Электрофорез одномерный

Фиг. 18. Одномерный электрофорез на бумаге.

Да имеют изоэлектрические точки р1 от 6 до 8 у субъединиц с молекулярной массой свыше 95 000 Да—р1 в пределах 6—7. Одной полосе, выявленной одномерным электрофорезом, могут соответствовать более 12 по-разному заряженных компонентов. Кан и Бушук [111] электрофокусированием субъединиц с молекулярной массой от 68 000 до 134 Да между pH 6 и 8 идентифицировали не менее 20 различных белков. Хольт и др. [92] уточнили гетерогенность зарядов и генетическое происхождение высокомолекулярных субъединиц. Они в большей мере связывали эту гетерогенность с соотношениями глутаминовой кислоты и глутамина в субъединицах, чем с постоянно низким содержанием основных аминокислот, причем баланс во всех случаях явно складывается в пользу глутамина. [c.208]

Известно, что близко расположенные полосы в геле могут перекрываться. Этот эффект препятствует выявлению большого количества белков (не больше 50) с помощью одномерных методов их разделения. Метод двумерного гель-электрофореза, в котором объединены две различные процедуры разделения, позволяет идентифицировать более 1000 белков. Результаты при этом получают в виде двумерной белковой карты. [c.216]

Ниже описываются три общепринятых метода разделения нептидов. Первый из них ПААГ — ДСН-электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН), обычно в одномерном варианте. Разрешение пептидных фрагментов достигается благодаря различиям в их относительных подвижностях, не всегда отражающих истинные молекулярные массы. Очень важно, что электрофореграмму фрагментов одного белка можно сравнивать с электрофореграм- [c.223]

Двумерная электромиграция [45], т. е. электрофорез смеси веществ . Движущихся в двух взаимно перпендикулярных направлениях в одной и той же среде, по большей части не имеет особых преимуществ по сравнению с простой (одномерной) электромиграцией. [c.541]

Электрофорез в крахмальном геле. Гель готовят из гидролизованного крахмала. Горячий гель заливают в кювету глубиной 5—6 мм, которую закрывают специальной крышкой, устроенной так, что в застывшем геле остается поперечный ряд узких щелей (0,3—0,7 мм). В щели вносят кусочки фильтровальной бумаги, смоченной раствором исследуемого вещества, и проводят одномерный или двумерный электрофорез в горизонтальных или вертикальных установках. Преимущество горизонтального варианта — простота исполнения, вертикального — большая разрешающая сила. [c.147]

Анализ субъединиц глютенина с помощью электрофореза при кислых pH или двумерного электрофореза ДДС-ПААГ-ИЭФ или ДДС-ПААГ в формирующемся градиенте pH обнаруживает значительные различия их зарядов. Каждую полосу, наблюдаемую при одномерном электрофорезе и соответствующую определенной молекулярной массе, можно посредством электрофокусирования разделить на большое число белков, отличающихся своими изоэлектрическими точками. Так, по Данно и др. [57], субъединицы с предполагаемой молекулярной массой в пределах [c.208]

Сложные смеси аминокислот или пептидов можно разделять либо с помощью двумерного электрофореза на квадратных листах бумаги, либо проводя одномерный электрофорез в одном направлении, а хроматографию в перпендикулярном направлении (рис. 5.1). [c.134]

Весьма полезно включать в ПЭФ-эксперименты уже охарактеризованные рестрикционные гидролизаты ДНК. Их можно прогонять вместе с опытными при электрофорезе или добавлять позже, включая дорожки из одномерного фореза в гибридиза-ционные смеси. Примеры неудачных опытов и возможности их использования обсуждаются в приложении. [c.81]

Остановимся вначале на номенклатуре Р-белков. Все они имеют сходную молекулярную массу, поэтому их довольно трудно разделить с помощью одномерного гель-электрофореза. Гораздо лучшее разрешение удается получить при двумерном разделении, когда в одном направлении проводят изоэлектрофокусирование, а в другом — электрофорез в полиакриламидном геле (рис. 24.8). При этом два основных белка РВ1 и РВ2 (перечисленные в порядке убывания их молекулярной массы) отделяют- [c.460]

На втором этапе трубочка геля, содержащего разделенные белки, снова подвергается электрофорезу, на этот раз в направлении перпендикулярном тому, что на первом этапе. В этом слу чае электрофорез ведут в присутствии ДСН и белки разделяют по их молекулярной массе, как в одномерном ДСН-ПААГ. Исходный гель пропитывают додецил-сульфатом натрия и, поместив его на блок ДСН-ПААГ-геля, проводят электрофорез, в ходе которого каждая из полипептидных цепей мигри- [c.217]

Лучшим способом аналитического разделения рибосомных белков является электрофорез в геле. Уже при одномерном гель-электрофорезе в денатурируюших условиях можно получить значительное фракционирование р41босомных белков по заряду и молекулярной массе (размеру). Среди рибосомных белков большинства живых организмов преобладают умеренно основные полипептиды, хотя всегда [c.90]

Одномерный или двухмерный электрофорез в сочетании с хроматографией на бумаге является наиболее эф ктивным из известных методов изучения сложной смеси небольших количеств пептидов. Чтобы проиллюстрировать, насколько широк тот круг вопросов, изучение которых осуществляется сочетанием электрос реза и хроматографии, ниже кратко изложены некоторые методики, разработанные в ходе подобных исследований. [c.54]

Браунли и Сенджер [109] анализировали меченые олигонуклеотиды, в молекулярные цепи которых входит до 50 остатков, методом одномерного электрофореза на ацетилированной целлюлозе, после чего переносили полосы на адсорбционный слой и проводили разделение методом ТСХ на слоях со смешанной DEAE-целлюлозой. [c.137]

Для подготовки смеси к разделению на бумаге осадок растворяли в разбавленной НС1 и центрифугировали для отделения нерастворимых материалов. Ионы бария осаждали сульфат-ионом или пропускали экстракт через ионообменные смолы. При одномерном варианте БХ в качестве элюента использовали систему метанол — аммиачная вода. Общее содержание инозитфосфатов в различных почвах в среднем составляло (в пересчете на Р2О5) 50 мг на 100 г почвы. В работе[152] представлены данные определения инозитфосфатов электрофорезом на бумаге. [c.317]

Белки, имеющие гомологичш те аминокислотные последовательности, но различающиеся посттрансляционпыми изменениями (тип 2), дают сходные карты, исключение составляют лишь те фрагменты, подвижность которых изменена вследствие соответствующей модификации. Аналогичная картина (совпадение части хроматограммы) наблюдается и в ситуации 4, Обнаружить любые различия в структуре с помощью одномерного электрофореза в гелях, где анализируются крупные полипептиды менее вероятно, чем с помощью пептидных карт, поскольку при небольшой молекулярной массе изменения гидрофобности или заряда сказываются на поведении пептида в значительно большей степени. [c.225]

В ряде случаев наряду с фруктозой и сахарозой в моче и других биологических жидкостях могут присутствовать иные кетрзы. Определить содержание этих моно-или олигосахаридов возможно с помощью хроматографии или электрофореза. Подготовку и очистку пробы про1водят описанным выше методом.-Перед нанесением на, бумагу пробу обычно высушивают в роторном испарителе (так как объем ее бывает слишком большим для нанесения), затем растворяют в 0,1 мл воды и наносят на хроматографическую бумагу Ватман № 1. Проба должна содержать 50—200 мкг кетосахаров. Обычно сахара разделяют методом нисходящей одномерной хроматографии в системе растворителя ацетон и. бутанол вода (7 2 1). Время хроматографирования при комнатной температуре составляет 30—35 ч. Высушенную хроматограмму проявляют резорцином (равномерно опрысканную хроматограмму 5 мин прогревают при 1бО°С) или димедоном (после опрыскивания хроматограмму высушивают при комнатной температуре, а затем 5 мин прогревают при 110°С). При проведении ко- [c.125]

Двумерный гель-электрофорез широко используется как аналитический метод. Он заключается в том, что полоску геля, содержащую белки, разделенные, например, с помощью изоэлектрического фокусирования, накладывают на кромку пластины другого геля, содержащего ДСН. Электрофорез проводится в направлении, перпендикулярном длинной оси полоски первого геля (рис. 9.5). Окончательные результаты разделения зависят от того, что в первом направлении белки разделяются в соответствии с их изоэлектрическими точками, а во втором — в соответствии с размерами субъединиц. Неочищенные клеточные экстракты в двумерных системах могут давать до 1000 индивидуально детектируемых белковых компонентов. Однако для анализа очищенного фермента необходимо проводить лишь одномерный электрофорез в каждой из двух систем (изоэлектри- [c.324]

Смотреть страницы где упоминается термин Электрофорез одномерный: [c.201] [c.114] [c.141] [c.201] [c.386] [c.54] [c.74] [c.241] [c.58] [c.331] [c.332] [c.334] [c.231] [c.357] [c.463] [c.305] [c.73] [c.81] [c.74] [c.241] [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология