Мутант точковые

Можно ли считать, что больпшнство мутантов гП несет точковые мутации Если это так, то должны соблюдаться следуюш,ие два условия 1) скрещивание любого мутанта гП по крайней мере с одним из двух других неаллельных мутантов гП, дающих при скрещивании друг с другом рекомбинанты дикого типа (г" ), должно также приводить к образованию рекомбинантов дикого типа (г" ) 2) мутанты гП должны с измеримой частотой возвращаться (ревертировать) к дикому типу, особенно если частоту мутирования (в данном случае речь, естественно, идет о превращении гП г+) повышают с помощью специальных воздействий. Оказалось, что большинство исследованных мутантов гП ведет себя именно таким образом ири этом частота обратных мутаций различна для разных мутантов гП. Большинство индуцированных мутаций можно разбить на два класса (табл. 53) 1) мутации. [c.492]

Однако наличие транслокаций у всех этих мутантов не исключает возникновения и точковых мутаций, оказывающих фенотипический эффек [c.246]

Точковые мутации труднее локализовать на рестрикционной карте. Иногда они могут изменить сайты-мишени для рестриктирующего фермента. В противном же случае их не удастся определить, так как размеры рестрикционных фрагментов ДНК дикого типа и мутантов оказываются одинаковыми. Поэтому для локализации таких замен оснований часто необходимо определить последовательность оснований в ДНК. [c.46]

Важной характеристикой мутантов является их способность к реверсии, т. е. обратному мутированию к исходному фенотипу. Мутанты, которые появляются в результате реверсии, называются ревертантами. При истинных обратных мутациях в ДНК восстанавливается исходная последовательность оснований. Так ревертируют точковые мутации — замены оснований, вставки или выпадения одного или нескольких нуклеотидов. [c.71]

Трансдукционные скрещивания с донорным фагом, выращенным на ряде точковых мутантов, позволяют выявить, действительно ли произошла делеция, и определить размер удаленного при этом участка гена ЫзО. [c.29]

Разотрите по 0,1 мл культур мутантов на чашках Е +низкая концентрация гистидина. После того как жидкость впитается, нанесите капли лизатов картирующих фагов, выращенных на серии точковых /1г5-мутантов (см. эксперимент 7). Чашки не переворачивайте. Инкубируйте при 37°С. [c.30]

Выделение и характеристика точковых мутантов фага Я, полученных с помощью гидроксиламина [c.36]

Выделение и характеристика точковых мутантов фага X 37 [c.37]

Использование делеций при картировании позволяет заменить количественный учет частоты рекомбинации качественным тестом. При скрещивании точкового и делеционного мутантов рекомбинанты могут появиться, только если делеция не перекрывает участок, в котором локализована точковая мутация. [c.376]

Встраивание Ds- и /4с-элементов сопровождается дупликацией сайта-мишени размером 8 п.н. При утрате элемента или реверсии дуплицированный участок обычно сохраняется. Например, у описанного ранее ревертанта мутанта А 1И1 дополнительная копия дуплицированного участка размером 8 п. н. остается как след предьщущей вставки (рис. 10.24). Нередко одна или обе оставшиеся копии оказываются слегка модифицированными в результате точковых мутаций или делеций пар оснований. Таким образом, вырезание происходит не совсем точно и не всегда приводит к реверсии на уровне фенотипа. [c.248]

Подвергнув популяцию бактерий действию антибиотиков, можно отобрать мутанты, способные расти в присутствии соответствующего антибиотика. Этим путем были получены, в частности, мутанты Е. соИ, устойчивые к стрептомицину (однако следует сказать, что частота их появления была очень низкой примерно 10 ). Было установлено, что измененный ген (rpsL или sir А) расположен на генетической карте в области, соответствующей 72 мин >. В дальнейшем было показано, что стрептомицин связывается с рибосомным белком S12, а rpsL — ген этого белка. Среди устойчивых к стрептомицину бактерий можно отобрать мутанты, ставшие зависимыми от этого антибиотика и не способные расти в его отсутствие. Было показано, что такая зависимость от Стрептомицина возникает в результате изменений рнбосомного белка S4. Из этих экспериментов отчетливо видно, что для существенного изменения чувствительности живого организма к определенному токсину или даже для того, чтобы организм сделался зависящим от этого токсина, оказывается достаточно единичной точковой мутации, изменяющей всего лишь одну аминокислоту. [c.240]

Изменения в структуре ДНК встречаются очень редко. Так, например, в среднем ген может удвоиться 10 раз, прежде чем произойдет заметная мутация [128а]. Тем не менее, работая с бактериями нли бактериофагами, мы можем обследовать чрезвычайно большое число особей в поисках мутаций. Если, например, посеять один миллион вирусных частиц на чашку с агаром в условиях, позволяющих распознать мутацию определенного гена, то в среднем мы можем надеяться обнаружить один мутант. Наиболее часто встречаются мутации, обусловленные заменами пар оснований (точковые мутации). Оии происходят в результате включения неправильного основания при репликации или репарации ДНК. При таких мутациях одно основание в триплете кодона замещается другим. В результате возникает другой кодон, что приводит к замене в соответствующем белке одной аминокислоты на другую . Замену одного пиримидина на другой С—)-Т или Т—)-С) или одного пурина на другой пурин иногда называют транзицией, тогда как замену пурина на пиримидин или, [c.246]

Точковые ревертанты дикого типа, т. е. ревертанты, способные синтезировать нормальный активный белок, можно разбить на две грунпы а) ревертанты, у которых в соответствующем участке полипентидной цепи вновь появилась исходная аминокислота, и б) ревертанты, у которых произошла замена не на исходную, а на какую-то другую (вернее, третью) аминокислоту, в результате чего активность белка тем не менее восстанавливается. Так, например, мутация последовательности -Гли-Фен-Гли в -Глу-Фен-Гли может быть обращена в результате мутации -Глу-Фен-Гли -> -Вал-Фен-Гли. Реверсия в случае мутанта -Вал-Фен-Вал происходит в результате мутаций к -Ала-Фен-Вал или -Вал-Фен-Ала. [c.498]

Кодовое отношение. Кодовое отношение (г) можно определить как число нуклеотидов в кодоне. Мы уже упоминали об изящных опытах Крика с акридиновыми мутантами фага Т4, в которых индуцировались три последовательные точковые мутации (делеции или вставки) в определенном гене. Из этих опытов следовало, что кодовое отношение равно или кратно трем. Наиболее просто кодовое отношение можно было бы установить, измерив длину участка ДНК, кодирующего полипептид с известным числом аминокислотных остатков. Однако определить величину г таким способом пока не удается согласно приблизительным оценкам, эта величина безусловно меньше 10 и, вероятно, меньше 5. Так, например, РНК вируса — сателлита вируса некроза табака содержит 1200 нуклеотидов, а число аминокислотных остатков в белковой субъединице его оболочки равно 400 отсюда г = 3. Аналогичные оценки величины г были сделаны для большого числа различных белков. Другие доказательства триплетности кода были получены с помощью бесклеточных систем. Было показано, что 1) тринуклеотиды эффективно связывают специфические аминоацил-s-PHK с рибосомами [c.499]

Каковы же возможные изменения генотипа, которые привели к появлению псевдоунивалентов, а также большего числа открытых и преждевременно разошедшихся бивалентов у мутантов ППГ пшеничного типа Ими, вероятно, могли быть точковые мутации, а также изменения генотипа, которые не обнаруживаются цитологически и условно относятся к микроаберрациям. Возможны следующие типы таких перестроек инверсии, делеции и вставки. Инверсии не изменяют генетического содержимого хромосом, за исключением редких случаев эффекта положения или одновременно возникших мутаций в местах разрывов. [c.244]

Андерсон и др. [1152] в опытах с четырьмя различными микробиологическими системами изучали способность более ста пестицидов вызывать точковые мутации у микроорганизмов. Применяемые тесты представляли собой видоизмененный тест Амеса с использованием мутантов бактериофага. В тестах были испытаны следующие пестициды, применяемые иногда в качестве регуляторов роста какодиловая кислота, 4-ХФУ (4-хлорфеноксиуксусная кислота), 4-ХФП (4-хлорфеноксииро-пионовая кислота), 2,4-Д, диносеб, димекват, диурон, ДНОК, эндотал, ГМК (гидразид малеиновой кислоты), монурон, паракват и 2,3,6-трихлорбензойная кислота. Ни одно из этих веществ не вызывало точковых мутаций в использовавшихся микробиологических системах. В качестве стандартов применялись такие известные мутагены, как 5-бромурацил и 2-амннопурин. Несколько обычных веществ, таких как сахароза, минеральные удобрения, аспирин и перец, вызывали мутации с такой же частотой, что и испытывавшиеся пестициды. Авторы полагают, что результаты их опытов могут служить доказательством отсутствия мутагенных свойств у этих пестицидов. Ранее Нортроп [1153] на основании тестов, проводимых с используемыми им микробиологическими системами, включил ГМК в число мутагенов, однако это заключение не было подтверждено Андерсоном и др. В системе микробиологической пробы Нортропа использовалась индукция образования вируса. [c.125]

Делеционные мутанты оказались весьма полезными Бензеру для построения детальной карты области г . При этом отпала необходимость в невероятно трудоемкой работе по скрещиванию каждого мутанта коллекции со всеми остальными мутантами (что составило бы в общей сложности не один миллион скрещиваний). Бензер разделил область гП генома фага Т4 на отдельные сегменты (как показано на фиг. 151), каждый из которых соответствовал участку на карте, затронутому одной определенной делецией. После этого очень легко было определить сегмент, в котором расположена та или иная мутация. Для этого требовалось только установить, с какими делециями данная мутация дает и с какими не дает при скрещивании рекомбинантов дикого типа. При помощи таких делеций с подходящими начальными и конечными точками Бензер приступил к распределению всех гП-мутантов по 47 сегментам области гП (фиг. 152). Для этого неизвестный гП-мутант сначала скрещивали с семью мутантами, несущими семь стандартных делеций, определяющих семь основных сегментов. После того как выяснилось, в каком из этих семи сегментов располагается мутация, мутант скрещивали со вторым набором делеций. Таким путем всего в два этапа удается локализовать любую точковую мутацию в одном из 47 сегментов карты. Необходимо подчеркнуть, что без применения этого весьма эффективного метода, позволяющего очень быстро локализовать на карте любую мутацию, наши сведения о тонкой структуре генома фага оставались бы весьма скудными. Дело в том, что по мере возрастания в арифметической прогрессии числа выявленных мутаций число скрещиваний, необходимых для их локализации, возрастает в геометрической прогрессии. [c.309]

С помощью теста на комплементарность Бензер обнаружил, что точковые мутации г подразделяются на два функциональных класса, кото -рые он обозначил через А и В. Все мутанты, относящиеся к одному клас -су, комплементарны любому представителю другого класса (т. е. могу т [c.311]

Результаты последующих опытов, проведенных в сотрудничестве с Чэймпам, вскоре заставили Бензера пересмотреть свое объяснение амбивалентности. Среди исследованных фаговых мутантов был один, у которого В результате выпадения длинного участка ДНК была удалена граница между соседними гПА- и гПВ-генами. В результате этой мутации обычно отдельные полипептидные цепи гПА и гИВ синтезировались ввидеодной сплошной цепи (фиг, 223, А). Образующаяся таким образом сросшаяся молекула не обладала функцией, обусловленной геном гИА (и поэтому фаг имел фенотип гИА-мутанта), но могла осуществлять функцию гИВ при смешанной инфекции в комплементационных тестах с обычными точковыми гПВ-мутациями (см. гл. ХП1). [c.451]

Представление о том, что некоторые мутации приводят к образованию нетранслируемого бессмысленного кодона в середине гена, позволило объяснить сущность некоторых бактериальных мутантов со странным фенотипом. Например, как указывалось в гл. VI, Яновскому удалось обнаружить неактивный А-белок триптофан-синтазы лишь у некоторых Тгр -ауксотрофов Е. соИ, содержащих точковую мутацию в гене trpA. У других ауксотрофов вообще не было выявлено никакого белка. Поскольку у мутантов последнего типа удавалось индуцировать истинные реверсии к Тгр" с помощью мутагенных аналогов оснований (т. е. в результате замены оснований), отсутствие у них белка, подобного белку А, нельзя было объяснить мутацией со сдвигом считывания (вставкой или делецией). Такие мутанты, по-видимому, содержали бессмысленные мутации, предотвращавшие синтез полипептидных цепей А-белка нормальной длины. [c.452]

Начиная поиски необходимого мутанта, прежде всего следует четко представлять, какой именно тип мутанта соответствует поставленной задаче. Например, если нужно получить мутант с устойчивым генетическим маркером, позволяющим идентифицировать мутантный щтамм на всех этапах эксперимента, следует искать щтамм с неревертирующей мутацией, захватывающей группу смежных генов, такой, как делеция. Вместе с тем, если стоит задача выявить взаимосвязь между структурой какого-то белка и его функцией, наилучщими окажутся точковые мутации с заменой оснований, позволяющие отбирать ревертанты. Мутации с заменой оснований ча- [c.9]

Тест с использованием лизогенизации обладает наибольщей чувствительностью, и его можно провести следующим образом. Приготавливается Л-чашка с газоном BNN45, и на этот газон наносятся попарно друг на друга капли делеционных и (или) точковых мутантов Amp . Чащку инкубируют в течение ночи при 34°С. Клетки из центра каждого пятна переносят с помощью зубочисток на чашку LB +ампициллин и на чашку LB (служит контролем), чтобы проверить, образуются ли вообще лизогенные бактерии, устойчивые к ампициллину (АтрГ ). Такие лизогенные бактерии будут образовываться лишь в том случае, если испытуемые фаги AmpS могут рекомбинировать между собой. [c.39]

С. Бензер сначала картировал концы делеций rll по отношению к некоторым точковым мутациям, а затем использовал набор деле-ционных мутантов для предварительной грубой локализации всех вновь получаемых мутаций гП в том или ином из 47 сегментов участка гН (рис. 15.4). [c.376]

Красная окраска одного из видов гаплоидных дрожжей связана с синтезом каротиноидпого пигмента. В серии экспериментов в результате мутагенеза получены мутанты с измененным цветом - оранжевые (0 ), розовые (Р"), белью желтые (10 и бежевые (В ). Каждый мутантный тип является результатом точковой мутации. Для того чтобы идентифицировать эти мутанты, путем скрещиваний были получены двойные мутанты со всеми возможными комбинациями мутаций. Результаты анализа фенотипов двойных мутантов представлены в табл. 36. [c.63]

Одноцепочечные мутагенизированные участки ДНК удобно получать путем гибридизации одноцепочечной и двухцепочечной ДНК одного и того же вектора, содержащего клонированный ген или его участок, который необходимо мутагенизировать. В этом случае в образующемся гибриде-гетеродуплексе, одна цепь которого принадлежит вектору без вставки, а другая - вектору со вставкой, происходит выпетливание последовательности вставки в виде одноцепочечного участка ДНК. Обсуждаемый подход к получению статистического набора точковых мутаций с использованием химических мутагенов позволяет легко создавать большое число мутантных молекул ДНК, содержащих одну или несколько мутаций в разных сочетаниях. Последующий отбор мутантов на основе новых биохимических или иных параметров мутантных белков (исчезновение, ослабление или усиление ферментативной активности, появление новой активности или новых иммунологических свойств и т.п.) дает возможность идентифицировать остатки аминокислот в исследуемых белках, отвечающие за эти изменения. [c.325]

Цитологический анализ митоза осуществляют сразу после обработки семян мутагенами. Подсчет числа хромосом облегчает выявление анеуплоидов и полиплоидов. Если необходимо отличить точковые мутации от перестроек хромосо.м, нз цитологических тестов наиболее подходит анализ пыльцы и мейоза. Отсутствие стерильной пыльцы у мутанта указывает на точковую мутацию. При изучении мейоза у такого мутанта обращают внимание на характер образования бивалентов в диакинезе и метафазе I. Так, у мягкой пшеницы 01бра зуется 21 бивалент в мейозе, и если все биваленты закрытого типа, предположение о точковой мутации верно. [c.171]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология