Иммуноглобулины мышей

Рис. 39.7. Вся информация для сборки гена тяжелой цепи иммуноглобулина мыши заложена в ее единственном генном кластере.

Иммуноферментный метод. В данном методе используют антитела кролика против иммуноглобулинов мыши, меченные ферментом, и о результате реакции судят по появлению цветной реакции. Принцип метода следующий (рис. 44). Растворимый антиген или клетки связывают с лунками 96-луночного планшета для микротитрования, приливают культуральную жидкость, в которой могут быть антитела, и после инкубации добавляют конъюгированные с ферментом антитела против иммуноглобулинов мыши. После инкубации и отмывки в лунки наливают раствор субстрата. Если в культуральной жидкости были антитела против антигена, то они адсорбируются на антигене, на них в свою очередь адсорбируются конъюгированные с ферментом вторичные антитела и под действием фермента происходит разложение субстрата и переход его в окрашенный продукт. Таким образом, по появлению окраски судят о присутствии в культуральной жидкости антител к иммунизирующему антигену. [c.113]

Антитела козла против иммуноглобулина мыши [c.244]

Антитела козла против иммуноглобулина мыши (F -часть) [c.244]

Сравнение данных, полученных с помощью линейного и логарифмического усилителей, представлено на рис. 20-5. Лимфоциты из периферической крови овцы были окрашены непрямым методом с помощью моноклональных мышиных антител и меченной ФИТЦ антисыворотки к иммуноглобулинам мыши. В режиме логарифмического усиления сразу видно, что моноклональные антитела выявляют три субпопуляции лимфоцитов. Интенсивность флуоресценции изменяется в диапазоне трех порядков. На этом же рисунке (рис. 20-5,5—Г) представлены три картины для той же пробы, но полученные при линейном усилении с различными коэффициентами усиления. Ни в одном из [c.346]

Получение моноклональных антител с более низкой антигенностью по отношению к человеку может быть осуществлено с помощью генноинженерных методов. Моноклональные антитела, созданные с помощью этого подхода ( химерные ), включают активный центр из иммуноглобулина мыши, а остальную часть молекулы, F -фрагмент, — из иммуноглобулина человека. [c.167]

Ргс. 9. Сходные аминокислотные последовательности в консервативных участках FR —FRA) вариабельных районов X- и л-цепей и тяжелой цепи иммуноглобулинов мыши [c.48]

Для развития приведенных выше данных необходимо указать, что иммуноглобулины различного видового происхождения также имеют выраженные черты сходства по -участкам легкой и тяжелой цепей. При этом сравниваемые белки могут принадлежать животным, далеко отстоящим друг от друга на эволюционной лестнице. Последнее можно проиллюстрировать данными сравнительного изучения аминокислотной последовательности К-районов тяжелых цепей ( н) иммуноглобулинов мыши и крокодила (рис. 10). [c.49]

Рис. 15. Гомологичные участки аминокислотной последовательности вариабельных районов легкой и тяжелой цепей иммуноглобулинов (мышь) и антигенсвязывающих рецепторов цитотоксиче-

Приготовление эритроцитов быка (ЭБ), нагруженных кроличьими антителами к иммуноглобулинам мыши. Бычью кровь хранят в растворе Олсвера и используют в период от 1 до 4 недель после взятия. Для получения эритроцитов ее цент- [c.202]

IV. Антисыворотки к иммуноглобулинам мыши и крысы. Для общих целей анти-IgG, получают путем иммунизации животных фракцией IgG, полученной в результате аффинной очистки на колонке с протеинА-сефарозой (разд. 10.6.1). Для удаления антител к другим классам иммуноглобулинов сыворотки сорбируют моноклональными антителами или сывороткой, лишенной IgG. [c.104]

Важным этапом эволюции эукариот было удлинение гена, т. е. увеличение его размеров, при котором из простых генов могут возникать более сложные. Удлинение генов может происходить за счет тандемных дупликаций относительно коротких нуклеотидных последовательностей. Примером служат гены, кодирующие вариабельные участки иммуноглобулинов мыши. Такие участки тяжелых (JgVn) и легких (JgVb) цепей иммуноглобулина кодируются генами длиной около 600 п. н., возникши- [c.245]

Предварительные результаты подтверждают, что процесс, заключающийся в иммобилизации антител против иммуноглобулинов мыши на мерсалил-трисакриле и выделении клеток, предварительно покрытых специфическими моноклональными антителами мыши, может применяться как общий метод. Этот процесс, уже использованный в чашечных методиках , требует лишь небольших количеств указанных моноклональных антител (Бонафо и др., неопубликованные данные). Этот метод имеет хорошие перспективы использования для разделения подгрупп специфических клеток и выделения антигенспецифических лимфоцитов. [c.259]

Для выявления аллотипических детерминант можно получить антисывсротку, иммунизируя определенным иммуноглобулином одного животного другое животное того же вида, отличающееся от донора по генотипу. Так как каждая молекула иммуноглобулина имеет несколько различных аллотипических детерминант (или аллотипических маркеров), для получения антпсыворотки только против одного маркера реципиент должен содержать все аллотипические маркеры донорского иммуноглобулина, за исключением этого маркера. При изучении аллотипов генетически однородных животных (например, линейных мы,шей) мышей одной линии иммунизируют иммуноглобулином мышей другой линии. [c.80]

Иммуноглобулины мыши. Данные об аллотпппческпх маркерах иммуноглобулинов мыши приведены ниже. [c.86]

Дополнительный отрезок цепи скручен таким образом, что заполняет целиком пространство между петлями других гипервариабельных участков легкой и тяжелой цепн, т. е. гипотетическую полость активного центра. Активный центр в форме глубокой впадины появился бы в этом участке, если вырезать из третьего гипервариабельного участка лишний пептид, формирующий анти-параллельную -шпнльку. Другие. иммуноглобулины, подобные Kol, не изучали методами рентгеноструктурного анализа, однако они, несомненно, существуют. Например, иммуноглобулин мыши МИК Он не связывает каких-либо известных лигандов и характеризуется более длинным, чем у известных моноклональных антител, третьим гипервариабельным участком тяжелой цепи. Логично, что и в этом случае полость активного центра заполнена петлей этого длинного гипервариабельного участка. [c.100]

С помощью иммуносорбента для антигена могут решаться задачи, имеющие существенное значение для молекулярной биологии. Приведем в качестве примера выделение на иммуносорбенте типа сэндвич полирибосом, синтезирующих легкие полипептидные цепи (Е. Сидорова и др., 1978). Сорбент был нагружен антителами против легких цепей иммуноглобулинов мыши. Выделенные из клеток мышиной плазмацитомы полирибосомы для легких цепей (использовали технику градиентного центрифугирования) содержали растущие легкие цепи. Как следует из этой и других работ, растущие полипептидные цепи уже имеют, ио крайней мере, часть антигенных детерминант, характерных для данной полипептидной цепи, поэтому растущая цепь избирательно связывается с иммобилизованными антителами против этой цепи, а вместе с ней связываются с иммуносорбентом полирибосомы, содержащие мРНК для легких цепей. Теперь остается промыть иммуносорбент, путем фенольной экстракции выделить РИК и очистить мРНК общепринятым способом. Описанный принцип или аналогичные методы извлечения мРНК позволяют получить препараты определенной информационной нуклеиновой кислоты свыше 90% чистоты. [c.243]

Разумеется, асцитная жидкость загрязнена другими иммуноглобулинами мыши. Содержание примесей зависит от чистоты содержания животных. Предпочтительно использовать мышей, свободных от видоспецифических патогенных возбудителей, если таковые доступны. Степень загрязнения антител увеличивается и при значительном излиянии крови в асцитную жидкость. Некоторые гибридомы хорошо растут в брюшной полости. Другие же линии, образующие достаточное количество антител в культуре, in vivo продуцируют мало антител, несмотря на хороший рост в виде асцитных опухолей. Некоторые гибридомы формируют солидные опухоли или метастазы. Иногда, ще не достигнув значительного роста, такие опухоли служат причиной гибели хозяина-носителя. [c.146]

После восстановления и алкилирования препараты иммуноглобулинов мыши диализовали против 1 М пропионовой кислоты и 4,5 гуанидинхлорида (S hwarz Mann). Элюцию проводили тем же буфером, охлажденным во льду. Все остальные процедуры проводили так же, как в случае иммуноглобулинов кролика. [c.143]

Клетки инкубируют 30 мин во льду с ФИТЦ-антимыши-ными иммуноглобулинами. ФИТЦ-конъюгированные Р(аЬ )г-фрагменты козьих антител против иммуноглобулинов мыши [c.464]

Рис. 4, Анализ иммулоглобулииов, секретируемых клетками гибрид( мы. Условия биосинтетического включения метки в секретнруемые белки же, что указаны в подписи к рис. 2, По 1 мл надосадочной жидкости от каждой культуры инкубировали с 20 мкл кроличьей антисыворотки к иммуноглобулинам мыши (4 С, 2 ч). Затем добавляли примерно 50 мкл осевших гранул геля сефарозы, нагруженных белком А, и инкубировали еще 15 мин, непрерывно перемешивая. Специфически сорбированные иммуноглобулины исследовали методом ДСН-ПАГЭ, как описано в тексте. Т и Л — тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов I и 1 — соответственно окрашенные электрофоре граммы и радиоавтографы одних и тех же гелей.

П. Моноклональные мышиные антитела к антигенам клеточной поверхности добавляют к экстракту мембраи, солюбилизированных с помощью Ф-40 (примерно 25 мкл асцитной жидкости иа мембраны, выделенные из 10 клеток), и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем добавляют оптимальное (по данным предварительного титрования) количество кроличьих илн бараньих антител к иммуноглобулинам мыши и смесь инкубируют 16 ч при 4 С для осаждения иммунных комплексов. Иммунные преципитаты отмывают дважды 0,5%-ным раствором ЫР-40 в ЗФР н один раз 0,5%-ным раствором ЫР-40 [c.63]

Выделение кроличьих антител к иммуноглобулинам мыши на иммуносорбенте. Кроличью антисыворотку к IgG мыши прогревают 30 мин при 56 С и наносят на колонку мышиного IgG, иммобилизованного на сефарозе. Специфические антитела, связавшиеся с мышиным иммуноглобулином, элюируют 0,05 М НС1-ГЛИЦИИ0ВЫМ буфером с pH 2,5. Элюат нейтрализуют 0,2 М триС буфером с pH 8 и сразу же наносят на колонку сефадекса G-50, уравновешенного ФР. Концентрацию антител в элюате доводят до 800 мкг/мл и хранят полученный реагент мелкими порциями в замороженном состоянии. [c.203]

Рис, 4. Сравнение результатов иммуиоферментного и радиоиммунного методов выявления антител к антигенам вируса гепатита В в культуральной жидкости клеток гибридом. Надосадочные жидкости исследовали, кал описана в тексте (пример Б). Один квадрат таблицы содержит результаты анализа одной иадосадочиой жидкости. Цифра — радиоактивность (имп/мин) отражает количество связанных 1-антител кролика к иммуноглобулинам мыши. Плюсы и минусы — оценка реакции в ИФМ (—отрицательная реакция +, + +, -i -i -l- разные степени цветной положительной реакции). Первая колонка— контрольный опыт (без белкового антигена), вторая — негативный контроль (с одной лишь средой) в остальных квадратах — результаты испытания отдельных клонов иа синтез антител к антигенам вируса гепатита В. [c.336]

Смотреть страницы где упоминается термин Иммуноглобулины мышей: [c.321] [c.217] [c.291] [c.106] [c.506] [c.215] [c.114] [c.48] [c.48] [c.49] [c.64] [c.78] [c.135] [c.137] [c.143] [c.262] [c.420] [c.492] [c.496] [c.46] [c.46] [c.49] [c.203] [c.217] [c.222] [c.322]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология