Элюция вещества с пластинки

ЭЛЮЦИЯ ВЕЩЕСТВА С ПЛАСТИНКИ [c.481]

Наиболее широко применяемым вариантом количественной ТСХ является спектрофотометрическое определение вещества после элюции его с пластинки. Хотя это более трудоемкий процесс, чем денситометрия, однако он завоевал популярность благодаря тому, что спектрофотометры стали стандартным оборудованием аналитических лабораторий. Погрешность определения в этом методе обусловлена в основном неполнотой элюции вещества с сорбента и влиянием примесей в стационарной фазе. Второй фактор больше сказывается в УФ-, чем в видимой об- [c.245]

Полноту элюции вещества с пластинки проверяют предварительными опытами со стандартными растворами стабилизаторов. Для ускорения отработки условий экстракции опыты проводят со смесями стабилизаторов, используя в качестве оценочного критерия массу вещества в пятне, а не содержание (в %) стабилизатора в смеси. [c.246]

Для извлечения вещества из какой-либо фракции после ТСХ с целью дальнейшего анализа или использования выскребают и отсасывают порошок сорбента из соответствующего пятна или вырезают само пятно и элюируют материал в малом объеме растворителя. Для пятен, вырезанных из пластиковых пластинок, объем элюента можно свести к минимуму, воспользовавшись хроматографической элюцией (рис. 159). Один конец пластмассовой полоски, на которой находится пятно вещества, срезают углом, а к противоположному концу скрепкой прикрепляют полоску фильтровальной бумаги. Последнюю закладывают между двумя предметными стеклами и погружают в чашечку с элюентом так, чтобы отогнутый вниз выступающий из стекол конец полоски с пятном направлял скапывающий с вершины угла элюат в микропробирку. [c.481]

Анализ распределения вещества при тонкослойной хроматографии, проведенный на основе решения (УИ.5) уравнения (УИ.4), позволяет сделать следующие заключения об особенностях ТСХ. Скорость элюции. Скорость элюции и по сухой пластинке с длиной пробега растворителя обратной зависи- [c.258]

Количественные элютивные методы имеют целый ряд существенных недостатков. Дело в том, что для получения точных результатов извлечение вещества из адсорбента должно быть количественным или, если происходит неполное извлечение вещества, соответствующие поправки должны быть небольшими и точно определяемыми. Однако эти требования далеко не всегда выполняются, так как сильно адсорбированные вещества обычно извлекаются неполностью. С другой стороны, из адсорбента могут экстрагироваться примеси, которые будут определяться вместе с основным веществом. Для устранения указанных ошибок целесообразно в случае сильно абсорбированных веществ проводить цветную реакцию непосредственно на пластинке и элюировать уже окрашенные соединения, которые легче десорбируются с силикагеля. Полезно также предварительно тщательно промыть силикагель тем растворителем, который используется для элюции определяемых веществ с пластинки. При фотометрировании элюированного с пластины вещества следует также обратить внимание на правильный выбор спектральной области фотометрии, чтобы исключить поглощение света экстрагированными примесями. Техника элюции из силикагеля описана в статье [17]. [c.301]

В этом варианте в колонку или па стартовую линию хроматографической пластинки наносят определенную порцию раствора исходной смеси веществ, а затем ведут элюцию раствором вещества, обладающего заведомо большим сродством к неподвижной фазе хроматографической системы, чем любой из компонентов смеси. Происходит вытеснение их пз неподвижной фазы, причем в первую очередь тех, которые обладают меньшнм сродством к сорбенту, а затем и всех остальных. Элюеит выталкивает все компоненты смеси впереди себя наподобие поршня. Так как они выходят в подвижную фазу концентрированными, то между ними также идет конкуренция за связь с неподвижной фазой. Компоненты, уступающие другим в силе сродства к этой фазе, оттесняются еще вперед, где сорбируются, но только до тех пор, пока их опять не вытеснят компоненты, обладающие большим сродством к сорбенту. В результате такого чередования сорбции и вытеснения компоненты смеси будут выходить из колонки один за другим в порядке возрастания силы их связи с неподвижной фазой. Ясно, что при этом зоны соседних компонентов будут соприкасаться или даже немного перекрываться друг с другом. Для аналитического фракционирования метод непригоден, но хорош для препаративного или полупромышленного разделения веществ, поскольку емкость колонки здесь используется очень эффективно. [c.12]

В отличие от предыдущего в этом методе элюирующий раствор обладает меньшим сродством к сорбенту, чем любой из компонентов вносимой на колонку или пластинку смеси веществ. Эти компоненты постепенно вымываются из неподвижной фазы и движутся вдоль колонки за счет непрерывного перераспределения их молекул между неподвижной фазой и элюентом. Каждый из них мигрирует независимо от других в соответствии с соотношением сил его сродства к неподвижной и подвижной фазам. Миграция идет тем медленнее, чем больше сродство к неподвижной фазе. Именно этот, пригодный для аналитических целей вариант хроматографии подробно рассмотрен в следующем разделе, поэтому здесь можно ограничиться указанием на то, что при хроматографической элюции компоненты смеси выходят из колонки отдельными, разделенными друг от друга зонами, которые в соответствии с типичной формой профиля распределения вещества в каждой такой зоне (см. нияге) часто называют хроматографическими пиками. [c.12]

После формирования слоя геля пластины помещают в прибор, заливают элюент в резервуары, погружают в них фитили и накладывают их равномерно на края пластины. Столик устанавливают под выбранным углом, закрывают крышку и дают пластинам уравновеситься током элюента в течение ночи. Затем столик возвращают в горизонтальное положение не снимая крышки, через прорези в ней на поверхность геля микропипеткой (едва касаясь каплей поверхности) наносят препараты и, снова закрыв прорези резиновыми вставками, возвращают столик прибора в наклонное положение. В один из треков фракционирования вносят окрашенное высокомолекулярное вещество. Когда его пятно достигнет конца пластинки, хроматографический процесс прерывают и пластинку извлекают для снятия с нее реплики на фильтровальную бумагу, как описано выше. Обычно процесс элюции занимает 5—10 ч. [c.164]

Тонкослойная хроматография (ТСХ английское TL ) и предшествовавший ей метод хродгатографии на бумаге до середины 70-х годов занимали центральное место в исследованиях структуры белков и нуклеиновых кислот. В последнее десятилетие эти методы были явно оттеснены электрофорезом и высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографией при высоком давлении. Оба метода превосходят ТСХ но разрешающей способности, а второй из них — и по скорости анализа. Кроме того, в результате ЖХВД экспериментатор получает уже разделенные жидкие фракции исходного препарата, в то время как после ТСХ ему надо еш,е локализовать пятна на пластинке, а в случае необходимости дальнейшего анализа — выполнить длительные операции элюции из них веш,ества. Точное и проводимое в ходе самого фракционирования определение микроколичеств вещества во фракциях прп ЖХВД, которое позволяют осуществить высокочувствительные детекторы и интегрирующие устройства современных жидкостных хроматографов, оставляет далеко позади соответствующие возможности ТСХ — ввиду плохой воспроизводимости процессов элюции из пятен и высокого уровня фона или самопоглощения в слое носителя при использовании оптических, флюоресцентных и радиоактивных методов оценки количества вещества в пятнах на пластинке без его элюции. Наконец, в препаративном варианте фракционирования количественные возможности ТСХ на несколько порядков меньше, чем у обычной колоночной хроматографии и даже у электрофореза. [c.457]

Фотометрические детекторы для жидкостной хроматографии являются, как правило, двухдучевыми. С их помощью определяют разность поглощения света в измерительной и сравнительной кюветах, через которые, соответственно, пропускают элюат с колонки и растворитель. Может быть использован и принцип двухволновой фотометрии, когда детектор имеет только одну кювету, через которую движется элюат с колонки. Фотометрирование проводят на двух длинах волн. При этом на одной длине водны поглощает как хроматографируемое вещество, так и растворитель, а на другой — только хроматографируемое вещество. Таким образом, можно выделить поглощение света анализируемым веществом. Однако для этого необходимо знать соотношение мольных акстинкций растворителя на обеих длинах волн. Преимуществом метода двухволновой фотометрии является возможность более точного учета изменения оптической плотности растворителя при градиентной элюции и фотометрии оптически неоднородных объектов, например при сканировании хроматографических капиллярных колонок или сканировании пластинок в количественной тонкослойной хроматографии, где необходимо определить оптическую плотность фона и поглощения хроматографического вещества в одной точке пространства. [c.95]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология