Фракционирование клеточных

Ниже мы очень кратко рассмотрим данные по анатомии клетки, полученные с помощью электронного микроскопа, и опишем соответствующие клеточные структуры затем мы обсудим методику фракционирования клеточных компонентов и некоторые свойства получаемых фракций и, наконец, попытаемся как-то оценить эти данные с точки зрения биохимии и энзимологии. [c.239]

МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНЫХ КОМПОНЕНТОВ [c.249]

При данной скорости вращения ротора время, требующееся для осаждения в центрифуге популяции гомогенных частиц, обратно пропорционально квадрату их радиусов и первой степени разности между плотностями частиц и среды и прямо пропорционально вязкости среды. Таким образом, относительно гомогенные, приблизительно сферические частицы с примерно одинаковой плотностью могут быть отнесены к разным классам на основании одних только различий во времени, необходимом для их осаждения. Именно на этом и основана классическая схема фракционирования клеточных компонентов. Вначале удаляют целые клетки и крупные обломки клеток затем — фракцию, содержащую крупные и плотные ядра (плотность ДНК при 4° равна а плотность большинства белков — только 1,188) [c.249]

Одним из главных усовершенствований в деле фракционирования клеточных компонентов было введение техники центрифугирования в градиенте плотности. Различают два типа градиентов непрерывный, создаваемый с помощью специальных устройств различной степени сложности, и прерывистый, образующийся путем осторожного наслаивания друг на друга вручную нескольких слоев с различной плотностью (при этом самый тяжелый слой обычно помещается на дно пробирки). Градиенты плотности используют для двух различных целей. [c.250]

Рис. 5.9. Фракционирование клеточных компонентов с помощью центрифуги. Развиваемые центрифугой центробежные ускорения измеряются числом g(g — ускорение силы тяжести).

Биохимический анализ часто сопряжен с разрущением тонкой структуры клеток. Однако в настоящее время разработаны методы мягкого фракционирования клеточного содержимого, целью которых является сохранение функции различных клеточных компонентов. Подобно тому как ткань можно разделить на составляющие клетки различных типов, клетки можно разделить на ее функциональные органеллы и макромолекулы. В этом разделе мы сосредоточим внимание на методах, позволяющих проводить очистку органелл и белков Родственные методы мечения макромолекул радиоизотопами и антителами, равно как и чрезвычайно эффективные методы анализа ДНК и функции генов, обсуждаются в последующих разделах. [c.208]

Рис. 4-47. Типичные результаты, полученные при очистке белка различными методами хроматографии. В данном случае подлежащий фракционированию клеточный экстракт сначала пропускали через колонку, заполненную ионообменной смолой (А). Затем колонку промывали и связавшиеся белки элюировали раствором, содержащим постепенно нарастающую концентрацию соли. Белки с наименьшим сродством к ионообменной смоле проходят через колонку не задерживаясь и собираются со дна колонки в первых порциях элюата. Остальные белки элюируются соответственно сродству к ионообменной смоле. Для элюирования белков, связывающихся со смолой наиболее сильно, требуется наивысшая концентрация соли. Исследуемый белок элюировался в виде узкого пика он был выявлен по ферментативной активности. Фракции с такой активностью собирали и наносили на вторую колонку для гель-фильтрации (Б). Фракцию все еще недостаточно очищенного белка выявляли по ферментативной активности активные фракции собирали и очищали до гомогенного состояния на колонке (В), содержащей иммобилизованный

Фракционирование клеточного содержимого 208 4.6.9. [c.511]

Природу клеточной оболочки определяют путем разрушения клеток и фракционирования клеточных структур, благодаря чему появляется возможность ясно различить упорядоченную тонкую структуру слоев клеточной стенки. Этот прием позволяет разделить и сделать видимыми такие компоненты, как мембраны, мезосомы, другие цитоплазматические мембранные системы, газовые вакуоли, метаболические гранулы, рибосомы, жгутики, ворсинки и т. д. (Гидродинамические силы, возникающие при отборе раствора шприцем или при чрезмерно интенсивном пропускании его через пипетку, могут привести к отрыву жгутиков и ворсинок от клеточной поверхности.) Краситель проникает в периплазма-тическое пространство между мембраной и клеточной стенкой, и, благодаря тому что он заполняет все образуемые мембраной углубления, выявляются очертания мезосом. Это в свою очередь позволяет быстро (и обычно точно) определить, какую бактерию изучают —грам-отрицательную или грамположительную. [c.107]

Для разрушения клеток применяют разнообразные ультразвуковые генераторы с вибрирующим пестиком. Высокочастотная вибрация наконечника пестика вызывает кавитацию, т. е. образование микроскопических пузырьков газа, движущихся с большой скоростью вблизи наконечника. Порождаемые этими быстро движущимися пузырьками большие гидродинамические силы приводят к разрушению клеток. Такой метод разрушения заманчив, так как подобные дезинтеграторы недороги и эффективны. Однако методу ультразвукового разрушения присущи недостатки, ограничивающие его применение в исследованиях, связанных с фракционированием клеточного содержимого. [c.142]

Распределение ферментов по субклеточным орга-неллам изучают после предварительного фракционирования клеточных гомогенатов путем высокоскоростного центрифугирования, определяя содержание ферментов в каждой фракции (см. гл. 2). [c.71]

Строение ГМЦ трав изучено сравнительно мало [21, 180, 227], в основном советскими учеными [22, 25, 49, 50]. В большей степени рассматривались полисахариды стеблей, в меньшей — листьев и семян. По данным фракционирования, клеточные стенки этих растений содержат ксиланы, галактаны, маннаны, ксилоглюканы в свободном состоянии и ковалентно связанные с белковыми веществами и лигнином. К числу распространенных многолетних бобовых трав относятся люцерна, клевер, эспарцет, донник, однолетних — вика, сераделла и др. В больших количествах выращиваются многолетние злаковые травы тимофеевка, житняк, овсяница, райграс, однолетние — суданская трава, могар и др. Имтродуцируются в сельское хозяйство борщевик, сида, окопник, гсрец Вейриха, сильфия катран, перко. [c.114]

Рис. 13-24. Фракционирование клеточного экстракта методом дифференциального центрифугирования. Клеточная мембрана разрушается силами трения в гомогенизаторе с вращаю-ищмся поршнем. После удаления остатков соединительной ткани и обрывков кровеносных сосудов при помоцщ сита нз нержавеющей стали клеточный экстракт центрифугируют несколько раз, постепенно увеличивая скорость вращения ротора.

Однако существенные сдвиги в изучении биологии нуклеиновых кислот произошли лишь в 40-х годах. Использование новых методов цитохимии и фракционирования клеточного содержимога позволило установить, что ДНК и РНК являются нормальными компонентами всех клеток — как растительных, так и животных, причем ДНК локализована в ядре, а РНК встречается и в цитоплазме [10, 11, 12, 13, 14, 18]. Более того, подобного рода исследования доказали, что в интерфазе и при митозе в ядре ДНК сосредоточена, по-видимому, в хромосомах. Последнее наблюдение- [c.12]

Значительная часть всех клеточных компонентов, включая многие ферменты, питательные вещества и макромолекулярные проду1 ты, находится, по-видимому, в свободном состоянии в цитоплазме или клеточном соке. Это видимое отсутствие структуры, возможно, является лиц(ь иллюзией, возникающей в силу нашей неспособности рассмотреть и исследовать организацию этих комионентов in situ или после разрушения клеток и фракционирования клеточного содержимого. [c.248]

Збарский И. Б., Георгиев Г. П. Новые данные по фракционированию клеточных ядер печеии крыс и химическому составу ядериых структур // Там же, 1959, Т, 24, С, 192—199, [c.241]

Разработаны методы выделения ядерной ДНК из каллуса, листьев, протопластов и отдельных клеток. В каждой лаборатории используют определенные варианты методик, которые обычно -подразумевают разрушение свежего растительного материала, удаление неразрушенной ткани фильтрованием, фракционирование клеточных компонентов дифференциальным центрифугированием, обработку ядер ДНКазой, лизис, депротеинизацию и последующую очистку нуклеиновых кислот в градиенте плотности s l/БЭ [6, 16]. В данном разделе изложены методики, которые можно взять за основу при разработке способов выделения ядерной ДНК из различного растительного материала. Кроме того, ядра, выделенные, как указано ниже, могут исполь- [c.254]

Если инкубировать клетки без добавления актиномициша В, то в течение 100 с включение меченого уридина продолжается с начальной скоростью, а затем скорость включения снижается При фракционировании клеточного содержимого было показано, что более 95 % радиоактивности обнаруживается во фракции РНК. [c.51]

Фракционирование нуклеиновых кислот. В 1965 г. Ричардс с сотр. [686] предложили метод электрофореза в но лдакриламидном теле для фракционирования клеточных рибонуклеиновых кислот, а затем Бишоп с сотр. [204 использовали этот метод для фракционирования вирусных нуклеиновых кислот. [c.187]

Вирусоспсцифичпые, связанные с мембранами структуры, если оии существуют, могут оказаться очень лабильными и неспособными выдержать обработку, применяемую для разрушения клеток и фракционирования клеточного содержимого. [c.165]

Впервые сайт-специфические белки, связывающиеся с ДНК, были обнаружены у бактерий. С помощью генетического анализа у этих микроорганизмов удалось доказать существование регуляторных белков, таких как репрессор 1ас-оперона, репрессор бактериофага лямбда и сго-белок. Эти белки были выделены при последовательном фракционировании клеточных экстрактов на хроматографических колонках, а специфически связывающие их участки ДНК определены методом футприн-тинга (см. разд. 4.6.6). Аналогичными методами были выделены и охарактеризованы пфвые сайт-специфические ДНК-связывающие белки у эукариот Т-антиген вируса ЗУ4о, фактор транскрипции ТРИМ и рецептор стероидного гормона. [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология