Эдман

Созданный в 1966 П. Эдманом с использованием этих принципов прибор и применение масс-спектрометра в сочетании с ЭВМ позволяют полностью автоматизировать процесс определения первичной структуры макромолекул. [c.405]

В период между 1925 — 1930 гг. Сведберг с помощью ультрацентрифугирования произвел определение молекулярных масс различных белков. Одновременно применение других аналитических методов, как, например, электрофореза и различных видов хроматографии, привело к развитию аналитической белковой химии. В 1951 — 1956 гг. Сенгер [20, 21] установил аминокислотную последовательность инсулина. Использованные при этом методы легли в основу систематического определения первичной структуры многих белков. Созданный Эдманом в 1966 г. секвенатор и применение масс-спектрометрии в сочетании с ЭВМ как средством регистрации, обработки и оценки масс-спектрометрических данных привели к тому, что к настоящему времени опубликовано более 15 ООО работ, посвященных определению аминокислотных последовательностей, и установлены первичные структуры более чем для 1000 белков. [c.343]

Важнейший химический метод ступенчатой деградации пептидов с N-конца — фенилтиогидантоиновый метод (деградация по Эдману) [100]. [c.369]

По предложенной Эдманом методике [87] пользоваться водными растворами кислот не рекомендуется во избежание случайного разрыва пептидных связей. При действии таких безводных реагентов, как растворы хлористого водорода в нитрометане, диоксане и ледяной уксусной кислоте [88], при комнатной температуре ФТК-пептиды расщепляются практически мгновенно. В случае высших ФТК-пептидов и ФТК-бел-ков эти реагенты дают низкие выходы ФТГ-производных [114, 284, 320], что, возможно, обусловлено нерастворимостью ФТК-производных или слишком жесткими условиями реакции. [c.242]

B заключение отметим, что несмотря на чрезвычайную перспективность масс-спектрометрии [30], метод деградации по Эдману применяется гораздо шире, главным образом благодаря большой информации, которую можно получить с его помощью. Однако масс-спектрометрия может создать здесь серьезную конкуренцию, если в будущем будет сведена на нет утомительная процедура выделения чистых пептидов. [c.279]

Деградация с помощью фенилизотиоцианата (ФТЦ) была предложена Эдманом [4, 51. Основные стадии реакции с ФТЦ представлены на схеме (стр. 282) ФТЦ, взаимодействуя со свободными [c.281]

Е. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ В ПЕПТИДАХ ДЕГРАДАЦИЕЙ ПО ЭДМАНУ И КОЛИЧЕСТВЕННЫМ АМИНОКИСЛОТНЫМ АНАЛИЗОМ [c.285]

Фенилтиогидантоины После деградации по Эдману [66] [c.314]

Эбергард 1057 Эванс 900, 936 Эве 1113 Эдер 726 Эдман 384 Эдсалл 399 [c.1155]

Огромный шаг вперед в химическом анализе полипептидов был сделан в 1950 г., когда П. Эдман установил, что N-кoнцeвyю аминокислоту можно удалить при помощи фенилизотиоциаиата. В результате следующая за пей [c.403]

А (Б. Меррифилд, 1969). Дальнейшее развитие получили аналит. методы стал широко использоваться автоматич. аминокислотный анализатор, созданный С. Муром и У. Стайном в 1958, существенно модифицированы хроматографич. методы, до высокой степени совершенства доведен рентгеноструктурный анализ, сконструирован автоматич. прибор для определения последовательности аминокислотных остатков в Б.-секвенатор (П. Эдман, Г. Бэгг, 1967) Благодаря созданию прочной методнч. базы стало возможным проводить широкие исследования аминокислотной последовательности Б. В эти годы была определена структура неск. сотен сравнительно небольших Б. (до 300 аминокислотных остатков в одной цепиХ полученных из самых разл. источников как животного, так и растит., бактериального, вирусного и др. происхождения. Среди них — протеолитич. ферменты (трипсин, химотрипсин, субтилн-зин, карбоксипептидазы), миоглобины, гемоглобины, цитохромы, лизоцимы, иммуноглобулины, гистоны, нейротоксины, Б. оболочек вирусов, белково-пептидные гормоны и др. В результате были созданы предпосылки для решения актуальных проблем энзимологии, иммунологии, эндокринологии и др. областей физ.-хим. биологии. [c.248]

К конструкциям, описанным выше, относятся приборы Голейшов-ского [64], Хоуга [65], Цуцкова [37] и Шредера [113]. Эдман [48] предложил механический вариант коллектора, в котором круг с пробирками поворачивается при помощи часового механизма. Боге и сотрудники [28] описали прибор, в котором элюат разливается по кругу при помощи специальной воронки, круг с пробирками в таком коллекторе не вращается (рис. 508). При этом предусмотрено простое приспособление, которое предотвращает попадание элюата в пространство между пробирками. [c.563]

Ряд методов основан на получении таких производных пептидов, которые в кислой среде распадаются с образованием циклических соединений, отщепляющихся от пептида. К ним относятся изоцианатные, тиоизоцианатные, карбаминовые и аналогичные производные. Наиболее важным из этих реактивов является фенилизоцианат и феннлизотиоциа-нат, использовать который предложил Эдман. При действии на пептид, например, фенилизотиоцианата в щелочной среде образуется фенил-изотиоциановое производное. [c.511]

Одним из самых ценных реагентов при работе с белками является фенилизотиоцианат, впервые примененный П. Эдманом. Это соединение реагирует с хМ-концевой аминогруппой пептидов [уравнение (2-25)]. Образующийся продукт циклизуется, что в кислой среде влечет за собой разрыв пептидной цепи (2-25). В итоге образуется соответствующий Ы-концевой аминокислоте фенилтиогидантоин, который можно идентифицировать. Проделав ту же операцию с укороченной указанным путем пептидной цепью, можно определить следующий аминокислотный остаток. При тщательной постановке эксперимента с помощью реакции Эдмана можно пройти вдоль пептидной цепи несколько десятков остатков. Есть специальные приборы — так называемые секвена-торы, в которых все необходимые операции осуществляются автоматически. [c.174]

Альтернативным путем для установления последовательности коротких пептидов является деградация по Эдману на твердой фазе. По аналогии со способом Меррифилда деградируемый пептид связывается ковалентно с полимерным носителем и ступенчато расщепляется с К-конца. Принципиальная применимость этого метода доказана во многих лабораториях. В качестве носителя чаще всего используют устойчивый к трифторуксусной кислоте аминоалкилполистирол. Присоединение секвенируемого пептида более предпочтительно через амидную связь. [c.371]

Другой метод определения Ы-концевых групп (разработанный в 1950 г. П. Эдманом в Университете Лунда, Швеция) основан на реакции между аминогруппой и фенилизотиоцианатом, приводящей к образованию замещенной мочевины (ср. разд. 29.14). Гидролиз соляной кислотой в мягких условиях селективно удаляет Ы-концевой остаток в виде фенилтиогидантоина, который затем идентифицируют. Большое преимущество этого метода состоит в том, что он не затрагивает остальной части пептида поэтому анализ можно вновь повторить и идентифицировать при этом следующую концевую группу в укороченном пептиде. В идеале этот метод можно использовать многократно до полного определения всей последовательности звеньев, аминокислота за аминокисло той однако на практике это оказывается неосуществимым. [c.1049]

Помимо непостоянных выходов, остатки аспарагиновой и глутаминовой кислот также дают производные при последовательной деградации по Эдману. [c.269]

Хотя описан ряд методов селективного расщепления определенных пептидных связей белковой цепи на такие фрагменты, которые можно анализировать по методу Эдмана, щирокое использование нащли всего несколько из них. Наиболее популярным методом является использование бромциана для расщепления пептидных связей по остаткам метионина схема (22) . Остаток метионина превращается в гомосерин и его лактон, которые становятся С-концевыми остатками всех фрагментов, за исключением С-концевого фрагмента исходного белка. Так как Met встречается относительно редко, фрагменты, получающиеся после подобного расщепления, довольно крупны, но с помощью современных вариантов анализа по Эдману можно проводить анализ их последовательности. Более того, лактон гомосерина на С-конце является подходящим участком для ковалентного связывания таких фрагментов с нерастворимым носителем при твердофазном секвентном анализе см. схему (17) . [c.273]

После того как установлена первичная структура- какого-либо белка, обычно нет необходимости проводить полное изучение аминокислотной последовательности у гомологичных белков из близких (соответствующих) источников. Быстрый ответ можно получить, используя технику трипсинового фингерпринта . Для этого подвергают гидролизу трипсином белок с известной структурой и параллельно ему гомологичный белок полученные в результате гидролиза пептиды разделяют обычно с помощью двумерного электрофореза или хроматографии. Если разница в последовательностях невелика, то больщинство пептидов должны занимать идентичное положение на двумерном фингерпринте. Те немногие пептиды, которые отличаются по подвижности, необходимо элюи-.ровать и подвергнуть аминокислотному анализу по Эдману. Эта техника особенно полезна при изучении аномальных гемоглобинов, которые отличаются от нормального природой только одного участка. [c.276]

Очевидным продолжением выщеописанной техники является комбинация газо-жидкостной хроматографии и масс-спектромет-рии для того, чтобы разделять и идентифицировать короткие пептиды, получаемые после гидролиза протеиназами. Например, дипептиды, получаемые гидролизом с помощью дипептидиламино-пептидазы (см. разд. 23.3.4), можно модифицировать, разделить с помощью ГЖХ и идентифицировать масс-спектрометрически. Аналогично можно обработать альтернативный набор дипептидов, получаемых после предварительной деградации по Эдману (один цикл). [c.278]

Г , 95 Раств-сть н.р. HjO р. EtOH, эф. Взаимодействует с —NHj-rp. с образованием фенилтиокарбамоиль-ных (ФТК) производных. При расщеплении по Эдману с целью определения белковой последовательности от полипептида отщепляется а-ФТЦ-произ-водное аминоконцевого аминокислотного остатка и циклизуется с образованием фенилтиогидантоина (ФТГ). [c.331]

Деградацию по Эдману можно комбинировать с дансильным методом. При этом после отщепления концевого остатка определяют N-конец оставшегося пептида и воспроизводят последовательность, основываясь на данных.N-концевого анализа. [c.283]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология