Фенилтиогидантоиновый метод

Важнейший химический метод ступенчатой деградации пептидов с N-конца — фенилтиогидантоиновый метод (деградация по Эдману) [100]. [c.369]

Дальнейшие задачи-установление последовательности расположения аминокислот в каждом из выделенных пептидов (фенилтиогидантоиновым или другими методами), сопоставление полученных данных и установление первичной структуры всей молекулы. [c.56]

Для тонкослойной хроматографии фенилтиогидантоиновых производных аминокислот в качестве сорбента использовали также силикагель, а в качестве растворителей системы ксилол — метанол (80 10) и гептан — дихлорэтан — пропионовая кислота (45 25 30) [186]. Проявление велось при помощи 1,7%-ного раствора нингидрина в смеси метанол — коллидин — уксусная кислота (15 2 5). Этим методом можно разделять фенилтиогидантоины, имеющие близкие значения Rf. [c.115]

Кобальт может быть отделен от алюминия, хрома, ванадия, урана, вольфрама, молибдена, мышьяка, титана, цинка, марганца, кальция и магния осаждением фенилтиогидантоиновой кислотой NH.J— S—N(QHj)—СН. СООН в слабоаммиачном растворе . Недостатками этого метода являются частичное осаждение железа и никеля и очень неприятный запах применяемого реактива.j [c.430]

Большое распространение при исследовании пептидов получил фенилтиогидантоиновый метод, который позволяет устанавливать последовательность расположения нескольких аминокислот, примыкающих к аминному концу пептида. Пептид обрабатывают фенилизотиоцианатом в слабощелочной среде, превращая его в Ы-фенилтиокарбаминовое производное [c.812]

Аминокислотная последовательность небольших индивидуальных пептидов может быть определена с помощью метода гидролиза ферментами, отщепляющими ЫНг и СООН-концевые остатки, в. сочетании со ступенчатым фенилтиогидантоиновым методом. Для более крупных пептидов может оказаться необходимым дополнительный гидролиз другим протеолитическим ферментом. Так, пептид, полученный при расщеплении трипсином и имеющий структуру A-B- -Tyr-E-F-G-H-Lys (где А, В, С, Е, F, G и Н —алифатические остатки типа глицина, аланина, серина и т. д.), может быть гидролизован химотрипсином по остатку тирозина с образованием пептидов А-В-С-Туг и E-F-G-H-Lys. Поскольку положение этих, двух пептидов относительно друг друга уже установлено (пептид, содержащий остаток тирозина,— NH2-кoнцeвoй, а пептид, содержащий остаток лизина, — СООН-концевой), дальнейшая работа по-установлению последовательности сравнительно проста. [c.182]

К числу таких веществ относятся нуклеиновые основания, нуклеотиды и олигонуклеотиды, а также фенилтиогидантоиновые производные аминокислот (ФТГ-АК). Удобно наблюдать не само поглощение, а ослабление флюоресценции добавленного в сорбент флюорогена в местах расположения пятен вещества, пр исходящее в результате поглощения ими коротковолнового УФ-света, которым освещают пластинку. При визуальном наблюдении или на фотографии в лучах видимого света вещества обнаруживаются в виде темных пятен на светлом флюоресцирующем фоне. Метод позволяет обнаруживать до 0,5 мкг олигонуклеотидов в пятне и широко исполь- [c.480]

Другая группа методов отделения основана на применении органических осадителей. Образующиеся соединения в большинстве случаев хорошо растворимы в неводных растворителях, что позволяет применить экстракцию. Описаны методы отделения кобальта с использованием купферона, 8-оксихинолина, диэтилдириокарба.мината натрня, этилксантогената, нитрозонафтолов, этилендиамина и триэтаноламина коричной кислоты, фенилтиогидантоиновой кислоты. [c.61]

Из перечисленных органических осадителей хорошие результаты дает фенилтиогидантоиновая кислота, которая позволяет отделять кобальт от мышьяка, урана, ванадия, титана, воль-ф)рама, молибдена, цинка, марганца, алюминия, магния, кальция. Из экстракционных методов разделения хорошо зареко.мен-довал себя дитизоновый. метод, особенно для. малых количеств кобальта. Экстракция дитизоном в кислом растворе позволяет отделить медь от кобальта наоборот, в слабощелочных цитратных растворах экстрагируется дитизонат кобальта, а железо, титан, хром, ванадий и другие металлы, не образующие дитизонатов, остаются в водном растворе. Экстракцию двойных и тройных роданидных ко.мплексов кобальта. можно также с успехом использовать для отделения кобальта от большинства других элементов, в том числе от никеля, железа и меди, если последние два элемента за.маскировать. [c.61]

Ряд методов основан на осаждении ионов кобальта щавелевой, оксинафтойной, антраниловой, бромантраниловой, амино-нафтионовой, фенилтиогидантоиновой кислотами, диэтилдитиокарбаминатом натрия, 8-оксихинолином, бензохинальдиновой кислотой, бензимидазолом и другими реагентами. [c.89]

Фенилтиогидантоиновая кислота eHsNH SNH Hj OOH. Фенилтиогидантоиновая кислота осаждает количественно кобальт из аммиачного цитратного раствора в виде красновато-коричневого объемистого осадка неопределенного состава. Осадок использовали непосредственно для определения кобальта [662, 748], однако термогравиметрическое изучение осадка [659] показывает, что метод не может дать высокой точности. Фенилтиогидантоиновая кислота применяется для отделения кобальта от ряда элементов (см. стр. 70). [c.104]

Расщепление полипептидной цепи на фрагменты проводят обычно при помощи протеолитических ферментов, таких, как трипсин, химотрипсин или пепсин. Эти ферменты действуют на различные участки полипептидной цепи, так как имеют повышенное сродство к различным аминокислотным остаткам. Необходимо учитывать также соседние аминокислотные остатки, т. е. пространственное окружение атакуемой пептидной связи. Оказалось, что трипсин гидролизует только те пептидные связи, в образовании которых участвует карбоксильная группа лизина или аргинина, а химотрипсин гидролизует связи по фенилаланину, триптофану и тирозину Обычно протеолитические ферменты, гидролизующие полипептидные цепи, предварительно иммобилизуют на нерастворимых матрицах для более легкого отделения их от продуктов гидролиза. Далее определяют аминокислотные последовательности каждого полипептидного фрагмента. Для этого чаще всего используют метод Эдмана, заключающийся в анализе полипептида только с Ж-конца. Концевая аминокислота при взаимодействии с фенилизотиоцианатом в щелочной среде образует стойкое соединение, которое можно отщепить от полипептида без его деградации. Фенилтиогидантоиновое (ФТГ) производное аминокислоты идентифицируется хроматографическим методом. После идентификации концевого Ж-амино-кислотного остатка метка вводится в следующий аминокислотный остаток, [c.41]

Использование развитых теоретических представлений и методических приемов позволило разработать экспрессные ультрачувствительные варианты ва жней-ших методов аналитической химии белка — анализ аминокислот и их динитро-фенильных, фенилтиогидантоиновых и диметилсульфонафтильных производных. Разработан не требующий специального сложного оборудования метод количественного анализа по размерам пятен с точностью 4—5%. [c.341]

Изучены реакции аллилтиомочевины, фенилтиомочевины, 8-ди-о-толилтиомочевины, тйофенола и З-фенилтиогидантоиновой кислоты, тио-барбитуровой кислоты и 8-дифенилтиомочевИны с растворами платииовых металлов в разбйвленной соляной кислоте и предложены методы определения платины с тиофенолом и родия с тиобарбитуровой кислотой. [c.423]

ФТГ-аминокислоты детектируют на тонкослойных хроматограммах с помощью хлор-толидиновой реакции. Чувствительность этой реакции 0,5. WK2 ФТГ-аминокислоты. Для обнаружения ФТГ-аминокислот рекомендуется также [8] йодазидная реакция. ФТГ-аминокислоты можно детектировать по гашению флюоресценции люминофоров, свечение которых возбуждается ртутной линией X 254 ммк, поскольку фенилтиогидантоиновая группировка имеет интенсивную полосу поглощения при X 270 ммк. Чувствительность указанного метода составляет 0,1—0,2 мкг ФТГ-аминокислоты. Из отечественных люминофоров для указанных целей подходят Л-27, Л-29, К-36 и Л-34, которые добавляют в количестве 5—10% к сорбционной массе перед нанесением на пластинку. [c.315]

Ванг и сотр. [715] количественно анализировали ДНФ-ами-яокислоты после элюции их 1 %-ным раствором бикарбоната натрия с полиамидного слоя. Определение концентрации производили снектрофотометрически при 360 нм. Патаки и Ванг [586] предложили определять количество аминокислот в виде их дансил-, ДНФ- или фенилтиогидантоиновых производных путем измерения флуоресценции пятна на хроматогралше. При этом чувствительность метода значительно выше в случае применения полиамидных слоев по сравнению с силикагелем. [c.127]

Свободные аминогруппы, которые содержатся только на М-кон-цах белковых цепей и в остатках лизина (е-аминогруппа), обнаруживают, добавляя к белку фенилизотиоцианат (ФТЦ-метод) или динитрофторбензол (ДНФБ-метод.) При добавлении к белку фенил-изотиоцианата образуются фенилтиогидантоиновое производное концевой аминокислоты и укороченный пептид с новой концевой аминогруппой. С помощью хроматографии на бумаге идентифицируют фенилтиогидантоиновое производное, а оставшийся пептид снова обрабатывают фенилизотиоцианатом. Таким образом можно определить последовательность до десяти аминокислот дальнейшее определение аминокислот затрудняется увеличением количества побочных продуктов. [c.289]

Вышеописанный метод анализа свободных аминокислот экономит время и труд исследователя и является более строгим, чем методы, основанные на получении производных аминокислот или на их экстракции, однако чувствительность его явно недостаточна для обнаружения небольших количеств аминокислот в биологических препаратах. Именно поэтому аминокислоты чаще всего определяют в виде их метилтиогидантоиновых [81], фенилтиогидантоиновых (ФТГ) [82], диметиламинонафталин-сульфонильных (дансильных, или ДНС) [83], 2,4-динитрофе-нильных (ДНФ) [84], 2,4,6-тринитробензолсульфонильных [c.51]

Однако уже сообщалось [22, 23], что обнаружить иодированные аминокислоты в N-концевом положении тиреоглобулина свиньи, очищенного на ДЭАЭ-целлюлозе, как без метки, так и меченного in vivo с помощью 1 , не удалось. С помощью количественного метода Эдмана [36, 37] из незащищенных N-концевых аминокислот в тиреоглобулине удалось обнаружить только глицин, аспарагиновую кислоту и аспарагин. Эти остатки содержатся в примерном соотношении 2 моля аспарагиновой кислоты (плюс аспарагин) и 1 моль глицина на моль тиреоглобулина [23] ). В ходе этой работы было найдено, что обессоливание белка необходимо проводить с помощью кратковременного диализа или фильтрацией через сефадекс Г-25 при длительном обессоливании в исследуемых экстрактах образуется фенилтиогидантоиновое производное аланина или других аминокислот в количествах, достигающих молярного эквивалента, а в некоторых случаях значительно превышающих его. По-видимому, это объясняется действием следовых примесей протеиназы, активной при нейтральном значении pH. Результаты опытов, которые подтверждают эту точку зрения, представлены в табл. 2. [c.221]

В общих чертах стратегия Сенгера сохранила свое значение и до наших дней, однако за истекшие десятилетия были разработаны два новых подхода, которые произвели революцию в определении первичной структуры полипептидов (белков). Первый подход основан на разработанной Эдманом в 1967 г. автоматической процедуре последовательного отщепления и идентификации N-кoнцeвыx аминокислотных остатков в виде их фенилтиогидантоиновых производных. Второй подход связан с методом, разработанным Сенгером и, независимо, Максамом и Гилбертом, позволяющим проводить быстрое и однозначное секвенирование гена, кодирующего рассматриваемый белок. Оптимальная стратегия состоит в одновременном использовании обоих подходов. Автоматическая деградация по Эдману, намного более быстрая по сравнению с первоначальным ручным методом Сенгера, тем не менее сильно уступает по скорости методам секвенирования ДНК и сопряжена с рядом трудностей. С другой стороны, секвенирование ДНК не всегда дает однозначную первичную структуру исследуемого белка. Главным [c.38]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология