорошо приспособлен к высоким концентрациям солей, а в некоторых случаях даже к высоким концентрациям ионов преобладающих в цитоплазме. Об этом в первую очередь свидетельствует тот факт, что большая часть из многих изученных ферментов таких организмов нуждается в высоких концентрациях, солей либо для проявления активности, либо для стабилизации, либо для того и другого одновременно. Данному вопросу посвящено два обзора (Lanyi, 1974 azzulo, 1975). [c.382]

В методе САФ тонкий слой забуференного раствора фермента в начале опыта (при скорости вращения ротора 1000— 2000 об/мин) наслаивается на однородный раствор субстратов-в том же буфере, но с добавленным низкомолекулярным веществом. Стабилизация достигается также с помощью градиента плотности, но в этом случае он образуется уже после наслоения благодаря диффузии низкомолекулярного вещества в слой — полосу с ферментом. Для эффективного протекания этого процесса самогенерации градиента в качестве низкомолекулярных веществ применяют нейтральную соль, D2O, глицерин и т. п., но не сахарозу, у которой для таких опытов недостаточно велик коэффициент диффузии. [c.177]

Фракционирование сульфатом аммония имеет одно важное преимущество по сравнению практически со всеми другими методами — оно приводит к стабилизации белков. Суспензия белкового осадка или кристаллов в 2—3 М растворе сульфата аммония стабильна в течение многих лет. Это обычный метод хранения коммерческих ферментов. Высокая концентрация соли предотвращает также протеолиз и действие бактерий (разд. 6.2). В процессе очистки всегда бывает полезно иметь стадию, на которой образец можно оставить на ночь. Такой стадией может быть получение осадка в растворе сульфата аммония, как от-центрифугированного, так и неотцентрифугированного, хотя в некоторых случаях образец лучше хранить замороженным. [c.69]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология