Седиментационное равновесие при центрифугировании в градиенте плотности

Теория седиментационного равновесия в градиенте плотности усложняется тем, что 1) для создания градиента обычно применяют очень высокую концентрацию соли (5—7 М), что не позволяет рассматривать систему как двухкомпонентную, 2) положительно и отрицательно заряженные ионы соли распределяются в объеме неодинаково, так как они обладают разными молекулярными массами и коэффициентами диффузии, а это приводит к созданию градиента электрического потенциала, и 3) скорости центрифугирования настолько высоки, что уже нельзя пренебрегать влиянием давления. По этой причине данный метод обычно не используется для определения молекулярных масс, однако, так как его можно применять, если данные обрабатываются соответствующим образом, приведем краткое его описание. [c.331]

Аналитическое ультрацентрифугирование полимеров [1, 2, 4, 12] включает в себя три следующих экспериментальных метода скоростную седиментацию, изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к нему. Скоростная седиментация позволяет определить константу седиментации и полидисперсность образца. Седиментация макромолекул в зоне (зонное ультрацентрифугирование) — ценный метод обнаружения гетерогенности высокомолекулярного образца. Метод приближения к равновесию позволяет рассчитать молекулярную массу М и получить сведения о неоднородности полимера, а изучение седиментационного равновесия (состояния, достигаемого транспортным переносом макромолекул, хотя сам метод и не является истинно транспортным) — молекулярную массу (надежнее, но с большей затратой времени, чем в предыдущем методе) различных типов усреднения. Метод центрифугирования в градиенте плотности заключается в исследовании седиментации, состояния равновесия и приближения к нему в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности это — широко используемый метод определения молекулярной массы, наличия неоднородности и ее типа, служащий и для препаративных разделительных целей. [c.14]

Седиментационный анализ включает следующие три основных экспериментальных метода скоростную С., изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к равновесию. Скоростная С. позволяет определить константу С. полимера и полидисперсность образца изучение седиментационного равновесия — мол. массу различных типов усреднения изучение приближения к равновесию — мол. массу (менее надежно, но и с меньшей затратой времени, чем в предыдущем методе) и неоднородность состава полимера. Процесс С., состояние равновесия и приближение к нему м. б. исследованы также в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности центрифугирование в градиенте плотности — важный метод определения мол. массы, наличия неоднородности и ее типа служит также для разделения. [c.198]

Центрифугирование в градиенте плотности. Конвекционные возмущения и взаимодействие между молекулами растворенного вещества сводятся к минимуму или совершенно исключаются, если центрифугирование проводят в непрерывном градиенте плотности. Существует два метода этого типа метод, основанный на измерении скорости седиментации, и метод седиментационного равновесия. [c.138]

Мол. веса с помощью ультрацентрифуг определяются тремя методами методом определения скорости седиментации, методом седиментационного равновесия и методом центрифугирования в градиенте плотности. [c.409]

До сих пор мы рассматривали случаи, когда плотность изучаемых молекул намного превышала плотность растворителя. В этом разделе будет описан важный метод седиментационного равновесия в градиенте плотности (его разработали Мэтью Мезелсон, Франклин Шталь и Джером Виноград), в котором плотность растворителя почти такая же, как и плотность изучаемой молекулы. Этот метод требует присутствия третьего компонента (обычно соли цезия) с низкой молекулярной массой и высокой плотностью. При центрифугировании раствора соль перераспределяется [в соответствии с уравнением (13)] с достижением равновесия, образуя тем самым градиент концентрации, который имеет меньшую плотность сверху и большую — у дна пробирки, т. е. градиент плотности. Макромолекулы при этом [c.329]

Б ДНК но мере размножения бактерий с интервалом в несколько поколений. Каждую пробу обрабатывали додецилсульфатом натрия и центрифугировали в градиенте плотности Gs l нри 140 ООО g в течение 20 час, чтобы дать возможность ДНК достичь седиментационного равновесия. Полосы ДНК были обнаружены в градиенте хлористого цезия при плотности 1,71 г1см они хорошо отделились от всех остальных макромолекулярных компонентов бактериального лизата. Положение полос ДНК определялось в ходе центрифугирования по поглош ению в ультрафиолете. [c.196]

Уравнение (XI11-58) позволяет также обосновать предложенный Болдуином и Шутером [60] метод разделения эффектов, обусловленных распределением по составу и молекулярным весам. Согласно уравнению (X И1-58), и %, и 6 приблизительно пропорциональны четвертой степени угловой скорости. Поэтому изучение седиментационного равновесия при различных скоростях центрифугирования не может разделить эти эффекты, поскольку изменение скорости одинаковым образом влияет на оба члена в правой части уравнения (XI11-58). Метод Болдуина и Шутера заключается в независимом изменении параметров Х я Ь. При изменении скорости перераспределение полимера в полимерной полосе, соответствуюш,ее измененной скорости вращения, происходит со скоростью, превышающей скорость установления нового градиента концентрации. Поэтому метод называется центрифугированием в предварительно установленном градиенте. После изменения скорости вращения от (Й1 до 0)2 полимер осаждается в поле центрифуги, соответствующем Я = А (со 2) и пропорциональном в то время как градиент плотности Ь [c.442]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология