Антитела человека

Моноклональные антитела человека Несмотря на кажущуюся перспективность иммунотерапии, этот метод имеет и ряд ограничений, связанных с применением моноклональных антител животных и процедурой присоединения к ним нужных молекул. Сам процесс химического присоединения весьма неэффективен, присоединение происходит случайным образом, а кроме того, при этом может снижаться ферментативная активность активатора плазминогена или других веществ, используемых в терапии. И наконец, если предполагается многократное введение препарата, необходимо использовать антитела человека, а не животных, чтобы предотвратить возникновение перекрестных иммунных реакций и сенсибилизацию пациента. [c.214]

Трансплантация стволовых клеток иммунной системы человека сй-мышам и получение линий трансгенных мышей - весьма трудоемкие способы производства моноклональных антител человека. Поэтому ученые пытаются создать генноинженерные методы получения антител человека, которые можно использовать в качестве терапевтических средств, и эффективных бифункциональных белков, способных связываться с мишенью и разрушать ее. [c.215]

Гибридные моноклональные антитела человека и мыши [c.215]

Для эффективной работы последней из описанных систем необходимо, чтобы а) моноклональное антитело, связанное с ферментом, переводящим лекарственное вещество в активную форму, было в достаточной степени очищено и имелось в нужном количестве б) связывалось с высокоспецифичным для клетки-мишени белком в) бьшо стабильным в физиологических условиях, но в то же время быстро выводилось из кровотока 2) при необходимости могло проникать в опухолевую ткань, обеспечивая действие препарата на все ее клетки. В этом случае мишенями оказываются строго определенные клетки, что позволяет использовать лекарственное вещество в гораздо меньших дозах, чем при прямом введении. Применение в такой системе моноклональных антител мыши может приводить к развитию иммунного ответа, поэтому очень важно использовать фрагменты антител человека или антител, максимально сходных с ними по структуре. [c.213]

Создание специфических антител, не вызывающих перекрестных реакций, представляет собой довольно трудную задачу, поскольку получение антител человека путем традиционной гибридомной технологии сталкивается с рядом проблем. [c.214]

Хромосомы человека в клетках, полученных слиянием лимфоцитов человека с клетками миеломы мыши, нестабильны, поэтому трудно получить клетки, способные вырабатывать моноклональные антитела человека. [c.214]

Таким образом, для получения антител человека необходимо разрабатывать другие подходы. [c.214]

Конструирование химерных молекул, о которых шла речь выше, — это первый этап в создании моноклональных антител мышей и крыс, обладающих сходством с антителами человека. Другой подход состоит в замещении только DR-участков человеческих антител фрагмента- [c.216]

К настоящему времени этим методом получено более 50 различных моноклональных антител, обладающих сходством с антителами человека. К сожалению, данная технология, являясь весьма эффективной и универсальной, довольно дорогостоящая и требует больших затрат вре- [c.217]

Как получить моноклональные мышиные антитела, максимально близкие по структуре к антителам человека Почему они необходимы [c.226]

Набор генетических элементов, обеспечивающих образование множества разных Н-цепей антител человека, включает около 95 Уд-доменов, 30 Dj -доменов, 6 Т -доменов и 5 основных константных (Са, Су, С5, Се, Сц) доменов. Локус к-генов содержит примерно 76 Ук-доменов, 5 jK-доменов и один константный (Ск) участок (рис. 19.9). Размер Н-локусов и к-генов - от 1 до [c.429]

Чтобы решить эту задачу, мышиные гены Н-и к-цепей были заменены ( нокаутированы ) небольшим участком кластера генов Н-цепи человека (который включал 4 Уд-домена, 16 Од-доменов, 6 Тд-доменов, Су и Сц) и кластера генов к-цепи человека (содержащего 4 Ук-домена, 5 jK-доменов и Ск). Трансгенные мыши с таким набором генов антител человека синтезировали человеческие антитела к некоторым антигенам кроме того, бьши созданы гибридомы, продуцирующие человеческие моноклональные антитела. Однако разнообразие человеческих антител, продуцируемых такими трансгенными мышами, было невелико вследствие ограниченности набора вариабельных сегментов Н- и к-цепей. Чтобы решить эту проблему, создали YA с большим числом генов вариабельных участков Н- и к-цепей гемоглобина человека. [c.429]

Расскажите, как с помощью трансгеноза можно получать моноклональные антитела человека. [c.441]

Антитела человека имеют мол. в. 160 000 и размер частиц 236 X 3 А, однако в крови обнаруживается нек-рое количество антител с мол. в. ЗОО ООО — 500 ООО. Антитела с мол. в. 900 ООО присутствуют в крови нек-рых животных (лошади, коровы, свиньи). [c.112]

Ф и г. 255. Аминокислотные замены, обнаруженные в различных точках вариабельного участка легкой цепи различных антител человека. [c.521]

Бернет считал, что такое разнообразие вызывается мутациями в определенной линии клеток крови в ходе эмбрионального и постнатального развития животного. После того как была выяснена четвертичная структура и природа изменчивости молекул антител, теория Бернета была перефразирована следующим образом мутации, которые селекционирует антиген, возникают в генах, определяющих структуру легких и тяжелых цепей антител, причем в той части этих генов, которая соответствует вариабельным участкам полипептидных цепей. На фиг. 255 представлены результаты анализа аминокислотной последовательности вариабельного фрагмента легкой цепи у различных молекул антител человека. Видно, что эти данные очень напоминают аминокислотные замены, обнаруженные у мутантов по белку оболочки вируса табачной мозаики (фиг. 217). Легкие цепи отличаются друг от друга по разным положениям полипептидной цепи, и если сопоставить эти различия с таблицей генетического кода (табл. 27), то видно, что все они могут быть объяснены заменами одиночных оснований в триплетах. Таким образом, характер изменчивости первичной структуры белков антител находится в соответствии с мутационной гипотезой Бернета. [c.521]

Основу строения всех иммуноглобулинов составляет ква-зиоимметричный димер, состоящий из двух легких и двух тяжелых цепей, длина которых у иммуноглобулинов разных классов различна. В антителах человека обнаруживают два класса легких цепей х и К. Тяжелые цепи обозначают греческими буквами у, х, а, б и е (см. прилагаемую таблицу). Иммуноглобулины lgM и 1 А содержат дополнительную Л-цепь . [c.381]

Моноклональные антитела человека [c.119]

С развитием гибридомной технологии вновь появилась надежда на то, что антитела можно будет использовать в качестве терапевтических средств для поддержания постоянного уровня чистых моноспецифичных антител в организме. Однако остаются проблемы, связанные с риском развития перекрестных реакций, приводящих к развитию иммунного ответа и анафилаксии ведь в организме больного могут вырабатываться собственные антитела на детерминанты моноклональных антител мыши. Поэтому основная задача в настоящее время состоит в том, чтобы разработать методы получения моноклональных антител человека, обладающих как специфическими иммунотерапевтическими свойствами, так и пониженной иммуногенностью. [c.211]

Моноклональные антитела находят очень широкое применение, в том числе для диагностики и терапии различных заболеваний человека. Например, антитела против опухолевых антигенов, сшитые с токсинами (иммунотоксины), могут быть применены для селективного убивания опухолевых клеток в организме человека. Такие антитела несложно получить, используя для иммунизации мышей или крыс и последующее конструирование гибридом. Однако употребление этих антител очень ограничено, так как при их введении в организм человека (особенно повторном) возникают реакции на гетерологичный белок. Поэтому крайне желательно получать моноклональные антитела человека. [c.119]

Рис. 11-9. Молекула О антитела человека.

И. продуцируются В-лимфоцитами и находятся либо в своб. виде в крови и нек-рых др жидкостях организма, либо в виде рецепторов на поверхностных мембранах клеток. Семейство И у высших позвоночных включает в себя неск. классов у человека их известно пять (О, М, А, О, Е). Классы И. делятся на подклассы. Молекулы И. симметричны. Они построены из легких (ок. 220 аминокислотных остатков) и тяжелых (450-600 аминокислотных остатков) полипептидных цепей (соотв. Ь- и Н-цепи), скрепленных дисульфидными связями и нековатентными взаимодействиями (см., напр., на рис. 1 схему строения IgG). В антителах человека обнаружено два вида легких цепей (гс и X) и пять видов тяжелых цепей (у, л, а, 8 и е), отличающихся аминокислотной последовательностью При обозначении И. в ниж. индексах греческих букв цифры показывают, сколько цепей содержится в молекуле. Тяжелые цепи, характерные для каждого из классов и подклассов И, содержат по одному или более олигосахаридному фрагменту. [c.216]

Еще один подход заключается во введении иммунных клеток человека мутантным мышам, которые практически лишены собственной иммунной системы. После трансплантации иммунных стволовьЕх клеток человека таким мышам, страдающим тяжелым сочетанным иммунодефицитом (5с/й -мыши), они приобретают клетки иммунной системы человека и в ответ на введение антигена могут вырабатывать антитела человека. [c.215]

Моноклональные антитела грызунов, сходные с антителами человека, можно получить, выделив кДНК L- и Н-цепей из клеточной линии гибридомы грызунов и амплифицировав их вариабельные области с помощью ПЦР. В качестве праймеров для амплификации можно использовать олигонуклеотиды, комплементарные высококонсервативным сегментам ДНК, фланкирующим с 5 - и 3 -концов последовательность, кодирующую вариабельную область. Зная нуклеотидные последовательности кДНК вариабельных областей легкой и тяжелой цепей (V и Vjj), легко определить границы DR, основываясь на том, что соответствующие им последовательности гипервариабельны, в то время как каркасные области относительно консервативны. Исходя из данных о нуклеотидных последовательностях ДНК, кодирующих DR грызунов, синтезировали шесть пар олигонуклеотидных праймеров. Каждая пара инициировала синтез ДНК, кодирующей одну из шести DR грызунов три, локализованных на L-цепи, и три - на Н-цепи. Кроме того, на 5 -конце каждого праймера находилось 12 дополнительных нуклеоти- [c.217]

Измерения с помощью ультрацентрифуги, произведенные Гейдельбергом, Педерсеном и Тизелжусом, послужили доказательством того, что антитела являются видоизмененными сывороточными белками. С тщательно очищенными препаратами были получены константы седиментации, подобные константам, определенным для сывороточного глобулина кроме того, иммунная активность оказалась связанной с тем веществом, константа седиментации которого измерялась. В сочетании с электрофоретическими измерениями оказалось возможным разделить глобулины с одинаковым молекулярным весом, но с различными электрохимическими свойствами. Оказалось, что фракция -глобулина, выделенная из сыворотки кролика, несет функции антител [84]. Пневмококковые антитела человека также связаны с фракцией -глобулина и по форме молекул значительно отличаются от сферической формы [85]. Зайберт, Педерсен и Тизелиус [86] показали, что полисахариды и белковые фракции, выделенные из различных фильтратов туберкулезных бацилл, имеют одинаковые константы седиментации (около 1,7 10" ). Они по существу однородны и имеют молекулярный вес около 9000. Для белков туберкулезных штаммов быка и человека было найдено, что молекулярные веса равны соответственно 10 000 и 32 000. [c.547]

Последние достижения в этой области включают получение антиидиотипических антител [8 ] и моноклональных антител овцы [9 ] межвидовым слиянием клеток. Кроме того, получены моноклональные антитела человека как из гибридом, образованных с помощью внутри- или межвидового слияния клеток, так и из культуры В-лим цитов, трансформированных вирусом Эпштейна - Барра (ВЭБ) [10]. Другими большими достижениями, важными для практики, являются получение биспецифических антител (т.е. специфических к определяемому веществу и метке) из гибридных гибридом [11-13] и создание химерных антител (в целях преодоления сверхчувствительности к ксеногенному материалу) с по- [c.37]

В 1940 г. Ландштейнер и Винер [753] при иммунизации кроликов эритроцитами макака-резуса получили сыворотку, которая агглютинировала эритроциты 39 из 45 особей. При сравнении этих антител с антителами, обнаруженными Левином и Стет-соном, авторы пришли к выводу, что в обоих случаях реакция происходит с одним и тем же антигеном. В дальнейшем оказалось, что это не совсем так. В настоящее время антиген, открытый с помощью истинного анти-резус-антитела, называется LW-B честь Ландштейнера и Винера, а Rh-типирование у человека всегда проводится с сывороткой человеческого происхождения, как это было сделано в работе Левина и Стетсона. Последующее изложение вопроса относится только к реакциям с этими антителами человека. [c.210]

Вполне понятно, что один и тот же антиген могут узнавать антитела, имеющие комплементарные ему структуры, но несколько отличающиеся по составу аминокислотных остатков в антигенсвязывающем центре. Например, антигенсвязывающая область анти-декстраноього антитела человека в одном случае представляет собой неглубокий желобок , в который укладывается до 6 остатков изомальтозы, в другом — состоит из глубокой полости, куда помещается 1--2 остатка, и более мелкой выемки для 2—4 остатков изомальтозы. [c.34]

РИС. 4.18. Распределение ЕЬр(0)-антигенов на поверхности эритроцита человека. Каждый заключенный в кружок кластер черных точек соответствует одной молекуле Rh D. Черные точки — молекулы ферритина, связанные с козьими антителами козьи антитела прореагировали с антителами человека, которые в свою очередь связаны с молекулами Rh (D). [G.L. Ni olson et al., Pro . Nat. A ad. S i. USA, 68, 1416 (1971).] [c.227]

Пример такого подхода дает работа Сингера и др., в которой исследонано распределение антигена Rho(D) на поверхности мембраны эритроцита человека. Сначала 0,Rh-no-ложительные клетки были обработаны антителами человека, выработанными против специфического антигена. После того как антитела связались со специфическими поверхностными антигенами, клетки были разрушены, а их мембраны распластаны на сетке электронного микроскопа. Затем распластанные мембраны были обработаны козьими антителами IgG, выработанными против человеческих антител IgG, связанных с антигенами Rho(D) на мембране. (Таким образом, связанные антитела человека выступали в качестве антигенов для козьих антител.) Козьи антитела были предварительно связаны с ферритином — белком, богатым железом, который обладает достаточно большой электронной плотностью, чтобы его легко можно было различить под электронным микро- [c.227]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология