Гибридизация РНК техника

Рис. 163. Схема получения моноклональных антител с помощью габридом-ной техники АС — агент слияния клеток, 1 —В-клетки из селезенки иммунной мыши, 2 — культура миеломных клеток мыши, 3 — гибридизация, 4 — гибридомы, 5 — селекция и клонирование гибридом, 6 — гибридомы, образующие моноклональные антитела, 7 —- введение гибридом, образующих моноклональные антитела, в организм сингенной мыши, 8 — клетки гибридомы, образующие моноклональные антитела, культивируемые в виде культуры ткани, 9 — выращивание гибридомных клеток, образующих моноклональные антитела, в ферментаторе, 1дкж — иммуноглобулины в культуральной жидкости, 1дас — иммуноглобулины в асцитической жидкости, 10 — высаливание 1д-ов аммония сульфатом, 11 — стандартизация 1д-ов, 12 — лиофили-зация 1д-ов.

В результате слияния протопластов получение растений-регенерантов. При помощи ферментативного гидролиза разрушаются клеточные стенки и образуются раздетые клетки, или протопласты. Они способны к слиянию, и этот процесс называется парасексуальной гибридизацией растительных клеток. Индуктором слияния является полиэтиленгликоль, а образованные гибриды обрабатываются сильным щелочным раствором или диметилсульфоксидом. Техника слияния напоминает образование гибридов животными клетками, однако имеется существенное отличие. Слияние животных клеток позволяет получить только лишь новую клетку, а слияние протопластов является основой получения нового гибридного растения. Парасексуальная гибридизация посредством слияния протопластов дает возможность скрещивать филогенетически отдаленные виды растений, которые невозможно скрестить обычным половым путем, а также комбинировать родительские гены растений в различных вариантах (рис. 31.3). [c.497]

В настояшее время для диагностики вирусных растений используют иммуноферментную технику, моноклональные антитела, метод молекулярной гибридизации меченых фрагментов РНК- и ДНК-вироидов и вирусов с вирусами тестируемого объекта. Эти методы очень чувствительны, но трудоемки и дорого-стояши. [c.199]

Бинарное соединение. Бесцветная жидкость, обладает широким интервалом жидкого состояния. Молекула имеет тетраэдрическое строение (хр -гибридизация). Термически устойчив. Дымит во влажном воздухе. Полностью гидролизуется водой. Разлагается щелочами. Восстанавливается водородом, натрием, цинком. Хлорирует оксид алюминия. Применяется в производстве особо чистого кремния для полупроводниковой техники. [c.187]

Блоттинг и техника гибридизации [c.43]

Техника прямой гибридизации удобна для выяснения происхождения различных сегментов РНК в искусственных рекомби- [c.99]

Недавно был получен вектор, с помощью которого можно конструировать искусственные дрожжевые хромосомы (YA ) [9]. Это открытие сулит переворот в картировании появляется возможность клонировать фрагменты ДНК, на порядок превышающие по размерам космидные вставки. Вероятно также, что соответствующие геномные библиотеки окажутся более представительными. Метод отпечатков пальцев (фингерпринт) пока пригоден лишь для маленьких YA , но, используя гибридизацию, можно будет присоединять к космидам и большие фрагменты. Скорее всего в будущем для картирования генома будет применяться техника подбора пар, специально разработанная для YA . [c.33]

С другой стороны, авторы использовали клетки селезенки мыши, иммунизированной эритроцитами барана. Клетки селезенки не жизнеспособны в культуре —они тоже не размножаются (тем более на НАТ-среде). Далее с помощью убитого вируса Сендай осуществляли соматическую гибридизацию клеток миеломы и селезенки. На методе гибридизации с использованием вируса Сендай останавливаться не будем, поскольку его вытеснила описанная ниже более простая техника. [c.113]

Степень гомологии, оцененная этим способом, несколько ниже, чем величины, полученные при прямой РНК-РНК-гибридизации. Однако преимущество техники ДНК-ДНК-гибридизации заключается в том, что один раз приготовленная партия меченой ДНК может быть использована в течение длительного времени. [c.102]

При помощи микроволновых спектров можно очень точно определить моменты инерции многоатомных молекул. Для случая линейной молекулы с п атомами, соединенными друг с другом тг—1 ковалентными связями, знания только одного момента инерции J недостаточно для определения длин связей. Последовательным замещением атомов молекулы изотопами можно определить п—Л моментов инерции, при помощи которых можно вычислить длину всех л —1 связей. Положение еще более сложное для трехмерных молекул однако во многих случаях были найдены удовлетворительные решения. При помощи микроволновых спектров можно определить с большой точностью дипольные электрические моменты молекул и, пользуясь так называемыми сверхтонкими структурами , измерить квадрупольпые ядерные электрические моменты. Последние дают сведения, касающиеся распределения электронов в молекуле (степени гибридизации, ионного характера и кратности связей и т.д.). Микроволновые спектры, исследование которых развилось лишь в последнее время в связи с развитием техники радара, оказались ценным методом исследования строения молекул. [c.103]

Хорошим методом исследования распределения положительного заряда в карбониевом ионе может послужить в дальнейшем изучение С-резонанса. Если при резонансной спектроскопии на протоне объектом исследования являются ядра, соседние карбониевому центру, то резонанс на С позволяет добраться до самого этого центра. В настоящее время метод требует значительного обогащения вещества изотопом С и техники двойного резонанса для детектирования сигнала в разбавленном растворе [1003, 968]. Полагают, что величина константы взаимодействия Н—1 С пропорциональна проценту 5-характера атома углерода это использовалось, чтобы подтвердить хр -гибридизацию карбониевого центра в ионах (СНз)г СН+ и (СвН5)2 СН+ [971]. [c.34]

Культура изолированных зародышей как вспомогательный метод при отдаленной гибридизации применяется не только для преодоления постгамной несовместимости, но также с целью микроразмножения ценных гибридов. В этом случае микроразмножение идет путем каллусогенеза, индукции морфогенеза и получения растений-регенерантов из каллусной ткани. Техника клонирования незрелых зародышей позволяет размножать ценные генотипы растений на ранних стадиях жизненного цикла. Еще одна возможность применения культуры зародышей — использование ее в клеточной селекции. [c.134]

Последние два десятилетия ознаменовались переворотом в технике исследования, используемой в органической химии. Широкое внедрение в практику повседневной работы таких методов установления структуры и изучения реакции, как ЯМР-спектроскопия и масс-спектрометрия, позволило по-новому подойти к истолкованию и объяснению ряда теоретических вопросов (реакционная способность молекул и их строение, передача влияния заместителей, механизмы реакций и т. п.). С помощью метода фотоэлектронной спектроскопии было показано, что связи в молекуле метана неравноценны по энергии. Этот экспериментальный факт не мог быть объяснен с помощью приема гибридизации. Все менее и менее стал удовлетворять также химиков-органиков подход к истолкованию реакционной способности молекул, стереохими-ческого хода реакций и тонкого механизма реакций, основанный на концепциях резонанса и мезомерии. Появление нового подхода к истолкованию теоретических проблем органической химии ознаменовала разработка Вудвардом и Гофманом правил орбитальной симметрии, которые сразу привлекли внимание широких кругов химиков-органиков. Эти правила базируются на методе возмущения молекулярных орбиталей (ВМО), который был разработан М. Дж. Дьюаром более двадцати лет назад. Однако метод ВМО был мало известен широким слоям органиков и не находил применения вплоть до 1969 г., когда М. Дж. Дьюар опубликовал свою хорошо известную книгу Теория молекулярных орбиталей в органической химии (книга переведена и опубликована издательством Мир в 1972 г.). В настоящее время очень многие исследователи в области органической химии используют при теоретической трактовке экспериментальных результатов метод ВМО. Нет сомнений, что в ближайшие годы метод ВМО, в основе которого лежат серьезные квантово-механические обоснования, полностью вытеснит теорию резонанса, приводящую в ограниченном числе случаев к формально верным результатам только благодаря чистой случайности. В 1977 г. издательством Мир выпущена монография М. Дж. Дьюара и Р. Доггерти Метод ВМО в органической [c.5]

Этот метод был использован во многих из тех опытов, которые будут рассматриваться в последуюпдих разделах. Обычно к фильтрам добавляют радиоактивно меченные препараты РНК. Эффективность гибридизации измеряют по метке, оставшейся на фильтре. Этот метод очень полезен, так как, за исключением некоторых вирусных геномов, состоящих из РНК, все РНК в клетке образуются в результате копирования ДНК. Техника гибридизации дает в руки исследователя эффективный инструмент, позволяющий выяснить, с какого участка синтезируется данная РНК. [c.37]

Любая клонированная ДНК может быть получена в огромных количествах, что дает возможность выделить соответствующую мРНК, используя для этого метод гибридизации. С помощью такого методического приема можно выделить мРНК, представленные всего лишь несколькими копиями в клетке, тогда как непосредственно, без применения техники клонирования, могут быть получены лишь те мРНК, которые присутствуют в относительно больших количествах. [c.122]

Одно из основных применений техники клонирования-выделение индивидуальных генов непосредственно из генетического материала. Каждый индивидуальный ген представляет собой только очень небольшую часть эукариотического генома. Например, размер генома типичной клетки млекопитающих составляет около 10 п.н., так что один ген размером, скажем, 5000 п. н. составляет только 0,00005% всей ядерной ДНК. Для идентификации столь незначительного количества материала необходимо иметь высокоспецифичный зонд, взаимодействующий только с определенными, интересующими исследователя последовательностями, чтобы выделить их из огромного количества других последовательностей. Обычно применяемый метод состоит в использовании высокомеченых радиоактивных РНК- или ДНК-зондов, гибридизация которых с геном регистрируется с помощью радиоавтографии. [c.242]

Где располагаются блоки сателлитной ДНК Развитие техники гибридизации нуклеиновых кислот позволило определить расположение последовательностей сателлитной ДНК непосредственно в хромосоме. При гибридизации in situ или цитологической гибридизации хромосомную ДНК денатурируют, обрабатывая клетки, распластанные на покровном стекле. Затем к препарату добавляют радиоактивный ДНК- или РНК-зонд. Зонд гибридизуется с комплементарными ему участками денатурированного генома. Расположение участков гибридизации можно определить с помощью радиоавтографии. [c.301]

Количество копий специфической последовательности ДНК можно оценить с помощью блот-гибридизации по Саузерну. Приготовление ДНК из культивируемых клеток описано в гл. 6 книги II данной серии [34], а техника переноса на иитроцеллю-лозный фильтр и гибридизации с клонированным зондом хорошо изложены в работе [27], и в данной главе мы не будем возвращаться к ним. Общая постановка эксперимента показана на рис. 8.8, [c.262]

Однако существуют ограничения для использования метода прямой гибридизации 1) если различия в последовательностях оснований двух РНК становятся значительными, и они широко распространены в пределах молекул, гибриды нестабильны и могут расщепляться РНКазой. Например, если имеет место 50% гомология последовательности оснований для двух РНК, распределение изменений может быть, как показано на рис. 17 в верхней части (А) непарность оснований одинаково распределена по всей длине молекулы. В этом случае защита от действия РНКазы будет незначительной. В нижней части (Б) гомологичные последовательности сгруппированы в нескольких полностью сохранившихся областях. В этом случае защита будет действительно равной 50%. Ситуация, подобная последней модели, правильна для сегментов РНК, кодирующих НА и NA. Остаточная запщта от действия РНКазы для гибридных молекул между подтипами — около 30 и 20% соответственно — существует вследствие наличия высококонсервативных областей, как было показано по профилям плавления. Таким образом, мутации, приводящие к заменам аминокислот, летальны в этих областях, в то время как в изменчивых областях допустимы многие мутации [105]. В большинстве случаев, когда защита от РНКазы гибридов РНК относительно низкая, техника дает результаты, которые не дооценивают [c.100]

Большая роль в развитии методов работы с культурами клеток и, в частности, по конструированию новых клеточных систем принадлежит советским ученым. Работы по соматической гибридизации изолированных протопластов с получением новых сортов растений ведутся в Институте физиологии растений им. К. А. Тимирязева АН СССР, Институте ботаники им. Н. Г. Холодного АН УССР, Институтах картофельного хозяйства РСФСР и УССР, за что в 1984 г. авторский коллектив во главе с чл.-кор. АН СССР Р. Г. Бутенко был удостоен Государственной премии СССР. Работы по введению бактерий в культуры растительных клеток начинались в разных лабораториях страны и в настоящее время систематически ведутся в МГУ им. М. В. Ломоносова. На основе гибридомной техники в ряде научно-исследовательских институ- [c.7]

Разработка способов индукции слияния протопластов вместе с развитием экспериментальной техники культивирования клеток in vitro, дающей возможность получения изолированных протопластов, их культивирования и образования каллуса и в дальнейшем целого растения, сформировало новый очень интересный и перспективный метод гибридизации растений — парасексуаль-ную, или соматическую, гибридизацию. [c.46]

Было известно, что клетки, зараженные каким-нибудь вирусом, могут сливаться со здоровыми клетками и образовывать гигантские многоядерные клетки. Эти наблюдения использовали И. Ока-да в Японии и Г. Харрис в Англии для разработки техники гибридизации соматических клеток. Они употребляли для гибридизации вирус Сендай, обладающий способностью сливать клетки между собой. В результате обработки этого вируса ультрафиолетовыми лучами или алкилирующим мутагеном удается повредить его РНК и оставить неповрежденной белковую оболочку. Такой инактивированный вирус утрачивает свои инфекционные свойства, ио сохраняет способность сливать соматические клетки. С помощью инактивированного вируса Сендай удалось повысить выход гибридных клеток в несколько тысяч раз. При внесении инактивированного вируса Сендай в смен]аиную культуру двух типов клеток в некотором количестве образуются многоядерные гибридные клетки — гетерокарионы, содержащие в общей цитоплазме ядра обеих родительских клеток. Большинство многоядериых гетерокарионов быстро погибает, но те из них, которые содержат по одному ядру обеих исходных клеток, часто выживают и размножаются делением. После митоза и деления цитоплазмы из двуядерного гетеро-кариона образуются две одноядерные клетки (синкарионы), т. е. настоящие гибридные соматические клетки (рис. 66). Каждая из них содержит один набор хромосом линии А и один набор линии Б. [c.168]

Обычная техника гибридизации in vitro обеспечивает получение усредненных показателей для ткани-мишени в целом. Это затрудняет интерпретацию результатов, полученных на смешанной популяции клеток разных типов, или на популяции клеток одного типа, неоднородных, например, по стадии дифференцировки, или по положению в клеточном цикле при асинхронной пролиферации, или по другим показателям. Техника гибридизации in situ позволяет в известном смысле преодолеть эти проблемы, поскольку полученные результаты относятся к индивидуальной клетке и даже к индивидуальной хромосоме. Комбинация гибридизации с цитологическим исследованием позволяет получить дополнительную информацию о локализации молекулярного гибрида в той или иной структуре ткани-мишени. И наконец, этот метод пригоден для анализа небольшого числа клеток. [c.304]

Первоначально метод гибридизации in situ был наиболее успешно применен для выявления нуклеиновых кислот, находящихся в клетках в большом количестве копий. Этим методом выявляли, например, повторяющиеся последовательности сател-литных ДНК, амплифицированные рибосомальные ДНК в ооци-тах амфибий, латерально амплифицированные ДНК в политен-ных хромосомах двукрылых, рибосомальную и 5S РНК. Более того, с помощью этой же техники были идентифицированы и локализованы накапливающиеся в клетках транскрипты генов. [c.305]

Закончить полное секвенирование генома человека намечено в 2003 году, причем 90 % генома будет проанализировано в 2001 году. Эти планы опираются на стремительный прогресс в технике и стоимости секвенирования. Если в 1990 г. эта стоимость составляла 10 за один нуклеотидный остаток, то в 1998 г. она равнялась уже 0,5. Гель-электрофорез становится возможным проводить в капиллярах, что ускоряет и повышает точность анализа. Развиваются и негелевые методы — масс-спектрометрия и гибридизация на кремниевых ДНК-чипах , на поверхности которых нанесены десятки тысяч коротких детерминированных фрагментов ДНК. [c.311]

Первые гибриды Е. oli-S. typhimurium и другие бактериальные межродовые и межвидовые гибриды получали традиционным генетическим методом — конъюгацией. Однако при этом обмен генами между клетками, относящимися к разным семействам, практически не происходит. Неограниченные возможности для объединения геномов, включая и геномы эволюционно далеких организмов, открывает техника слияния протопластов в присутствии полиэтиленгликоля. При межвидовой и межродовой гибридизации бактерий и дрожжей таким способом удается [c.438]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология