Исследование действия тирозиназы

Работа 94. Исследование действия тирозиназы [c.172]

В связи с этим он предположил, что, подобно фенолазе, тирозиназа состоит из оксигеназы, образующей перекись, и пероксидазы, причем специфичность тирозиназы должна обусловливаться особенностью ее пероксидазы. Но при дальнейшем исследовании этого вопроса Бах на основании точных количественных опытов пришел к заключению, что ускоряющее действие перекиси водорода не связано с непосредственным участием последней в окислении тирозина, а обусловливается разрушением редуцирующих примесей, задерживающих действие тирозиназы. На нормальную, в достаточной степени очищенную тирозиназу перекись водорода никакого ускоряющего действия не оказывает. [c.77]

Рассматривая результаты настоящего исследования, мы приходим к выводу, что действие тирозиназы совершенно отлично от действия обычной оксидазы или системы пероксидаза — перекись водорода . По всей видимости, тирозиназа принадлежит к особому классу окислительных ферментов, окислительное действие которых распространяется на вещества с менее лабильным водородом. [c.437]

В связи с некоторыми опытами по регенерированию при помощи амальгамы алюминия препаратов тирозиназы, потерявших активность при длительном хранении, я заметил, что растворы тирозиназы, обработанные. )тим восстановителем, чрезвычайно ускоряют действие активных препаратов, по сами не действуют на тирозин. Болое подробное исследование показало, что в данном случае ускорение действия тирозиназы зависит от присутствия коллоидальной гидроокиси алюминия. Другие соединения алюминия также оказались очень активными. Ускоряющее действие алюминиевых солей значительно превосходит действие других металлов и в особенности заметно в случае более чистых препаратов тирозиназы. Для того чтобы выяснить ускоряется ли в данном случае действие самой тирозиназы или только дальнейшее превращение уже образовавшихся продуктов окисления, я провел следующие опыты. [c.443]

Пути биосинтеза, ведущие к образованию флавоноидов, в том числе флаванов, рассмотрены в гл. 24 и повторять их здесь нет необходимости. Исследования полимеризации этих флаванов шли по двум главным направлениям. Фрейденберг и его сотрудники показали, что катализируемая кислотой полимеризация катехина происходит через промежуточное соединение с открытой цепью, имеющее структуру LIV. У этого соединения при С-2 присутствует реакционноспособный остаток бензилового спирта, который легко образует карбониевый ион и поэтому может конденсироваться с нуклеофилами, например с кольцом А в соединении LIV (структура этого кольца подобна структуре флороглюцина). Однако нельзя исключить также возможность конденсации с более слабыми нуклеофилами (например, кольцо В в соединении LIV). Хотя считается, что эта реакция протекает при почти нейтральных значениях pH, однако обычно полагают, что ее значение в образовании конденсированных таннинов меньше, чем значение другой реакции, фигурирующей в теории, выдвинутой Хатуэем и его сотрудниками. Эти исследователи предполагают, что процессу конденсации предшествует образование хинонов. Они показали, что (Ч-)-кате-хин (III) образует продукты, подобные по своим свойствам таннинам, как путем самопроизвольного окисления при pH 7,0, так и под действием тирозиназы из грибов. Основываясь на результатах модельных опытов, они делают вывод, что (-Ь)-катехин полимеризуется по механизму голова к хвосту с образованием полимера LV (здесь опять-таки электрофильная хиноидная группа предпочтительно реагирует с кольцом А, которое представляет собой более сильную нуклеофильную структуру). В случае (-(-)- [c.341]

Жессар различает также в превращении тирозина под действием тирозиназы два процесса окисление в красное вещество, что может быть произведено как оксидазой, так и химическими окислителями (реактив Милона), и конденсацию этого красного вещества в известный черных продукт. Последнее, согласно его гипотезе, вызывается действием минеральных со-с.тавных частей тиpoзиiIaзы. Согласно Баху , это предположение также оказалось не соответствующим фактом. Пероксидаза и перекись водорода не оказывают никакого действия на тирозин прибавление кипяченой тирозиназы ничего не меняет в этом отношении. Баху не удалось обнаружить ири исследовании многочисленных растительных соков и экстрактов никакого кофермента, который был бы в состоянии вызвать окисление тирозина обыкновенной оксидазой или пероксидазой и перекисью водорода. Пероксидаза даже задерн ивает действие тирозиназы. Перекись водорода [c.31]

Если вывод законов, управляющих действием окислительных ферментов, представляется преждевременным, то изучение кинетики их действия может дать довольно интересные результаты, особенно если к исследованию применяются более точные методы анализа. Так, Бах нашел, что окрашенные продукты окисления, которые образуются при действии тирозиназы па бесцветный раствор тирозина, легко обесцвечиваются марганцовокалиевой солью в кислом растворе, и основал и этом легкий и точный метод определения действия тирозиназы. Пользуясь этим методом, он показал, что тирозиназа разрушается в процессе окисления тирозина, и тем скорее, чем больше концентрация самого фермента и субстрата, т. е. чем скорее идет реакция. Сравнивая ход реакции в серии опытов с переменными концентрациями того и другого, он нашел, что в первых стадиях реакции, т. е. когда тирозиназа сохраняет еще всю свою активность, действие ее несомненно следует закону масс скорость реакции тут прямо пропорциональна концентрации фермента и концентрации субстрата. Но по мере того как де11ствие тирозиназы ослабляется, замечается все большее и большее отклонение от прямой линии. [c.92]

В СВЯЗИ С подробным исследованием меланиновых пигментов и ферментативного образования меланина, Фюрт и Иерузалем - пытались выяснить также и механизм действия тирозиназы. Для того чтобы следить количественно за действием фермента, авторы применяли два метода [c.423]

Из этих опытов вытекает 1) что количество продукта реакпии возрастает с количеством фермента, однако медленнее, чем последнее, и 2) что реакция тем скорее заканчивается, чем больше концентрация фермента. В этом отношении действие тирозиназы совершенно такое же, как исследованное мною ранее действие пероксидазы из хрена. Если нанести концентрации фермента на ось абсцисс, а количество перманганата — на ось ординат, то получается приведенная на рис. 1 кривая. Для сравнения приведена также и кривая концентрации тирозиназы (после 24-часового действия), полученная Фюртом и Иерузалемом. [c.424]

В многочисленных опытах, поставленных в этом направлении, не наблюдалось ни одного исключения из этого правила. Во многих случаях в соках и экстрактах действие тирозиназы перекрывалось присутствием восстанавливающих или других, не исследованных подробнее веществ. Это в особенности имело место в тех случаях, когда соки и экстракты были подвергнуты действию гнилостных бактерий. Однако путем рсажде-ния спиртом эти задерживающие вещества могут быть в значительной степени удалены, после чего совершенно четко выявляется действие тирозиназы. Многие соки и экстракты содержат вещества, подобные фенолам, которые окрашиваются в красно-коричневый цвет под действием пероксидазы и перекиси водорода. При прибавлении тирозина могкно даже наблюдать ускорение образования красителя. Этот окислительный процесс не имеет, однако, ничего общего с действием тирозиназы, ибо, во-первых, такое же ускорение может быть вызвано уксусной или молочной кислотой, [c.436]

В одном случае совершенно неожиданно наблюдалось ускорение действия тирозиназы самой пероксидазой (без прибавления перекиси водорода). Более подробное исследование показало, что применявшийся раствор пероксидазы имел кислую реакцию. При повторении опыта со свежеприготовленным, совершенно нейтральным раствором пероксидазы имела место, как и ранее, задержка действия тирозиназы. С другой стороны, следы молочной или уксусной кислоты вызвали таксе же ускорение окислительного процесса, как и кислая нероксидаза. Применявшаяся фракция тирозиназы содержала ненормально большое количество золы (32.4%). [c.437]

Как известно, тирозиназа занимает среди ферментов особое место, играя )Оль строго специфической оксидазы по отношению к тирозину в то же время она окисляет некоторые фенолы, как фенолаза, которая, с своей отороны, не оказывает никакого действия на тирозин. Для объяснения 5 той частичной специфичности были предложены различные гипотезы, но ИИ одна из них не соответствует фактам. В связи с опытами над кофермен-том пергидридазы и гидролитическим окислением а-аминокислот с образованием альдегидов непосредственно предшествующих гомологов этих кислот при одновременном восстановлении подходящих акцепторов водорода (реакция Штрекера), я подверг это загадочное действие тирозиназы детальному исследованию. [c.465]

При изучении инактивирования инвертазы дрожжей при помощи тирозиназы Сайзер [65в] обнаружил, что препараты тиро-зиназы, полученные из различных источников, сильно различались по своей активности независимо от степени чистоты, что является труднообъяснимым. Дальнейшее исследование показало, что инактивирование инвертазы тирозиназой можно значительно ускорить добавлением определенных соединений типа фенола, превращающихся под действием тирозиназы в хиноны, которые, в свою очередь, инактивируют инвертазу [65г]. В этой системе тирозиназа может быть заменена РеСЬ. Кроме того, окисление в присутствии фенолов не было специфическим, так как оно затрагивало первичные амино- и сульфгидрильные группы, а также тирозильные остатки, а пепсин, трипсин, химотрипсин и инсулин легко можно было инактивировать совместным действием тирозиназы и этих фенольных соединений. [c.289]

Применяя респирометр Варбурга, Хигучи [107, 108] испытал большое число ароматических соединений, более или менее близких структурным звеньям лигнина. Эти исследования были предприняты с целью дальнейшего изучения действия грибной фенолоксидазы, лакказы из японского лака и тирозиназы из картофеля, которые могут играть роль в биосинтезе лигнина, и влияния окиси углерода на грибную фенолоксидазу. Результаты этих исследований приведены в табл. 10. [c.831]

Исследование ферментативных реакций с помощью спектральных методов указывает на стабилизацию промежуточных продуктов ферментативного процесса [4]. При окислении пирокатехина, нанример в присутствии фермента тирозиназы был зарегистрирован спектр семихинона, стабилизированного на ферменте [5]. Флавиновый радикал, стабилизированный в результате комнлексообразования с Си , был обнаружен нри действии линоилдегидрогеназы [6]. Представляется, что направление многих ферментативных реакций определяется характером взаимодействия промежуточных продуктов с поверхностью фермента. [c.208]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология