Мутант промотор

К сожалению, трансформированные Т-ДНК клетки не способны давать растения. Однако были получены мутанты Т-ДНК, трансформирующие растительные клетки и не подавляющие их способности превращаться в растение. Внедрение чужеродных генов в Т-ДНК, под контроль промоторов, способных функционировать в растении, которое может быть осуществлено с помощью специально сконструированных векторов, дает возможность включать их в геном растительных клеток и получать растения, содержащие новую генетическую информацию. [c.442]

Мутации в промоторах, влияя на уровень экспрессии контролируемого гена (генов), который находится под их контролем, не изменяют кодируемых генами продуктов. Большинство таких мутаций было обнаружено в результате выделения бактериальных мутантов, у которых способность к транскрипции смежных с промотором генов была либо совсем утрачена, либо находилась на очень низком уровне. Такие мутации называют ослабляющими. Реже обнаруживаются мутации, способствующие транскрипции, инициируемой с промотора. Это так называемые усиливающие мутации. [c.144]

Следует отметить, что, поскольку именно оператор Ок 2 должен быть занят репрессором-димером, чтобы способствовать связыванию РНК-полимеразы с промотором Рм, может оказаться, что кооперативная зависимость от димера, первоначально связывающегося с Ок 1, играет важную роль в поддержании аутогенного цикла. У мутантов, утративших активность Ок 1, один димер репрессора, связанный оператором с Ок 2, может подавить инициирование транскрипции в промоторе Рк, но стимулировать ее в промоторе Рм- Сайт Ок2 только на одну пару оснований расположен ближе к стартовой точке [c.216]

Рассмотренные эксперименты убедительно свидетельствуют о том, что район, содержащий ТАТА-последовательность, образует функционально важные контакты с РНК-полимеразой II, необходимые для ориентации фермента в положении, позволяющем ему начать транскрипцию с правильной точки. Точное функциональное значение более отдаленных участков, отмеченных на рис. 16.4, представляется не столь очевидным. Соблюдение фиксированного расстояния между дистальными участками и ТАТА-последовательностью не является необходимым условием эффективной транскрипции (вспомним, что расстояние между участками — 10 и - 35 в прокариотических промоторах, напротив, является критическим). Об этом свидетельствуют результаты экспериментов, отраженные на рис. 16.5. Транскрипционная активность некоторых мутантов указывает на то, что РНК-полимераза II не образует контактов с дистальными последовательностями и ТАТА-последовательностью одновременно и что другие компоненты, влияющие на транскрипцию, не имеют специфического сродства к дистальным участкам, а вступают во взаимодействие с РНК-полимеразой, зафиксированной в области ТАТА-последовательности. Если бы такие контакты были необходимы, то изменение расстояния между соответствующими участками (см. рис. 16.5) оказывало бы существенное влияние на эффективность транскрипции. Возможное функциональное значение дистальных последовательностей будет обсуждаться в дальнейшем. [c.213]

Истинный энзимолог редко интересуется проблемой сырья единственное, что ему нужно, — это выделить как можно больше фермента из наиболее удобного источника. В этом случае необходимо изучить литературу и выбрать лучший объект, с которым можно работать. При сравнении результатов, полученных в разных лабораториях, порой стоит самому провести несколько экспериментальных измерений. Очень важно убедиться в том, что фермент, присутствующий в исходном материале, экстрагируется из него полностью, для того чтобы можно было достоверно определить его содержание в ткани. При неполном разрушении клеток можно недооценить данный объект как источник ферментов из-за того, что значительная часть ферментативной активности не выходит в раствор, а удаляется вместе с осадком во время получения экстракта. Если фермент выделяют из бактериального. материала, то экспериментатор должен учитывать возможность отбора штаммов с аномально высоким уровнем ферментативной активности. Это можно сделать либо путем обычного отбора мутантов, либо используя более сложную технику клонирования, посредством которой множественные копии гена фермента включаются в бактериальный геном с помощью плазмид [1]. Экспрессия гена. может быть еще более усилена за счет его слияния с сильным промотором [2]. Эта работа занимает много времени, и выполнить ее может только опытный специалист не стоит даже пытаться применять эти методы, если на выделение фермента отведено мало времени. [c.37]

Белок N служит позитивным белком-регулятором, поскольку благодаря его действию происходит активация второй стадии экспрессии фага X. В то же время принцип его действия соверщенно не похож на принцип действия рассмотренного в предыдущем разделе другого позитивного регулятора-САР-белка. Белок N, по сути дела, не активирует транскрипцию, а способствует ее продолжению, подавляя влияние терминирующих последовательностей. При этом белок N специфически узнает не промотор и не сам терминатор, а определенный участок последовательности, расположенный между этими регуляторными элементами. При изучении мутантов, неспособных к экспрессии генов левого оперона, расположенных за терминаторным участком tu, и в то же время способных нормально расти и образовывать блящки на чувствительном бактериальном газоне, был обнаружен сайт, расположенный между и JV и необходимый для действия белка N. Этот участок (рис. [c.185]

Было показано, что инверсия промоторной области у Salmonella направляется системой сайт-специфической рекомбинации. По обе стороны от инвертируемого участка находятся идентичные противоположно ориентированные сегменты последовательности ДНК по 14 п.н. Наряду с промотором генов Н2 ш гН1 этот участок содержит также ген hin), продукт которого направляет сайт-специфическую рекомбинацию между 14-членными повторами. В результате рекомбинации происходит инверсия всего этого участка ДНК. Фаги Р1 и Ми также кодируют белки сайт-специфической рекомбинации, которые могут направлять инверсию сегментов ДНК в их собственных геномах. Оказалось, что эти белки могут заменить дефектный белок Hin в мутантах Salmonella hin . [c.201]

Мутации могут изменять свойство промоторов, и в результате выражение соответствующих оперонов может повышаться или понижаться. Так, для выделения репрессора лактозного оперона использован мутант Е. oli с измененным промотором гена-регулятора, который интенсивно синтезировал этот белок. [c.20]

Этот подход избавляет нас от необходимости выделять специфический мутант, поскольку он подразумевает использование бактериальных генов, которые дают селективные преимущества при их экспрессии в клетках млекопитающих [28]. Для этого конструируют плазмидные и ретровирусные векторы, в которых бактериальные гены сочетаются с промоторами, местами сплайсинга и сигналами полиаденилирования млекопитающих. Введение бактериальных генов в клетки млекопитающих с по--мощью трансфекции или инфекции приводит к их случайному распределению в геноме реципиента. В качестве примера бактериальных генов, способных обеспечивать селективные преимущества клеток млекопитающих, можно назвать ген Е. oli gpt (он позволяет клеткам-реципиентам утилизировать ксантин в качестве предшественника для биосинтеза пуринов) и генлео (он обусловливает устойчивость клеток млекопитающих к антибиотику G418) [29]. Основной недостаток этого метода — случайное распределение сайтов интеграции однако последние исследования позволяют надеяться, что с помощью гомологичной рекомбинации удастся осуществлять направленную интеграцию. [c.12]

Еще сильнее проявляется кооперативный эффект в том jiy4ae, когда эксперимент, проиллюстрированный на рис 4 20, проводят с оператором, у которого участок 0 1 несет мутацию, а 0 2 и Or3 являются участками дикого типа В этом эксперименте используют мутантный промотор, присоединенный к гену la Z, его обозначают P y Up — 1 Он эффективно работает в отсутствие репрессора С помощью этого мутанта легко оценить негативное и позитивное действие репрессора на активность Рис 4 22 иллюстрирует удивительный результат такого эксперимента при концентрации репрессора, лишь слегка превышающий ту, что приводит к активации Р в случае оператора дикого типа, происходит репрессия промотора в случае Or 1 [c.111]

Во всех проведенных к настоящему времени опытах промотор ТК исследовали в отсутствие 1ЕРЗ. Участвуют ли какие-то другие элементы в активации транскрипции под действием этого белка По-видимому, на этот вопрос следует ответить отрицательно, поскольку опыты по трансфекции с использованием таких же мутантов, как и при идентификации элементов промотора, показывают, что для активации транскрипции с участием IEP3 in vivo нужна только область между парой оснований [c.60]

Как мы уже упоминали, индуцированные в зиготе транскрипты гена hb концентрируются на самом краю передней части яйца-в области с наиболее высоким содержанием белка гена bed. Поскольку у больщинства мутантов по гену bed ген hb не экспрессируется, предполагалось, что продукт bed нужен для активации транскрипции hh. Возможность проверить эту гипотезу появилась после того, как был клонирован ген bed и получен его белковый продукт, а также клонирован ген hb и идентифицирована область регуляции его транскрипции. Оказалось, что белок bed связывается с разным сродством со многими элементами промотора гена hb вблизи точки начала его транскрипции (рис. 8.58). Каноническая последовательность трех сайтов сильного [c.87]

Встраивание Ту-элемента в промотор гена W/S4 приводит к появлению мутанта / /s4 . В результате вырезания Ту-элемента с сохранением части одного из 5-сегментов происходит частичная инверсия к HIS . [P.J. Farabough, G. R. Fink, Nature 286 (1980), p. 352.] [c.251]

Технология рекомбинантных ДНК открывает новые замечательные возможности для дальнейшего изучения экспрессии генов и функционирования их белковых продуктов у самых разных организмов. Что касается вируса гриппа, то молекулярное клонирование позволило не только быстро накопить обширную информацию о первичной структуре всех вирусных генов (хотя, например, для НА-гена этот подход оказался наиболее продуктивным), но и конструировать in vitro определенные мутанты. В настоящее время гены, кодирующие белки НА, NA, М и NS, уже вводятся в составе бактериальных плазмидных векторов в эукариотические клетки, где и экспрессируют соответствующие полипептиды [20]. В этих опытах обычно используют плазмидные конструкции, несущие промоторы SV40, поэтому клеточные РНК-полимеразы II могут эффективно инициировать синтез РНК, содержащих генетическую информацию вируса гриппа. Правда, экспрессия носит обычно временный характер и ограничена цитопатическим эффектом. С другой стороны, интеграция НА-гена вместе с селективным маркером (таким, как клеточный ген тимидинкиназы) приводит к стабильной экспрессии [20]. [c.469]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология