Титрование фага

Первый способ заключается в отборе мутантов по морфологии стерильных пятен, образуемых частицами бактериофага на твердой питательной среде. Напомним, как производится титрование бактериофагов. На пластинку питательного агара в чашке Петри наливают небольшую порцию расплавленного мягкого агара (берется 0,65%-й агар с питательной средой, он плавится ири 45° С). Туда же вносится некоторый объем суспензии бактерий, на которых фаг паразитирует, например Е. соИ В для [c.366]

Следовательно, индикаторами могут быть ОАР, содержащие кроме характерной для исследуемой системы ФАГ (в случае кислотноосновного титрования наличие групп, способных к участию в протолитических равновесиях), еще и хромофорную группу. Часто функции обеих групп бывают сосредоточены в одной. [c.102]

Эффективность размножения фага определяли титрованием его препарата на газоне бактериальных клеток. Данная процедура заключается в том, что к суспензии клеток добавляют определенное количество фагового препарата и затем эту смесь равномерно наносят на прозрачную агаризованную питательную среду в чашках Петри (рис. 1.4). Через определенное время клетки образуют на поверхности твердой а б [c.13]

Для быстрого выявления фага большое значение имеет правильный выбор среды для титрования. При этом следует по возможности использовать не просто регламентные среды, но и конкретную партию среды, взятую для данной операции. Дело в том, что приготовленные из нестандартизованных компонентов (мелассы, например) среды могут существенно различаться наличием специфических кофакторов, необходимых для поддержания роста фагов. [c.213]

Сообщение Д Эрреля вызвало сенсацию среди медицинских микробиологов, поскольку он высказал идеи о роли фагов в развитии естественного иммунитета и об их использовании в борьбе с инфекционными болезнями. Несмотря на такие весьма ошибочные заявления, Д Эррель довольно близко подошел к современному представлению о фагах. С самого начала своих исследований Д Эррель считал, что фаги — это особые невидимые фильтрующиеся, самовоспроизводящиеся вирусы, облигатно паразитирующие на бактериях. В течение двух-трех лет со времени своего открытия он разработал метод точного подсчета, или титрования, фагов, а к 1923 г. он описал их жизненный цикл следующим образом фаговые частицы прикрепляются к поверхности бактерии и затем проникают в клетки, где они размножаются, образуя потомство многих вирусных частиц. После разрушения, или лизиса, клетки эти частицы выходят в окружающую среду вполне готовыми к новому заражению. [c.252]

Таблица 5. Результаты титрования фага по методу Грациа (форма протокола)

Для титрования бактериофага предложены различные методы, однако наибольшее распространение получили способ титрования фага в жидкой питательной среде, предложенный Аппельманом, и метод агаровых слоев Грациа. [c.78]

В день постановки опыта из жидкости, содержащей титруемый фаг, готовят в пробирках ряд последовательных десятикратных разведений (так же, как при титровании фага на жидких средах по методу Аппельмана). Для разведений фага можно пользоваться стерильным бульоном или изотоническим раствором хлорида натрия. [c.79]

Фаги получают культивированием пораженных фагом бактерий и вьщелением из культуральной жидкости фильтрата, содержащего фаги, с последующим его высушиванием и таблети-рованием. Титрование фагов производят на соответствующих чувствительных к нему культурах бактерий, выращенных на плотных или жидких питательных средах. [c.190]

При попытках построения генетических карт бактерий для больших участков хромосомы необходимо измерять вероятность вхождения w x). Для этого были предложены различные методы. Один из них использует явление зиготной индукции профага. При конъюгации мужской клетки, несуш,ей профаг, т. е. лизогенной, и женской, нелизогенной, происходит часто переход профага в вегетативную форму и лизис клетки. Причина зиготной индукции в том, что генетическое веш,ество бактериофага попадает с отцовской хромосомой в материнскую клетку, которая не лизогеннаи, следовательно, чувствительна к фагу. Если конъюгировать клетки Н г(Л.+) с клетками Г (Я,"), отбирать в разные моменты времени пробы и засе- вать их на чашках Петри так, как это делается при титровании бактериофага [c.337]

Комплексонометрические индикаторы (мешаллоиндикаторы). Эта группа индикаторов, применяемых при титровании с образованием устойчивых комплексов, включает сопряженные системы, состоящие из комплексообразующего органического реагента (металлоиндикато-ра) и окрашенного комплекса металла. Другими словами, металлоин-дикатором является ОАР, образующий окрашенный комплекс с ионами титруемого металла (молекула органического реагента содержит ФАГ на титруемый ион металла). Причем, во-первых, окраска образованного комплекса обязательно будет резко отличаться от окраски свободного ОАР при данном значении pH, во-вторых, при прямом титровании константа устойчивости окрашенного комплекса иона металла с металлиндикатором должна быть меньше константы устойчивости комплекса иона металла с комплексообразующим реагентом-титрантом. [c.103]

Бромурацил в условиях, при которых он действует как мутаген, включается в фаговую ДНК вместо тимина. Само по себе, однако, такое включение 5-бромурацила в полинуклеотидную цепь ДНК нельзя считать мутацией, так как при удалении мутагена из культуральной среды остатки 5-бромурацила, находящиеся в ДНК родительского фага, будут в молекулах-репликах вновь заменены остатками тимина. То же происходит и при титровании меченного бромурацилом фага на чашках с обычным питательным агаром. Следовательно, замена тимина бромурацилом не вызывает устойчивого изменения в последовательности нуклеотидов фаговой ДНК, или изменения содержащейся в ней информации. Мутагенное действие 5-бромурацила следует скорее объяснить его способностью повышать вероятность возникновения ошибок копирования, в результате которых одна пара оснований устойчиво заменяется на другую. Почему же эта вероятность под действием 5-бромурацила увеличивается Бромурацил, так же как и тимин, чаще всего находится в /сето-форме и поэтому спаривается с аденином. Однако вследствие присутствия брома в положении 5 пиримидинового кольца он может находиться в более редкой енольной форме, которая незаконно спаривается с гуанином гораздо чаще, нежели тимин (фиг. 155). Таким образом, бромурацил может повышать частоту появления ошибок копирования двумя путями, а именно [c.318]

После этого лизируйте клетки добавлением хлороформа (2 мл/л). При лизисе должны быть видны хлопья. Отцентрифугируйте клеточные остатки при 4000 об/мин в препаративной центрифуге и оттитруйте осветленный лизат. В данном случае хелпериый фаг мало жизнеспособен и поэтому для титрования космид не нужно использовать Х-лизоген. Для титрования примените методику, описанную в разд. 2.2.5.3. [c.59]

Для получения маточных бактериофагов к пробам речных и сточных вод подсевают соответствующую культуру бактерии и после инкубации при 37°С фильтруют через стерилизующие фильтры. Литическая активность фильтратов проверяется титрованием в жидкой питательной среде (по Аппельману) с набором штаммов данного вида. Наиболее активные используют для приготовления маточных фагов. [c.580]

Густота микробной взвеси, прибавляемой в пробирки с титруемым бактериофагам, существенного значения не имеет, так как опытным путем (Л. Д. Переметина) было установлено, что изменение микробной концентрации в пределах 100000—4 500 000 в 1 мл не оказывает заметного влияния па исход титрования бактериофага. Пробирка 11-я — контроль культуры, содержит 5 мл бульона и 0,2 мл бульонной культуры микробов. Пробирка 12-я — контроль на стерильность, содержит 5 мл бульона без добавления культуры и фага. Штатив с пробирками помещают в термостатчпри 37 °С на 18—20 ч. [c.78]

Цифрами обозначена относительная эффективность титрования препаратов фага на определенном штамме Е. oli [c.13]

Обнаружилось, что эффективность титрования Я С на . соН К12 составляла лишь 2 10 относительно того же цоказателя на Е. соН С (рис. 1.5). Однако немногочисленное потомство фага Я С, выросшее на Е. соН К12, уже с одинаковой эффективностью титровалось на обоих штаммах Е. соН. Было показано, что фаг Я К не является генетическим мутантом фага Я С. Поэтому предположили, что Я К представляет собой модифицированный вариант фага Я-С и эту модификацию осуществляет клетка-хозяин. [c.13]

Скорость роста заражежых клеток на 25-50 % ниже, чем неинфицированных. Поэтому при титровании нитевидные фаги образуют на бактериальном газоне мутные бляшки. При размножении нитевидных фагов в бактериальной клетке их геном одновременно присутствует в виде большого числа копий двухцепочечной кольцевой плазмиды и одноцепочечной ДНК в составе вирионов. Из одного литра инфицированной культуры получают несколько миллиграммов одноцепочечной и репликативной двухцепочечной форм фаговой ДНК. На одноцепочечной вирионной ДНК многие манипуляции по созданию гибридных молекул, разработанные для вирусных и плазмидных двухцепочечных ДНК, реализовать нельзя. Однако они с успехом применимы к репликативной форме генома нитевидных фагов, которая инфекцион-на в тесте трансфекции клеток Е. oli. Все это обусловило использование нитевидных фагов для создания клонирующих векторов. [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология