Додецилсульфат натрия комплексы с белками

Рис. 4-49. ДСН-электрофорез в полиакриламидном геле. Индивидуальные белки образуют комплекс с молекулами додецилсульфата натрия, несущими отрицательный заряд, и мигрируют через пористый гель полиакриламида в виде отрицательно заряженного комплекса ДСН-белок. Поскольку скорость передвижения в этих условиях тем выще. чем меньще размеры полипептида, этот метод может быть использован для определения приблизительной молекулярной массы полипептидной цепи, а также для изучения субъединичного

Неводные растворители, по всей вероятности, также способны денатурировать белки, вызывая нарушения гидрофобных взаимодействий это имеет место, например, в водно-спиртовых растворах. В некоторых неводных растворителях белки часто приобретают конформацию с большим содержанием спиралей. Детергенты образуют с полипептидами прочные комплексы, вызывая глубокие структурные перестройки, как это было уже показано на примере додецилсульфата натрия (разд. 5.1.7). [c.204]

Электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС-N3). В этой системе суммарный заряд белка маскируется добавлением ДДС-Ыа, который окутывает белки облаком отрицательных зарядов. Предполагается, что все комплексы ДДС-белков имеют заряды одинаковой плотности, процесс разделения происходит только по одному параметру — размеру молекулы. Эта система позволяет в то же время определять молекулярную массу изучаемых белков с помощью маркеров — набора белков с заранее известными значениями молекулярной массы. [c.40]

Для получения из биологического материала белков в чистом, гомогенном, состоянии применяют различные детергенты, способствующие расщеплению белок-липидных комплексов и разрыву белок-белковых связей . В частности, для освобождения белков (ферментов), прочно связанных с биомембранами митохондрий или других субклеточных структур, применяют тритон Х-100, додецилсульфат натрия и дезоксихолат натрия. [c.24]

В присутствии додецилсульфата натрия (505) белки образуют комплексы анионного характера. Если концентрация 505 выше 8-10 М, то количество 505, связанного с единицей массы белков, постоянно и составляет 1,4 г 505 на 1 г белка. Это [c.344]

При электрофорезе в полиакриламидном геле заряд белков не играет решающей роли в определении подвижности данной макромолекулы — особенно при электрофоретическом разделении кислых белков, обычно диспергированных в 0,1%-ном растворе додецилсульфата натрия. В этих условиях основные группы белка образуют комплексы с додецилсульфатом натрия и благодаря этому белки, подобно нуклеиновым кислотам, ведут себя главным образом как полианионы. Разделение в этом случае происходит в основном за счет различий в молекулярных весах, причем более мелкие компоненты движутся впереди более крупных. Путем стандартизации таких гелей с помощью белков или нуклеиновых кислот известного молекулярного веса можно с достаточной точностью определить молекулярный вес неизвестных компонентов [435]. Следует особо отметить, что если исследуемый белок состоит из двух или большего числа цепей, связанных друг с другом дисульфидными связями, и если разделение при этом проводят, как обычно, в присутствии сильных денатурирующих и восстанавливающих агентов, то полученные данные относятся к молекулярным весам структурных субъединиц или даже пептидных цепей. [c.62]

Электрофорез проводят в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН). Таким путем можно определить молекулярные массы субъединиц олигомерных белков [74 — 76]. Молекулы ДСН образуют за счет гидрофобного взаимодействия комплексы с полипептндными цепями, характеризующиеся постоянным отношением ДСН белок. Тогда электрофоретическую поднижность можно выразить как функцию молекулярной массы и сравнить с подвижностью стандартного белка. Метод отличается высоко скоростью (2 — 4 ч) и требует для одного определения, как правило, лишь 10 — 50 мкг белка. В последнее время ДСН-электрофорез проводят также на стеклянных шариках с контролируемым размером пор (120 — 200 нм). Комплекс ДСН — белок не адсорбируется на носителе, интервал определяемых молекулярных масс 3 500 — 12 ООО [77]. [c.362]

Эти белки характеризуют обычно посредством электрофореза в полиакриламидном геле, проводимого после диссоциации компонентов мембран с помощью додецилсульфата натрия (ДДС-N3). Когда в подходящих условиях происходит диссоциация, на электрофореграммах наблюдается несколько зеленых полос, соответствующих белково-хлорофилловым комплексам (рис. 6.8). Вполне вероятно, что в тилакоидах все хлорофиллы находятся в форме таких комплексов [73]. Некоторые комплексы включают хлорофилл а и хлорофилл б это собирательные антенны для фотонов или ССХБ (светособирающий хлорофилл — белок) [107]. На эти комплексы приходится до 50 % белков и хлорофиллов ла- [c.240]

Вполне установлена ценность моющих веществ и их комплексов с другими соединениями, в частности лаурилсульфата натрия и его комплекса с белками, для лечения пептических язв и язвенных колитов. Положительное лечебное действие моющих веществ может быть обусловлено ингибированием действия ферментов или другими биохимическими проявлениями, связанными с поверхностной активностью [53]. Так, было сделано наблюдение, что додецилсульфат натрия замедляет действие in vitro амилазы, липазы и трипсина сока поджелудочной железы, но не замедляет всасывание пищи в кишечнике при введении его в двенадцатиперстную кишку [54]. [c.430]

Чтобы определить, за счет чего возникают эти дополнительные полосы, был разработан вариант двумерного электрофореза. В первом направлении разделение велось, как описано выше, а затем гель обрабатывали детергентом, додецилсульфатом натрия (ДСН), разрушающим нуклео-протеидные комплексы во втором направлении разгонка велась в присутствии ДСН. После окончания электрофореза определялось положение ДНК и белка. Оказалось, что наиболее быстро бегущая полоса мононуклеосом, названная МН-1 (мононуклеосома 1), содержит ДНК длиной 145 п. н. и по две молекулы гистонов Н2а, Н2Ь, НЗ и Н4, т. е. гистоновый октамер. Следующие компоненты — МН-2 и МН-3 — содержат ДНК длиной 165 и 195 п. н. и все [c.88]

Для мембранных белков хорошие результаты определения молекулярной массы получены с использованием 505 — ПААГ-электрофореза. Додецилсульфат натрия 505 (ДСН) связывается белками, что является причиной их диссоциации. Если же 505 действует на белки в среде, где присутствует реагент, разрывающий дисульфидные связи (меркаптоэтанол, п-этилмалеимид, п-хлормеркурибен-зоат и др.), то образуются однотипные беспорядочные структуры комплексов 508 — белок. В таких комплексах заряд определяется в основном додецилсульфатом. (Это так потому, что количество связываемого белком 808 почти не зависит от типа белка и является величиной постоянной 1,4—1,5 г 808 на 1 г белка.) Таким образом, подвижность белков в комплексе с 808 будет определяться только молекулярной массой. [c.113]

Белки под действием детергента додецилсульфата натрия (ДСН) денатурируют и диссоциируют на субъединицы. Инкубация белка в растворе ДСН при 100°С в течение нескольких минут приводит к разворачиванию белковых молекул и связыванию с ними молекул ДСН (примерно одна молекула ДСН на каждые два аминокислотных остатка). Образовавшиеся комплексы содержат 1,4 г ДСН на 1 г белка. Алифатические додецильные группы [c.133]

Нуклеиновые кислоты, присутствующие в тканях в качестве нуклеопротеи-новых комплексов с основными белками, могут быть выделены либо прямо1"1 экстракцией, либо путем экстракции соответствующих нуклеопротеинов, обычно 1 М растворами солей. Растворимые нуклеопротеины диссоциируют пря насыщении раствора хлоридом натрия, который при этом осаждает белки, а в случае ДНК—изопикническим центрифугированием нуклеопротеина (разд. 7.2.7). Белки могут быть также отделены от нуклеиновых кислот экстракцией фенолом или обработкой детергентами, такими, как додецилсульфат натрия. После отделения белка нуклеиновую кислоту можно осадить, медленно добавляя спирт. [c.213]

ДСН-гель-электрофорез. Клаус Вебер и Мери Осборн показали, что молекулярную массу многих белков можно определить с помощью измерения их подвижности в полиакриламидном геле, содержащем детергент — додецилсульфат натрия (ДСН). При нейтральном pH в И/о-ном ДСН и 0,1 М меркаптоэтаноле большинство многоцепочечных белков связывает ДСП и диссоциирует, дисульфидные связи разрываются меркаптоэтаполом, вторичная структура исчезает, в результате чего комплексы, состоящие из субъединиц белка п ДСН, приобретают беспорядочную конфигурацию. Обработанные таким образом белки имеют одну и ту же форму и одинаковое отношение заряд/масса. Это объясняется тем, что количество ДСН, связываемое на единицу массы белка, всегда постоянно и равно 1,4 г ДСН на 1 г белка таким образом, заряд в большей степени определяется ДСН, чем различными зарядами, присущими аминокислотам. Таким образом достига- [c.231]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология