Щелочные градиенты плотности

Разделение ДНК в градиенте плотности. Центрифугирование в щелочном сахароз- [c.892]

При определении плавучей плотности ковалентно-замкнутой ДНК вируса полиомы (так называемой ДНК I) в градиенте плотности хлористого цезия с изменяющимся значением pH (щелочная область) наблюдается двухстадийный переход к денатурированному состоянию, характеризующемуся большей плавучей плотностью. Сопоставление этих результатов с аналогичными данными по изменению плавучей плотности той же самой ДНК, но с раз- [c.268]

В последнем замечании содержится намек на то, что опасность выпадения осадка в изоэлектрической точке существует и для самих очищаемых ИЭФ белков. Это действительно так, что иногда заставляет принять особые меры по увеличению растворимости этих белков. Иной раз присутствие сахарозы неблагоприятно сказывается на растворимости белка. В этом случае следует построить градиент плотности путем добавления к раствору амфолитов глицерина (до 60%), этиленгликоля (до 75%) или сорбита (до 50%). Кстати, если фокусирование предполагается вести при рН>9, то сахарозу вообще лучше заменить сорбитом. В щелочной области pH сахароза диссоциирует как слабая кислота и может нарушить характер градиента pH, образуемого амфолитами. [c.72]

Из уравнений (3.10) и (3.11) следует, что плотность тока гидроксид-ионов в диафрагме зависит от градиента электрического потенциала и концентрации гидроксид-ионов в ней и от скорости противотока анолита, т. е. в конечном итоге зависит от толщины диафрагмы и концентрации гидроксида щелочного металла в католите. [c.49]

Все рассмотренные выше способы определения стц предполагают, что нам известен угол, на который раскручивается ДНК при связывании с одной молекулой этидия. Мы уже упоминали, что первоначально полученная величина ф = —12° — это весьма грубая оценка, найденная с помощью построения пространственных моделей, которая согласовалась с результатами измерения угла раскручивания ДНК при щелочном тлтровании. В этих последних измерениях, однако, имелись некоторые трудности. За происходящими изменениями следили с помощью регистрации коэффициента седиментации или плавучей плотности, но в обоих случаях трудно было определить ту точку на кривой титрования, в которой происходит релаксация сверхвитков. Недавно Уонгу удалось более точно определить положение этой точки при этом он использовал молекулы с искусственно созданной сверхспирализацией, при титровании которых требовалось порядка 100 или более гидроксильных ионов на молекулу для снятия всех сверхвитков. Из сопоставления результатов измерений в щелочном градиенте плотности с результатами титрования этидием было получено новое значение Ф = —26°. При этом все предыдущие оценки числа сверхвитков изменяются приблизительно в два раза. [c.404]

Свендсен [1254] сконструировал аппарат, в котором фракционирование содержимого колонки с градиентом плотности осуществляется при включенном электрическом поле. В этом аппарате нижний электрод отделен от колонки полупроницаемой мембраной и расположен в опециальном отсеке с подводящей и отводящей трубками, что позволяет прокачивать через него электролит из другого резервуара и таким образам удалять выделяющиеся при электролизе пузырьки газа. По окончании ИЭФ, не отклю чая напряжения, в пространство, находящееся непосредственно над полупроницаемой мембраной, насосом подают концентрированный раствор сахарозы. Одновременно вторым насосом из колонки откачивают жидкость через расположенную над мембраной выводную трубочку, причем скорость отсасывания содержимого колонки должна превышать скорость поступления раствора сахарозы. Благодаря такой разнице в производительности насосов образуется очень стабильная контактная поверхность раздела между поднимающимся снизу плотным раствором сахарозы и опускающейся сверху до уровня выводной трубки менее плотной жидкостью, заполняющей колонку. Описанная система полностью исключает перемешивание раздел ившихся белков, неизбежно происходящее в отсутствие электрического поля из-за наличия диффузии. Поэтому удается получить очень узкие зоны. К сожалению, pH собранных фракций сильно изменяется под влиянием раствора сахарозы, который может быть кислым или щелочным. Вследствие этого невозможно определить изоэлектрические точки выделенных белков. [c.139]

Боддин И др. [144] предложили иной способ извлечения фракций из колонки с градиентом плотности без отключения электрического тока по окончании ИЭФ. Этим способом можно получать компоненты разделенной смеси, ие смешивая их с кислыми или щелочными электродными растворами. Он вклю- [c.139]

В некоторых случаях возникает необходимость использовать ИЭФ для фракционирования больших количеств веществ. Для этой цели разработана методика непрерывного проточного изоэлектрического фокусирования в градиенте плотности [365] с применением аппарата, обладающего практически неограниченной емкостью. Принцип работы такого аппарата схематически представлен на рис. 58. ИЭФ проводят в прямоугольной ячейке, образованной двумя параллельными стеклянными пластинами, установленными вертикально на расстоянии 0,3 см друг от друга. С одной стороны 1В пространство между стеклами подают растворы, содержащие 1, 2, 3.. .50% сахарозы и смесь амфолитов-носителей, используя для этого 50 каналов 108-канального перистальтического насоса. Катод, расположенный в верхней части ячейки, находится в непосредственном контакте с щелочным раствором, прокачиваемым через четыре верхние трубки. Анод помещен в вертикальный сосуд, отделен-И1ЛЙ от градиента плотности полупроницаемой мембраной. Рас- [c.141]

Мэтью Мезельсон и автор этой книги использовали данный метод для того, чтобы показать, что ДНК профага вставляется в бактериальную ДНК. Штамм Е. oli, содержащий кольцевой половой фактор с местом присоединения для фага подвергали лизогенолизу. Половой фактор вместе с присоединенным профагом выделяли и комбинацией центрифугирования в щелочном градиенте сахарозы и в s l, содержащем бромид этидия, показали, что он обладает кольцевой структурой большей величины. Однако этот тест не давал возможности сделать выбор между двумя альтернативами, так как лизогенная форма могла представлять собой большее кольцо или катенан, состоящий из связанного полового фактора и кольца К. После введения одноцепочечных разрывов при обработке рентгеновскими лучами кольца получали плотность, совпадающую с плотностью линейной ДНК, причем не было обнаружено зон с промежуточной плотностью. Отсюда был сделан вывод, что лизогенная форма представляет собой непрерывное кольцо. [c.344]

Примеры использования зонального центрифугирования в препаративной ультрацентрифуге 313 Зональная седиментация в самогенерирующемся градиенте плотности 317 Седиментация ДНК при щелочных значениях pH 319 Определение молекулярной массы методом седиментации — диффузии 320 [c.578]

Частицы аэрозолей серы и селена могут осаждаться в виде шариков в переохлажденном состоянии, затем в нескольких цен трах может начаться кристаллизация, и эти кристаллы растут за счет изотермической перегонки из переохлажденных частиц Многое зависит от размера исходных частиц и плотности осадка Если эти параметры превышают некоторую критическую величину, про исходит рост крупных капель за счет более мелких, тогда как при низких концентрациях и размерах растут кристаллы Это различие связано с градиентом концентрации пара, по мнению Кольшют гера такие же изменения происходят и во взвешенных частицах Многочисленные данные по конденсации, росту и испарению жидких и твердых частиц аэрозолей галогенидов щелочных и более тяжелых металлов были опубликованы Бакпом Мелкие капельки расплавов этих солей получались путем конденсации перегретого пара Для изучения фазовых превращений в частицах была использована высокотемпературная обтачная камера Методика исследования сводилась к тому, что отмечалось начало мер цания освещенных сбоку частиц, изменение в устойчивости аэро золя и перемены в форме осевших частиц [c.73]

В этой связи интересно, хотя бы вкратце, остановиться на изменениях реальной структуры кристаллов, подвергнутых действию взрьгаа. Благодаря огромным градиентам давлений на фронте ударной волны (УВ) происходит интенсивное перемалывание кристаллических зерен, увеличение плотности дислокаций, разориентация кристаллитов. В кристаллах щелочных галогенидов, MgO и СаРз после прохождения УВ средней (или даже малой) интенсивности плотности дислокаций повысились на 2-7 порядков, достигая значений 10 на 1 см . Если повысить интенсивность УВ, то концентрация дислокаций еще увеличится и может наступить такой момент, что после снятия нагрузки кристалл не сможет сорганизоваться в достаточно крупное образование (способное к автономному существованию) и превратится в структурно-беспорядочное состояние, т.е. в стекло. Такое ударное стеклование наблюдалось у кварца и силикатов, и, по-видимому, оно вообще характерно для процессов на Луне, происходящих в результате бомбардировки ее поверхности метеоритами. [c.159]

При фракционировании нуклеиновых кислот для воздействия на их плавучую плотность можно варьировать добавки соли и pH среды. Фракционирование белков в градиентах метризамяаа не очень удобно ввиду высокой вязкости необходимых для этой цели довольно концентрированных растворов метризамида (40—50% rnlV). Особенно ценен метризамид для равновесного фракционирования нуклеопротеидов, которые в его растворах Hf диссоциируют и имеют небольшую плавучую плотность. Метризамид. можно использовать в щелочной среде (pH 12), когда ДНК денатурирует, и удается, например, изучать распределение белков по комплементарным нитям молекул ДНК [Russev, Tsa-nev, 1976]. [c.272]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология