Антитела иммобилизованные

Принцип работы одного из типов анализатора заключается в следующем. Определяемые и меченные ферментом (каталазой или глюкозооксидазой) антигены конкурируют за центры связывания антител, иммобилизованных на мембране, окружающей кислородный электрод Кларка. После проведения иммунохимической реакции отмывают несвязавшиеся на мембране компоненты исследуемой смеси и вводят растворы субстратов фермента. Измеряемый ток на электроде пропорционален концентрации кислорода, поглощаемого (или выделяемого) в ферментативной реакции, осуществляемой связанным с антителами ферментным конъюгатом. Процедура регистрации иммобилизованных антител Позволяет использовать устройство многократно. Время анализа белковых антигенов (альбумин, инсулин) составляет 15 мин при чувствительности 5— [c.111]

Иммобилизация антител на водорастворимых полимерах. Новым подходом в иммунохимическом анализе является применение антител, иммобилизованных на обратимо растворимых иммуносорбентах, что позволяет проводить анализ в растворе, а затем быстро разделять компоненты путем перевода носителя в нерастворимое состояние. Данный путь дает возможность сочетать чувствительность твердофазного анализа с быстротой гомогенного. В качестве водорастворимого носителя может быть использован альгинат натрия и полиметакриловая кислота (ПМАК). [c.211]

При использовании аффинной хроматографии для выделения антигена из раствора используют антитела, иммобилизованные на нерастворимом носителе. При этом ключевым параметром иммуносорбции становится аффинность моновалентного взаимодействия [17]. Благодаря высокой концентрации МКА, присоединенных к гелю, связывание антигена, как правило, происходит достаточно быстро, и лишь в исключительных случаях кинетические параметры иммуносорбции требуют скорости потока меньшей, чем обычно используемая — один объем колонки в час. Выявление МКА обычно основано на поливалентном связывании с антигеном (см. рнс. 5.1), в котором участвуют как низко-, так и высокоаффинные антитела. Однако для аффинной хроматографии требуются антитела, обеспечивающие моновалентное связывание. Поэтому среди имеющихся МКА необходимо провести дополнительный отбор препаратов, обладающих нужной аффинностью. Это можно сделать, например, по способности МКА вызывать иммунопреципитацию антигена или по торможению растворимым (одновалентным) антигеном связывания с поливалентным антигеном, иммобилизованным на поверхности клеток или пластиковых панелей [17]. На рис. 5.2 схематично изображены взаимодействия, возможные при реакции торможения. Очевидно, торможение происходит лишь в том случае, если время диссоциации 50% моновалентных связей примерно равно или превышает время проведения самого анализа. Антитела, у которых 1./, составляет более 10 мин. [c.171]

В этом методе меченный ферментом лиганд (Л—Ф) конкурирует с лигандом (Л) анализируемого образца за ограниченное число антител, иммобилизованных на твердом носителе (ИАт). После непродолжительной инкубации отделяют Л—Ф, связавшийся с антителами, от свободного Л—Ф (рис. 2-9) и анализируют фракцию, связанную с антителами. Ферментативная активность твердой фазы обратно пропорциональна концентрации определяемого лиганда. [c.25]

Большинству иммунологических методов анализа, которые, как правило, являются гетерофазными методами, присущи ограничения, связанные с диффузией. Антиген должен достичь иммобилизованных на твердой фазе антител и вместе с тем связаться с ферментным конъюгатом. При этом антиген и конъюгат должны мигрировать через реакционную среду. При наличии большого избытка антител, иммобилизованных на носителе, адсорбция антигена даже из растворов с очень низкой концентрацией будет проходить весьма эффективно. В роли фактора, направляющего процесс, в этом случае выступает высокая концентрация иммобилизованных антител. Реакции в жидкой фазе также определяются концентрацией антител. В то же время присутствие реагентов в высокой концентрации сводит к минимуму проблемы, связанные с диффузией. Ввиду высокой концентрации антител фактически отпадает необходимость в миграции молекул на значительные расстояния. Благодаря этим эффектам анализ обладает высокой чувствительностью и проводится очень быстро. [c.387]

В рассмотренных датчиках антигены образуют комплексы с антителами, иммобилизованными на электроде. Ключевым фактором при этом является иммобилизация одного из компонентов в полимерную пленку, гель или на поверхности электрода. Методика иммобилизации должна обеспечивать не только сохранение имму-нохимической активности белка, но и не вызывать химических или физических изменений поверхности электрода, которые могут привести к нежелательным эффектам. В этом плане большую привлекательность имеет ковалентная пришивка молекул белка с помощью сшивающих реагентов. Для получения устойчивого слоя антител необходимо, чтобы их число было минимальным, иначе может произойти связывание антител между собой. [c.507]

Аффтная хроматография может рассматриваться как пятый принцип разделения а ЖХ. Этот аид разделения основан на специфических взаимодействиях между молекулами отделяемого вещества и молекулами, закрепленными на неподвижной фазе. Например, антитела, иммобилизованные на неподвижной фазе, специфически аэаимодействуют с определенным белком из пробы. [c.264]

Две конфигурации устройств ППР показаны на рис. 7.8.-22. В ранних сообщениях по щгамененпо ППР для дегастирования связывания белков речь шла об исследованиях взаимодействий без метки, с участием, например, антител, иммобилизованных на металлических пленках [7.8-55,7.8-56]. Скоро стало ясно, что хотя можно детектировать связанный антиген, в некоторых аналитических средах часто не было возможности отличить этот сигнал от сигнала любого другого яеспецифического взаимодействия с поверхностью [7.8-57]. Показатель преломления в качестве метки и другие оптические метки помогут обойти эту проблему, и, поскольку ППР столь чувствителен, достижимы низкие пределы обнаружения. [c.561]

Антитела, иммобилизованные на полисахаридных носителях, используют для очистки антигенов обычно с помощью колоночной хроматографии (иммуноадсорбция), при которой раствор неочищенного антигена пропускают через носитель с закрепленными на нем антителами. Специфический антиген адсорбируется антителами, тогда как примеси вымываются из колонки. Далее антиген может быть десорбирован в чистом виде [250]. Опубликован очень подробный обзор [227] с описанием подобных нерастворимых продуктов и способов их применения. [c.275]

Представляет большой интерес возможность включения клеток растительных и животных тканей в Са-альгинатный гель и осупдествление с их помощью процессов трансформации и биосинтеза. При этом биосинтез антрахинонов иммобилизованные растительные клетки осуществляют даже более активно, чем свободные. Фирма ЬКВ (Швеция) рекламирует систему производства моноклональных антител, иммобилизованных в альгинате. Клетки в геле остаются жизнеспособными 180 сут. и синтезируют за это время 20 кг моноклональных антител. [c.229]

Применение в ИФА антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях, дает возможность эффективно разделять компоненты аналитической системы перед стадией определения концентрации ферментной метки. Такой подход универсален и может применяться для широкого круга соединений — от гаптенов до микробных клеток. Однако нерастворимые иммуносорбенты имеют и некоторые отрицательные стороны, а именно 1) возможность неспецифического связывания компонентов с носителем 2) значительное время анализа (до нескольких часов) из-за длительности реакции антиген — антитело, определяемое низкой концентрацией иммобилизованного агента- (например, при использовании непористых сорбентов — полистирольных плат или пробирок) или диффузионными затруднениями при использовании пористых сорбентов (сефароза, пористое стекло, силохром и т. д.) 3) методические сложности, связаниью с трудностями точного дозирования и промывок иммуносорбентов па основе пористых носителей 4) существенное влияние неоднородности сорбциоииых свойств полимерных носителей (микроплаты и пробирки из полистирола, поливинилхлорида, полиметилметакрилата и т. д.) на точность и воспроизводимость результатов анализа. [c.111]

Перспективный метод ИФА основан на применении антител, иммобилизованных на водорастворимом полимере. Принцип анализа состоит в следующем. К раствору иммобилизованных на полианионе антител добавляют определяемый и меченный ферментом антиген и проводят реакцию конкурентного связывания. Для разделения свободного и связавшегося в комплексе конъюгата вносят поликатион, который быстро и количественно образует с полианионом нерастворимый поликомплекс. После разделения жидкой и твердой фаз регистрируемая в надосадочном растворе или осадке ферментативная активность дает информацию о начальной концентрации исследуемого антигена. Для удобства измерения активности полученный осадок может быть вновь легко растворен при увеличении ионной силы. [c.112]

Пэннинг—метод очистки клеток с помощью антител, иммобилизованных на пластике. Антитела иммобилизуют на пластиковой чашке Петри, затем изливают в нее суспензию клеток. После того как часть клеток свяжется с антителами, суспензию сливают. Процедуру можно повторить несколько раз. В зависимости от задачи эксперимента очищаемая фракция будет содержаться в суспензии илн на чашках. С чашек клеткн удаляют интенсивным перемешиванием—Лр л(. перев. [c.167]

Рис. 24-1. Типичная схема проведения ферментативного имиунометрического анализа с использованием моноклональных антител, иллюстрирующая возможность одновременной инкубации антител, иммобилизованных на носителе, антигена и вторых антител, имеющих ферментную метку.

Показаны три рекомбинантных фаговых частицы, экспрессирующие разные эпитопы в составе белка рШ. Только эпитоп центральной фаговой частицы распознается молекулой биотинилированного антитела, иммобилизованного на чашке Петри с помощью стрептавидина и использованного для скрининга клонотеки [c.343]

Аналогичные результаты были получены в работе [46], в которой за специфическим связыванием хемотерапевтического средства метотрексата с антителами, иммобилизованными на границе раздела кварц/раствор, следили по ослаблению пропускания в УФ-области при 310 нм. Измеряя абсолютные величины или скорости изменения пропускания, строили кривую сигнал доза. Найденный по этой кривой предел обнаружения метотрексата этим методом составляет 0,3 мкмоль/л. [c.531]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология