Коэффициент растворителей при сухом методе

Этот способ стал использоваться для определения количества белка с тех пор, как Варбург и Христиан 174] сообщили о методе, основанном на измерении оптической плотности при 260 и 280 нм, что позволяет ввести поправку на содержание в препаратах нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Такая поправка очень важна, когда работают с сырыми экстрактами, но становится менее существенной по мере очистки белков и удаления мешающих веществ. В этом случае достаточно просто определить оптическую плотность при 280 нм. Белки поглощают при 280 нм единственно из-за присутствия в их молекулах остатков тирозина и триптофана (если только они не содержат поглощающих в УФ-свете простетических групп). Так как содержание этих двух аминокислот в белках очень сильно варьирует, коэффициент поглощения, выражаемый обычно как 280 или 280 также варьирует в значительной степени. У большинства белков величина 280 лежит в интервале 0,4—1,5, но имеются белки, занимающие по этому показателю крайние положения в ряду всех известных белков — это некоторые пар-вальбумины и сходные с ними Са +-связывающие белки (0,0), с одной стороны, и лизоцим (2,65) — с другой. Поглощение при 280 нм дает лишь приблизительное представление об истинном содержании белка исключение составляют чистые белки. Если точно известен коэффициент экстинкции чистого белка (он должен быть стандартизирован относительно сухого веса или по крайней мере относительно поглощения при 205 нм — см. ниже), то величина поглощения при 280 нм позволяет точно определить его содержание. По существу, это самый точный метод для определения чистых белков, поскольку в этом случае не требуется производить с ним никаких манипуляций, за исключением соответствующего разбавления. Разумеется, растворитель не должен поглощать при 280 нм, а если он поглощает — необходим точный контрольный опыт. Во время измерений белки не подвергаются никаким вредным воздействиям и не ра зрушаются, поэтому, хотя для точного определения нужно около 1 мг бел- [c.312]

Таблица 7.3. Коэффициент диффузии растворителей при сухом методе формования волокон

В разд. 3 гл. IX зависимость коэффициента трения от гидратации и отношения осей эллипсоида вращения рассматривалась в предположении, что объем раствора можно считать функцией объемов сухого вещества (подвергающегося растворению), связанного растворителя и свободного растворителя. Такой подход во многих отношениях неудовлетворителен. Эллипсоид вращения считается при этом жестким и непроницаемым для молекул воды, размеры которых намного меньше размеров эллипсоида, причем предполагается, что скольжения растворителя по поверхности эллипсоида не происходит. Далее, нужно учитывать, что плотность воды, связанной с макромолекулами, может отличаться от плотности несвязанной воды, так как известно, что при связывании воды электролитами наблюдается электрострикция. В многокомпонентной системе, где возможна избирательная адсорбция некоторых компонент раствора, определение плотности связанного растворителя также может быть затруднено. В силу всего этого желательно найти другой подход, при котором такого рода возражения были бы несущественны. В дальнейшем мы будем все же пользоваться некоторыми из этих допущений, но будем стараться сочетать результаты, полученные двумя различными экспериментальными методами, таким образом, чтобы неточности, обусловленные этими предположениями, взаимно компенсировались. [c.203]

Распределительная хроматография. Принцип распределительной хроматографии впервые описан Мартином и Синджем в их работе по аминокислотам. В этом случае, вместо равновесия между твердой и жидкой фазами, устанавливающегося при работе по методу Цветта, равновесие устанавливается между двумя жидкими фазами, причем одна из жидкостей поддерживается в состоянии геля или находится на подходящем субстрате. Сначала был применен силикагель, способный адсорбировать до 70% воды и сохраняющий при этом вид сухого порошка. При пропускании раствора исследуемой смеси в несмешивающемся с водой растворителе (например, в хлороформе) через колонку из силикагеля происходит разделение компонент смеси, обусловленное различиями их коэффициентов распределения. Впоследствии в качестве стационарной фазы стали применять листы фильтровальной бумаги, насыщенной водой. Наиболее подходящими органическими растворителями оказались фенол, н-бутиловый спирт, коллидин и некоторые другие растворители, частично смешивающиеся с водой. Индивидуальные аминокислоты были идентифицированы по цветным реакциям и охарактеризованы величинами Rf, представляющими собой отношения скорости движения зоны адсорбции к скорости движения фронта растворителя. Можно также измерять и использовать для идентификации отношение расстояния, на которое переместилось данное вещество, к расстоянию, на которое перемещается эталонное вещество (например [c.1512]

Процесс хроматографии на бумаге сводится к следующему. Из фильтровальной бумаги вырезается узкая длинная полоска, один конец которой сужен в виде языка. На некотором расстоянии от этого конца полоски наносится маленькая капля раствора, содержащего вещество для хроматографии. Бумажная полоска подвешивается в закрытом сосуде, насыщенном парами подвижного растворителя, и опускается суженным концом в чашечку с растворителем. Воздушно-сухая бумага содержит около 25% воды, которая служит неподвижной фазой. Растворитель поднимается по бумажной полоске в силу капиллярности, вместе с ним перемещаются вещества, нанесенные на бумагу, в соответствии со своим коэффициентом распределения между подвижным растворителем и водой. Когда растворитель пройдет определенное расстояние по полоске, бумагу высушивают и тем или иным методом определяют положение пятен компонентов. При хроматографии на бумаге главной характеристикой для установления вещества пятен является величина — коэффициент распределения, т. е. отношение скорости движения данного вешества к скорости движения растворителя. [c.240]

В настоящей главе рассмотрены методы концентрирования, в которых используются процессы разделения (см. табл. 30 группу 2), основанные на распределении примесей между твердым веществом и его расплавом. Сюда же следует отнести также избирательную экстракцию примесей соответствующими растворителями из диспергированных твердых веществ, которую широко применяют в препаративной органической химии. Иногда коэффициент диффузии примеси в твердой основе аномально велик и тогда для дополнительной очистки материала используют экстракцию примеси расплавом подходящего состава, например, при очистке тонких слоев германия от следов меди (метод гетерирования) [671]. Но в аналитической химии экстракцию примесей растворителями (избирательное растворение) или расплавами из твердой пробы при малом содержании примесных элементов почти не применяют из-за невозможности добиться полного и воспроизводимого извлечения примесей в жидкую фазу и из-за малой степени разделения веществ. Экстрагирование Н3ВО3 водой из сухого остатка ЗЮг при анализе кремния полупроводниковой чистоты [1286] с последующим эмиссионно-спектральным определением бора в растворе — один из примеров удачного использования метода избирательного растворения в пределах 10"" —10 % В. [c.257]

Данный метод позволяег значительно повысить чувствительность Приборов. Однако надо иметь в виду, что при длительном пропускании газовой смеси через раствор концентрация исследуемого компонента в газовой фазе за время т может измениться. Кроме того, увеличивается погрешность измерений из-за уноса и испарения растворителя, особенно при прохождении через него сухой газовой смеси, а также уменьшения коэффициента к вследствие снижения степени абсорбции при насыщении раствора определяемым компонентом. [c.120]