Измерение флуоресценции

Флуориметрический метод является наиболее чувствительным методом анализа в ТСХ. Определение количества вещества в пятне этим методом можно проводить двояко во-первых, измерением флуоресценции комплексных соединений, образующихся при взаи- [c.151]

Флуоресцентная спектрофотометрия — это измерение флуоресценции, т. е. фотолюминесценции, испускаемой веществом, подвергнутым воздействию света, ультрафиолетового или другого электромагнитного излучения. Как правило, максимум интенсивности света, испускаемого флуоресцирующим раствором, обнаруживается при длине волны, большей чем максимум возбуждающего света обычно на 20—30 нм. [c.52]

Рис. 18. Схема установки для измерения флуоресценции

По спектрам поглощения и флуоресценции выбрать подходящие первичный и вторичный светофильтры для измерения флуоресценции на флуориметре. [c.94]

Метод импульсного фотолиза может быть использован для изучения флуоресценции (интенсивности, тушения флуоресценции). При помощи импульсного фотолиза очень удобно исследовать замедленную флуоресценцию. Для изучения флуоресценции в установке импульсного фотолиза в самом простом варианте исключается зондирующий свет. Если для измерения флуоресценции использовать дополнительную отражающую полупрозрачную пластинку, расположенную на пути зондирующего луча, то в одном эксперименте одновременно можно измерять оптическую плотность короткоживущих продуктов, например триплет — триплетного поглощения, и интенсивность флуоресценции. [c.169]

При измерении флуоресценции очень разбавленных растворов существенный вклад в общее измеряемое испускание вносит флуоресценция кюветы и растворителя. Всегда следует проверять флуоресценцию чистого растворителя при тех же условиях, в которых измеряется и флуоресценция самого раствора. Если она значительна, получаемый спектр следует вычитать из спектра раствора до его исправления. Для веществ, имеющих относительно долгоживущую флуоресценцию, существенное значение может иметь тушение растворенным кислородом. Кислород обычно удаляют пропусканием через раствор тока азота или вакуумированием. [c.70]

Почему для измерения флуоресценции используют только разбавленные растворы концентрацией 10 - моль/л и менее [c.218]

Значительно большую информацию удается получить из спектров флуоресценции в парах, которые, как правило, имеют определенную структуру, т. е. содержат узкие характерные полосы. Однако измерение флуоресценции в парах является трудной экспериментальной задачей и для малолетучих соединений просто невыполнимо. [c.56]

Рассмотрим несколько типов реакций возбужденных молекул, которые удобно изучать с помощью измерения флуоресценции. [c.68]

ПРИМЕНЕНИЕ ИМПУЛЬСНОГО ФОТОЛИЗА ДЛЯ ИЗМЕРЕНИЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ [c.296]

Рис. 18.4. Оптическая схема прибора для измерения флуоресценции растворов в проходящем свете

Рис. 18.5. Оптическая схема для измерения флуоресценции растворов под углом в 90°

Температурную зависимость флуоресценции меток и зондов измеряют в приборах с термостатируемым кюветным отделением, изменяя температуру от 5 до 40° С со скоростью 2—3° С в мин. В отсутствие приборов такого класса можно инкубировать пробы непосредственно в кюветах, термостате, а измерение флуоресценции проводить по возможности быстро, в течение 1—1,5 мин. [c.367]

Тушение примесями. Здесь следует отметить, что при измерении флуоресценции необходимо использовать очень чистые растворители и изучаемые вещества. [c.269]

Приборы для измерения флуоресценции и фосфоресценции аналогичны фотометрам с фильтрами для работы в УФ/вид.-области, но предусматривают наличие светового луча сравнения и детектора для измерения фона (рис. 9.1-15 и 9.1-16). [c.161]

В чем теоретическое отличие процессов флуоресценции и фосфоресценции В чем отличие практического применения этих процессов Каковы пределы обнаружения методов, основанных на измерении флуоресценции и фосфоресценции [c.164]

Фурокумарины флуоресцируют в более длинноволновой области спектра, чем кумарины, с более слабой интенсивностью. Минимальная концентрация для измерения флуоресценции наиболее сильно флуоресцирующих соединений — 0,01 мкг/мл (5-метоксипсорален). [c.76]

Кюветы, используемые при измерении флуоресценции, могут быть прямоугольными, аналогичными кюветам, применяемым Б абсорбционных спектрофотометрах их отличие состоит в том, что все 4 вертикальные стенки и основание должны быть отполированы можно применять также кюветы в виде пробирок с плоским отполированным основанием. Удобный размер кювет 2—3 мл, но некоторые приборы могут быть снабжены небольшими кюветами емкостью 0,1—0,3 мл или капиллярной кюветой, требующей еще меньше раствора. [c.54]

Измерения флуоресценции чувствительны к присутствию в испытуемом растворе твердых частиц. Такие частицы могут снижать интенсивность возбуждающего луча или давать ошибочно высокие показания вследствие множественного отражения в кювете. Поэтому целесообразно удалять твердые частицы центрифугированием можно применять и фильтрование, но некоторые виды фильтровальной бумаги могут содержать флуоресцирующие примеси. [c.55]

Методы, используемые для обнаружения и измерения радиоактивности, зависят от природы и энергии радиации. Радиоактивность может быть обнаружена и/или измерена различными приборами, принцип действия которых основан на улавливании и регистрации количества возникших ионов газов, на измерении флуоресценции отдельных твердых веществ и жидкостей или измерении эффекта воздействия излучения на фотоэмульсию. [c.64]

Определение 10 —10 г S в металлических Ве, Zr, Nb и их окислах основано на измерении флуоресценции при 365 нм сульфата хинина, образующегося из солянокислого хинина в присутствии SO -ионов [473]. [c.133]

Вначале производят измерение флуоресценции в стандартном растворе и в контрольном опыте к нему, а затем в испытуемых растворах и в контрольном опыте к ним. [c.102]

АНС — флуоресцентный зонд, нековалентно связывающийся с белками и неполярными областями мембран. При связывании АНС с бе,л-ками или мембранами его флуоресценция значительно возрастает, так как квантовый выход флуоресценции АНС зависит от полярности его окружения и увеличивается в гидрофобных средах. Максимум возбуждения АНС — 360 нм, максимум флуоресценции — 460—480 нм (в зависимости от полярности микроокружения). При работе с препаратами СР измерение флуоресценции проводят в среде, содержащей 100 мМ КС1, 0,5 мМ ЭГТА и 50 мМ имидазол, pH 7,0. Концентрация белка СР в кювете — 0,3—0,5 мг/мл, концентрация АНС — от 5 до 75 мкМ (в зависимости от чувствительности прибора и поставленной задачи). [c.366]

Содержимое обеих кювет поступает на измерение флуоресценции. [c.137]

Примечание Если при окислении перманганатом раствор во второй колбе от прибавления 1 капли перманганата окрашивается в розовый цвет, мешающих измерению флуоресценции примесей в испытуемом растворе не содержится Тогда при расчете принимают во внимание показания флуорометра для первой кюветы, содержимое, которой не подвергалось окислению. [c.137]

При измерении квантовых выходов флуоресценции относительно стандартного вещества возможны ошибки за счет эффектов внутреннего фильтра (реабсорбция), немонохроматичности возбуждающего света, флуоресценции кювет, тушения кислородом и фоторазложения. Ошибку, обусловленную первым фактором, легко устранить, используя достаточно разбавленные растворы. Для предотвращения немонохроматичности следует проверять чистоту возбуждающего света. Во избежание ошибки при измерении оптической плотности следует по возможности измерять оптическую плотность раствора пучком света того же спектрального состава, что и при возбуждении флуоресценции. Необходимо проводить дополнительные измерения для учета флуоресценции растворителя, стенок кюветы. Для этого при исследовании растворов необходимо измерить в тех же условиях спектр флуоресценции растворителя. Спектр, полученный при измерении флуоресценции растворителя, вычитается из спектра, полученного при измерении раствора, до его исправления. [c.160]

Для измерения флуоресценции используют специально предназначенные для этой цели флуоресцентные спектрофотометры, позволяющие с помощью монохроматоров задавать длины волн для возбужда-i0щeг0 и испускаемого света. Испускаемый флуорофором свет обычно регистрируют под углом 90° к падающему свету. В отсутствие флу- [c.365]

ПФ пе должна поглощать свет ни на длине поглогцения, ни на длине волны излучения. Рассеянный свет от источника вО збужда-ющего излучения, который возникает из-за наличия в элюате крупных молекул или других рассеивающих излучение частиц, также способен исказить результа гы измерения флуоресценции. [c.260]

В качестве детекторов на настоящей стадии разработки метода наиболее часто применяются устройства, основанные на ультрафиолетовой спектрофотометрии, на измерении показателя преломления или на измерениях флуоресценции. Для фармацевтических целей наиболее подходящим является ультрафиолетовый спектрофотометр, обладающий высокой чувствительностью (низший уровень обнаружения составляет 1—2 нг для материала, имеющего хорошие светопоглощающие свойства) и стабильностью (в частности он отличается низкой чувствительностью к контролируемым изменениям в составе растворителя и неравномерности потока) естественно, что такой детектор не может быть использован, если элюируется материал, не имеющий заметного поглощения в ультрафиолетовой области. Рефрактометр реагирует на разницу в показателе преломления чистой подвижной фазы и подвижной фазы, содержащей элюируемый материал этот метод имеет более широкое применение, чем адсорбционная опектрофото-метрия в ультрафиолетовой области, но он малочувствителен и в значительной степени зависит от небольших изменений в составе растворителя, от скорости потока и температуры. [c.104]

Другой пример сильного взаимодействия белка с ДНК—регуляция оперона белком-репрессором. Наиболее изученным примером является 1ас-оперон Е. соИ [25]. Ген-регулятор кодирует синтез белка 1ас-репрессора, который затем связывается с соседним оператором. Связывание с белком-репрессором малой молекулы— индуктора, например изопропилтио-р- )-галактопиранозида, вызывает диссоциацию репрессора с операторного участка. Последующая транскрипция трех соседних генов оперона приводит к биосинтезу трех ферментов — Р-галактозидазы, галактозопермеазы и тиогалактозидтрансацетилазы. 1ас-Репрессор представляет собой тетрамерный белок, состоящий из идентичных субъединиц по 347 аминокислот каждая. Сродство репрессора к последовательности ДНК оператора зависит от ионной силы константа диссоциации в клетке, вероятно, менее 10 " моль/л . Структура участка связывания ДНК в 1ас-репрессоре до сих пор не выяснена, однако удаление трипсином 59 остатков с Л -конца и 20 остатков с С-конца предотвращает связывание. Несколько больше известно об участке связывания индуктора. Измерения флуоресценции показывают, что находящийся в участке связывания индуктора остаток триптофана при связывании перемещается в менее полярное окружение. Изучение изменения флуоресценции методом остановленного потока показывает, что процесс связывания проходит в две стадии. Быстрая начальная стадия подчиняется, как и ожидалось, кинетике второго порядка. Более медленная стадия мономолекулярна и, по- [c.569]

На измерении флуоресценции продуктов окисления птероил-L-глутаминовой кислоты основан метод обнаружения малых количеств витамина в биологических материалах [37—39]. [c.462]

Наибольшее распространение получили методы с использованием тетрартутьацетатфлуоресцеина. Щелочные растворы реагента флуоресцируют в УФ-овете ярким зеленым цветом. В присутствии сульфидной серы, а также тиофенола, метилмерксщтана, тиомочевины, тиоацетамида, диэтилдитиокар-баматов и других серусодержащих веществ флуоресценция раствора гасится вследствие взаимодействия реактива с серусодержа-щим остатком. При титровании раствором тетрартутьацетатфлуоресцеина растворов серусодержащих веществ в ультрафиолетовом свете в точке эквивалентности возникает яркая зеленая флуоресценция. Чувствительность реакции при измерении флуоресценции в области 530 нм составляет 0,01 мкг серы в 10 мл 1%-ного раствора КОН. [523]. Визуальная чувствительность титрования равна 0,002 мкг ъЪ мл раствора, относительная ошибка — 25% [501]. [c.121]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология