Детергенты додецилсульфат натрия ДСН

При использовании диск-электрофореза в полиакриламидном геле для определения молекулярной массы белков также строят график зависимости между логарифмом молекулярной массы калибровочных белков и подвижностью белковых частиц в полиакриламидном геле, а затем, определив подвижность исследуемого белка, по графику находят его массу (рис. 1.11). Электрофорез проводят в присутствии детергента додецилсульфата натрия, так как только в этом случае наблюдается прямая пропорциональная зависимость между молекулярной массой и подвижностью белков. Белки с четвертичной структурой при этих условиях распадаются на субъединицы, поэтому метод находит широкое применение для определения молекулярной массы субъединиц белка. [c.46]

Рис. 6-19. Структуры молекул двух широко распространенных детергентов додецилсульфата натрия (ДСН, анионного детергента) и тритона Х-100

Г. Препараты мембранных белков, солюбилизированных ионным детергентом додецилсульфатом натрия (ДСН), обычно не пригодны для исследования функций этих белков, поскольку они [c.51]

Чтобы оценить период полужизни этих р-галактозидаз, дрожжи выращивали на протяжении нескольких поколений в присутствии радиоактивной аминокислоты. Затем синтез белков блокировали с помощью соответствующего ингибитора. Для определения скорости деградации р-галактозидазы из культуры отбирали пробы в разные моменты времени, проводили очистку р-галактозидазы с помощью специфических антител и измеряли количество радиоактивной р-галактозидазы после гель-электрофореза с детергентом-додецилсульфатом натрия (ДСН). Результаты электрофореза для пробы, отобранной через 5 мин после добавления ингибитора, представлены на рис. 8-2, А. Динамика деградации за весь период отбора проб показана на рис. 8-2, Б. [c.103]

Ионные детергенты - додецилсульфат натрия в концентрации 0,5 мМ образует контакты с гидрофобными [c.44]

Для получения из биологического материала белков в чистом, гомогенном, состоянии применяют различные детергенты, способствующие расщеплению белок-липидных комплексов и разрыву белок-белковых связей . В частности, для освобождения белков (ферментов), прочно связанных с биомембранами митохондрий или других субклеточных структур, применяют тритон Х-100, додецилсульфат натрия и дезоксихолат натрия. [c.24]

Выделение из мембран индивидуальных компонентов производится с помощью детергентов (например, додецилсульфата натрия), солюбилизирующих нерастворимые вещества, и разделения полученных белков путем электрофореза в полиакриламидном геле. [c.334]

Подготовка ДЭАЭ-целлюлозы для хроматографии в С1 "-форме производится так же, как указано выше, но уравновешивание колонки, растворение фракционируемого материала и элюирование осуществляют буферными растворами, содержащими 8М мочевину. В качестве стартового буферного раствора в данном случае используют буферный раствор трис-НС pH 8, содержащий 0,05 М С1 и 8 М мочевины. Чтобы предотвратить агрегацию и ассоциацию молекул фракционируемого материала в присутствии мочевины, к буферному раствору добавляют 0,1% додецилсульфата натрия. В полученном растворе, содержащем оба детергента (мочевину и додецил-сульфат натрия), растворяют фракционируемый материал, который диализуют против того же раствора в течение 24 ч. [c.207]

Фосфолипиды пластичного слоя прикреплены к пептидогликану липопротеинами, пересекающими периплазматическое пространство. Обработка детергентами (например, додецилсульфатом натрия) приводит к нарушению этих связей. Основное отличие внешнего фосфолипидного слоя от внутреннего липидного - высокое содержание липополисахарида. [c.17]

Число молекул детергента в мицелле. При растворении в воде небольших количеств додецилсульфата натрия [c.352]

Рецепторы исследуются на трех уровнях в интактной ткани или в отдельных интактных клетках, в суспензиях мембран, полученных из этой ткани, и на молекулах, выделенных из нее. Считается, что биохимические исследования отражают физиологические свойства, если на всех уровнях получены согласующиеся результаты. Биохимические исследования рецепторных молекул увенчивались успехом только тогда, когда удавалось отделить эти молекулы от окружающих мембранных компонентов с сохранением присущих свойств. Наиболее полезными инструментами при таких исследованиях являются неионные детергенты, типа, например, тритона Х-100, эмульфогена или бриджа. Они солюбилизируют мембрану, но стабилизируют гидрофобный мембранный белок в воде и благодаря своим амфо-фильньш свойствам заменяют липиды на белковой поверхности. Тем самым они предотвращают агрегацию и осаждение белка и позволяют избежать денатурации, которая всегда происходит при применении ионного детергента додецилсульфата натрия (ДСН) (гл. 3). [c.242]

Сайто [1064] методом диализа изучил адсорбцию детергентов (додецилсульфата натрия, хлоргидрата додециламина и т. д.) на водорастворимых полимерах, в том числе на поливинилпирро-лидоне. Густавсон [1065] указывает, что поливинилпирролидон способен связывать до 90—100% от собственного веса таннина мимозы, причем количество связываемого вещества не зависит от pH в пределах pH 2—7. Франк, Баркин и Эйрик [1066] иссле- [c.596]

Наши первые исследования белкового состава миелина были посвящены изучению микрогетерогенности белков, извлеченных последовательно неионным детергентом — тритоном Х-100 и анионным детергентом — додецилсульфатом натрия. Приступая к выполнению этих исследований, мы руководствовались следующими соображениями. До последнего времени нейрохимики изучали преимущественно растворимые белки нервной ткани. Очень мало работ было посвящено нерастворимым белкам различных структур нервной ткани, в том числе и такой специфической мембранной структуре, какой является миелин. Между тем роль нерастворимых белков в процессах внутриклеточного обмена веществ и в транспорте ионов и метаболитов через мембраны не менее важна для функций клетки, чем роль растворимых белков гиалоплазмы. [c.24]

Несколько лет назад я отмечал, что выделение ДНК из спермы рыб резко падает после облучения электронами, если для очистки использовать метод с детергентом (додецилсульфат натрия) [20]. Со временем мы склонились к мнению, что эти потери связаны с образованием сшивок между молекулами ДНК- Однако последующие наблюдения показали, что обработка спермы облученной рыбы трипсином уничтожила разницу в количестве выделенной ДНК, хотя количество белка должно быть очень малым [21]. Было высказано предположение, что аналогичные потери нуклеиновой кислоты в результате сшивок с белком можно вызвать ультрафиолетовым излучением. О таком эффекте сообщается в двух работах. Smith [и] нашел, что если облучать культуры Е. соИ и клетки экстрагировать с детергентом (додецилсульфат-натрия), то количество выделенной ДНК заметно уменьшается с увеличением дозы ультрафиолетового излучения (рис. 3) [22]. Автор проверил, что это не было связано с нарушением лизиса клеток. Можно видеть, что такой эффект выражен значительно сильнее, чем образование димеров тимина. Smith указывает, что этот эф- [c.122]

Рис. 4-48 Детергент додецилсульфат натрия (ДСН) в ионизированной форме и восстановитель Р-меркантоэтанол. Эти два реактива используются

Модификация метода Лоури, делающая его пригодным для измерения белка в пробах, содержащих сахарозу или ЭДТА, а также в препаратах мембран и липо-протеинов, описана Марквеллом и др. [91]. Эта методика основана на применении детергента (додецилсульфата натрия, ДСН) в составе щелочного карбонатного реактива для увеличения солюбилизации липоидных веществ и на использовании повышенного количества тартрата меди для предотвращения помех за счет сахарозы и ЭДТА. Методика применима в нескольких случаях, в том числе при определении белков во фракциях из сахарозных градиентов. [c.358]

Чтобы определить, за счет чего возникают эти дополнительные полосы, был разработан вариант двумерного электрофореза. В первом направлении разделение велось, как описано выше, а затем гель обрабатывали детергентом, додецилсульфатом натрия (ДСН), разрушающим нуклео-протеидные комплексы во втором направлении разгонка велась в присутствии ДСН. После окончания электрофореза определялось положение ДНК и белка. Оказалось, что наиболее быстро бегущая полоса мононуклеосом, названная МН-1 (мононуклеосома 1), содержит ДНК длиной 145 п. н. и по две молекулы гистонов Н2а, Н2Ь, НЗ и Н4, т. е. гистоновый октамер. Следующие компоненты — МН-2 и МН-3 — содержат ДНК длиной 165 и 195 п. н. и все [c.88]

Этот, третий по счету метод электрофореза также можно использовать для разделения белков, нерастворимых при низкой ионной силе в настоящее время он очень широко применяется для всех типов белков. В этом методе белки денатурируют анионным детергентом — додецилсульфатом натрия (рис. 9.3). Часто этот метод сокращенно обозначают как ПАГЭ-ДСН (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия). ПАГЭ-ДСН, обладающий высокой разрешающей способностью, покорил химиков, работающих с белками. Причина кроется в том, что разделившиеся зоны белков не только можно охарактеризовать по их относительной подвижности, но и определить размеры соответствующих молекул, поскольку при использовании этого метода полипептидные цепи делятся по размерам. Додецилсульфат натрия сильно связывается с бел- [c.320]

Белки под действием детергента додецилсульфата натрия (ДСН) денатурируют и диссоциируют на субъединицы. Инкубация белка в растворе ДСН при 100°С в течение нескольких минут приводит к разворачиванию белковых молекул и связыванию с ними молекул ДСН (примерно одна молекула ДСН на каждые два аминокислотных остатка). Образовавшиеся комплексы содержат 1,4 г ДСН на 1 г белка. Алифатические додецильные группы [c.133]

Б. Один из вариантов экспериментальной проверки возражения вашей коллеги состоит в том, чтобы разрушить незамкнутые тени эритроцитов до того, как они будут подвергнуты обработке проназой. Если спектрин устойчив к действию проназы, его подвижность при электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии детергента, додецилсульфата натрия, не должна измениться. Если, однако, спектрин локализован на цитоплазматической поверхности мембраны и расщепляется проназой, его подвижность должна значительно измениться. Эти контрольные эксперименты были проделаны и показали, что спектрин чувствителен к про-назе. [c.316]

Извлечению белков из биологического материала способствует его обработка детергентами додецилсульфатом натрия, дезоксихолатом натрия, тритоном Л"-100, алкилгликозидами и триалкиламмониопропансульфо-натами [c.26]

ДСН-гель-электрофорез. Клаус Вебер и Мери Осборн показали, что молекулярную массу многих белков можно определить с помощью измерения их подвижности в полиакриламидном геле, содержащем детергент — додецилсульфат натрия (ДСН). При нейтральном pH в И/о-ном ДСН и 0,1 М меркаптоэтаноле большинство многоцепочечных белков связывает ДСП и диссоциирует, дисульфидные связи разрываются меркаптоэтаполом, вторичная структура исчезает, в результате чего комплексы, состоящие из субъединиц белка п ДСН, приобретают беспорядочную конфигурацию. Обработанные таким образом белки имеют одну и ту же форму и одинаковое отношение заряд/масса. Это объясняется тем, что количество ДСН, связываемое на единицу массы белка, всегда постоянно и равно 1,4 г ДСН на 1 г белка таким образом, заряд в большей степени определяется ДСН, чем различными зарядами, присущими аминокислотам. Таким образом достига- [c.231]

Рис. 448. Детергент додецилсульфат натрия (ДСН) в ионизированной формеи восстановитель (3-меркаптоэтанол. Эти два реактива использз тся

Воздействие на белок реагентов, нарутаюгцих нековалентные взатюдействия, прежде всего систему водородных связей. Для стабильности структуры белка необходимо образование не менее 90% возможных водородных связей внутри бежовой глобулы. Разрыв значительной их части вызовет переход нативной структуры в денатурированное состояние. К таким реагентам относятся концентрированные растворы мочевины (6-8 М), солянокислого гуанидина (б М), органические растворители (спирты, формамид, муравьиная кислота) и ионные детергенты (анионный детергент - додецилсульфат натрия). [c.44]

Принцип метода. Белки денатурируют анионным детергентом - додецилсульфатом натрия. Электрофорез в НААГе с ДЦС-Ка обладает высокой разрешающей способностью и позволяет фракционировать белки в зависимости от их молекулярной массы (Остерман, 1985 Скоупс, 1985) (Рис. 14). Обработка додецилсульфатом натрия обеспечивает денатурацию белка и [c.52]

Этп результаты подтверждены Девисом (1964) на смесях додецилсульфата натрия и неионного детергента НД15 с использованием циклогексана в качестве масляной фазы. Наличие вторичного мини-, мума подтверждается только на разбавленных растворах. Толщина жо прослойки при большой ионной силе зависит от стерических затруднений предельного монослоя, как в тончайших черных мыльных пленках. [c.117]

Всякому структурному исследованию ДНК или РНК предшествуют выделение их из клеток, очистка и фракционирование. Поскольку в клетке нуклеиновые кислоты практически всегда находятся в комплексес белками (т. е. в вил, нуклеопротеидов), их выделение сводится в основном к очистке от белков (депротеинизации). Чаще всего нуклеиновые кислоты экстрагируют из гомогенатов клеток или очищенных клеточных органелл смесью фенол — вода В присутствии ионных детергентов (например, додецилсульфата натрия). При этом белки (и ряд других клеточных компонентов) переходят в органическую фазу, а нуклеиновая кислота остается в водной фазе. Из водного раствора ДНК или РНК осаждают спиртом. [c.10]

Особый случай представляет собой отделение белка от свободного детергента. Здесь следует помнить о том, что при концентрациях выше некоторых критических детергенты в водном растворе существуют в виде мицелл, достаточно крупных для того, чтобы не проникать в поры, например сефадекса G-25. Например, мицеллы додецилсульфата натрия (ДДС-Na) содержат до 70 молекул, т. е. имеют суммарную молекулярную массу около 20 ООО. Мицеллы Тритона Х-100 еще крупней — до 120 молекул с суммарной массой около 75 000. Критическая концентрация мицеллообразования для ДДС-Na в 0,01 М Na l составляет 0,3%, а для Тритона Х-100 — 0,06%. Это означает, что отделить от детергентов гель-фильтра-дией можно только очень крупные белки на крупнопористых матрицах. К счастью, в случае ДДС-Na проблему можно разрешить, воспользовавшись резким падением его растворимости при понижении температуры. Охлаждением препарата до 0° основную массу [c.138]

Сукцинат убихинон-редуктаза (СУР) катализирует окисление сукцината убихиноном. По данным электрофореза, в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия фермент состоит из 3 —4 полипептидов. Субъединицы с молекулярными массами 70 000 и 28 000 Да представляют собой собственно сукцинатдегидрогеназу, в субстратсвязывающем центре которой происходит дегидрирование сукцината низкомолекулярные компоненты комплекса И (м. м. ок. 15 000 Да) придают сукцинатдегидрогеназе реактивность по отношению к убихинону, чувствительность к специфическим ингибиторам и, по-видимому, принимают участие в связывании фермента с мембраной. Выделение препарата СУР основано на экстракции фермента из мембраны с помощью неионного детергента тритона Х-100 и концентрировании препарата охлажденным ацетоном. Дальнейшее фракционирование сульфатом аммония и очистка на кальдий-фосфатном геле позволяют получить фермент в высокоочищенном состоянии с каталитической активностью около 25 мкмоль окисленного сукцината в 1 мин на [c.423]

В 1971 г. Ф. Сенгер и Г. Николсон предложили жидкостно-мозаичную модель биомембран, согласно которой мембраны представляют собой жидкокристаллические структуры, в которых белки могут быть не только на поверхности мембран, но и пронизывать их насквозь. В этом случае основой мембраны является липидный бислой, в котором углеводородные цепи фосфолипидов находятся в жидкокристаллическом состоянии, и с этим бислоем связаны белки двух типов периферические и интегральнь1е. Первые - гидрофильные, связаны с мембранами водородными и ионными связями и могут быть легко отделены от липидов при промывании буфером, солевым раствором или при центрифугировании. Вторые белки - гидрофобные, находятся внутри мембраны и могут быть выделены только после разрушения липидного слоя детергентом (процесс солюбилизации мембран), например, додецилсульфатом натрия, ЭДТА, тритоном и др. Интегральные белки, как правило, амфипатические, т.е. своей гидрофобной частью они взаимодействуют с жирными кислотами, а гидрофильной частью - с клеточным содержимым. Интегральные белки часто являются гликопротеидами, которые синтезируются в аппарате Гольджи, глико-зилируются в мембране и содержат много гидрофобных АК и до 50% спиральных участков. Эти белки перемещаются внутри липидного бислоя со скоростью, сравнимой с перемещением в среде, имеющей вязкость жидкого масла ( море липидов с плавающими айсбергами белков ). [c.107]

Один из широкоиспользуемых методов получения препаратов ДНК, не содержащих белков, заключается в деструкции клеточных стенок или мембран с последующим применением анионного детергента типа додецилсульфата натрия и отделением белков в виде осадка, при сохранении нуклеиновой кислоты в растворе. Далее ДНК обычно выделяют осторожным добавлением этанола к солевому раствору нуклеиновой кислоты. Образующийся гелевидный осадок можно собрать либо намотав клубком на стеклянную палочку, либо вытянув в виде нитей [12]. [c.35]

Значительно более трудную задачу представляет разделение смесей крупных пептидов, содержащих более 20 аминокислотных остатков. Основная сложность связана со саойством таких пептидоа слипаться в аодных растворах друг с другом и образовывать высокомолекулярные агрегаты. С целью предотаращеиия агрегации в буферные растворы добавляются детергенты (мочевина, гуанидин-гидрохлорид, додецилсульфат натрия). [c.54]

В заключение приведем пример того, как метод меченых атомов помог окончательно разрешить запутанную ситуацию. Ранние данные [73] показали, что, хотя с увеличением концентрации поверхностное натяжение растворов лаурилсульфоновой кислоты вначале убывает, равновесная кривая зависимости поверхностного натяжения от концентрации проходит через минимум. Поскольку в минимуме наклон кривой равен нулю, согласно уравнению (П-85), Г2 также равен нулю. В то же время низкое поверхностное натяжение ( 30 дн/см ) в минимуме означает, что на поверхности имеется поверхностно-активное вещество. Позднее подобное парадоксальное поведение наблюдалось и для растворов лаурилсульфата натрия. В конце концов выяснилось, что это отклонение связано с присутствием некоторого количества примеси лау-рилового спирта. В изящном исследовании с использованием тритированного спирта Нильсон [74] показал, что по мере увеличения концентрации лаурилсульфоната натрия лауриловый спирт сначала концентрируется в поверхностном слое (см. в разд. П1-8 обсуждение эффекта проникания ), а затем, когда концентрация поверхностноактивного вещества становится достаточно большой, возвращается в объем раствора. Этим и объясняется появление минимума поверхностного натяжения. По-видимому, рассматриваемый эффект обусловлен солюбилизацией (см. разд. Х1-5Б) спирта агрегатами или мицеллами, образующимися при некоторой определенной концентрации детергента. Если использовать тщательно очищенный додецилсульфат натрия [75], минимум поверхностного натяжения исчезает. [c.71]

На рис. Х1-14 приведены зависимости, описывающие физические свойства раствора додецилсульфата натрия — типичного коллоидного электролита [38, 39]. Как видно из этого рисунка, наиболее значительные изменения физических свойств соответствуют области так называемой критической концентрации мицеллообразевания (ККМ). Приблизительное постоянство,осмотического давления при концентрации детергента выше ККМ показывает, что в этих условиях протекает процесс, весьма сходный с выделением новой фазы. И хотя на самом деле никакого значительного разделения фаз здесь не наблюдается, резкое З/ величение рассеяния света свидетельствует о переходе системы в коллоидное состояние. Предложено хорошо аргументированное объяснение, согласно которому в области ККМ начинается агрегация длинноцепочечных электролитов в довольно большие заряженные частицы. Такие частицы обычно называют мицеллами. Детальное рассмотрение физической химии мицеллообразования несколько выходит за рамки этой книги. Однако это явление столь характерно для растворов детергентов, что о нем необходимо сказать хотя бы несколько слов. [c.380]

Ценные сведения о свойствах коллоидных электролитов дают также диффузионные исследования. В работах этого рода используется способность растворов коллоидных электролитов к солюбилизации. Это очень интересное свойство растворов детергентов заключается в том, что при концентраци >х выше ККМ в растворы переносятся нерастворимые в обычных условиях органические молекулы, например бензол и различные краситс-ли. Так, краситель оранжевый ОТ окрашивает чистую воду очень слабо, однако в присутствии додецилсульфата натрия он дает раствор темно-красного цвета. По-видимому, солюбилизованное вещество внедряется в саму мицеллу, поскольку для получения такого эффекта необходимо наличие мицелл. Справедливость такого предположения подтверждай т и другие данные. Р1змеряя скорость диффузии солюбилизованного красителя в гомогенном растворе детергента, можно приблизительно оценить коэффициент самодиффузии мицелл. В рассмотренном примере коэффициент самодиффузии составляет около б -10 см-/с и уменьшается с ростом ионной силы [44, 45]. [c.381]

Сополимеры стирола и дивинилбензола (ДВБ), этилвинилбензола и ДВБ и другие подобные гидрофобные полимеры-гели избирательно поглощают из водных и неводных растворов липофильные или частично липофильные вещества простые и замещенные фенолы, неионные детергенты типа тритвн Х-100 и детергенты типа SDS (додецилсульфат натрия), четвертичные аммониевые основания, антибиотики, инсектициды, гиббереллины, витамин Bjj. [c.42]

СНз(СН2)пОЗОзНа ] широко распространенного детергента-ионы детергента остаются в растворе в виде мономеров. При увеличении концентрации детергента наступает момент (критическая концентрация мицеллообра-зования), когда в результате ассоциации мономеров образуются мицеллы (рис. 12-16). Критическая концентрация мицел-лообразовапия для додецилсульфата натрия составляет 8,2 мМ. При изучении свойств мицелл было установлено, что их молекулярная масса в среднем составляет 18 ООО. Рассчитайте, сколько молекул детергента содержится в одной мицелле. [c.352]

Додецилсульфат натрия и холат натрия солюбилизируют гидрофобные части мембран, действуя как мыла или детергенты (рис. 12-2). [c.359]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология