Культивирование лимфоцитов

Профессиональное облучение. Сообщения о хромосомных аберрациях у индивидов, подвергающихся, в силу своей профессии, хроническому облучению, появляются довольно часто. Спонтанно клетки с кольцевыми или дицентрическими хромосомами возникают очень редко (1/2000 клеток после 48 ч культивирования лимфоцитов и 1/8000 после 72 ч). Поэтому они служат хорошими индикаторами воздействия радиации. Однако и простые хромосомные разрывы при облучении тоже увеличиваются в числе [1387]. Облучаемые группы включают рабочих, наносящих фосфоресцирующие вещества на циферблаты часов, персонал, обслуживающий атомные реакторы, и лиц, попавших в аварии, приводящие к утечке радиации. Появилась даже возможность оценить по величине цитогенетических изменений дозы радиации, полученные индивидами. Такая биологическая дозиметрия является полезным тестом, применяемым в радиобиологии человека. [c.250]

Из рис. 34 следует, что за 20 ч культивирования лимфоцитов, полученных на 9-й день после иммунизации, содержание клеток, связывающих антиген, не изменялось. Не изменялось и содержание иммуноглобулинов на клеточной поверхности за 4 ч культивирования (срок на- [c.148]

Различия во включении тимидина, обусловленные культуральной средой, особенно те, которые выявляются при стимуляции культур ЛПС и кроличьими антителами против иммуноглобулинов кур, наблюдаются также при культивировании лимфоцитов периферической крови. Как было показано в ряде опытов, полная среда со всеми добавками обеспечивает диффе- [c.416]

Средний прибор для культивирования лимфоцитов по Мар-бруку универсальные пластиковые стерильные флаконы на [c.227]

АНТИГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ХЕЛПЕРНОГО ФАКТОРА ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ЛИМФОЦИТОВ ПО МАРБРУКУ [c.229]

Рис, I. Малый, средний н большой приборы для культивирования лимфоцитов по Марбруку. [c.230]

Коллективная монография, написанная ведущими специалистами, работавшими в Базельском институте иммунологии (Швейцария), посвящена методам иммунохимии и клеточной иммунологии. Авторы имеют большой опыт в этой области, что определяет основные достоинства книги — удачный подбор методов и исчерпывающее, но вместе с тем краткое описание каждого из них. Рассмотрены определение активности антител, их анализ методом пептидных карт, исследование белков методами электрофореза, изоэлектрофокусирования и изотахофореза, методы иммунофлуоресценции, культивирования лимфоцитов, изотопные и другие методы. [c.4]

Основные сведения о морфологии хромосом человека получены при изучении их в метафазах митоза и профа-зе-метафазе мейоза. При этом важно, чтобы количество делящихся клеток, было достаточно высоко. Важнейшие цитогенетические работы выполнены на лимфоцитах периферической крови, поскольку культивирование лимфоцитов в течение 2-3 суток в присут- [c.28]

Рис. 8.2. Методика приготовления цитогенетических препаратов путём культивирования лимфоцитов периферической крови.

Современные методы иммунизации in vitro основаны на двух системах культивирования лимфоцитов, разработанных в конце 1960-х годов. Метод суспензионного культивирования (R. Mi-shell, R. Dutton, 1966, 1967) был первым методом, в котором иммунизация полностью проходила вне организма. Критическими факторами в данном методе были низкая концентрация кислорода в атмосфере (7%), высокая плотность клеток, легкое покачивание культуры, ежедневное добавление свежей среды и выбор подходящей партии СПК и антигена (использовали эритроциты барана). Эта система была усовершенствована Р. Кликом (1972), который предложил добавлять в среду 2-меркаптоэтанол, предшественники нуклеиновых кислот, инсулин, глутамин, а также дополнительные аминокислоты. При таких условиях иммунный ответ наблюдали в отсутствие покачивания и в атмосфере с 5% СОг. [c.103]

Совершенно иная картина наблюдалась при культивировании лимфоцитов, полученных на 5-й день после иммунизации (рис. 34). Уже через 1 ч от момента начала культивирования число клеток, связывающих эритроциты барана (антиген), уменьшалось в два раза. За этот же срок почти вдвое уменьшалось содержание иммуноглобулинов на поверхности лимфоцитов. В то же время за последующие 16 ч дальнейшего уменьшения числа клеток, связывающих антиген, не происходило, за исключением проб, в которые был внесен ингибитор белкового синтеза — циклогексимид. Таким образом, все лимфоциты на 5-й день после иммунизации можно разделить на две группы необратимо теряющие свои антигенсвязывающие рецепторы (и одновременно часть поверхностных иммуноглобулинов) и способные поддерживать на постоянном уровне содержание антигенсвязывающих рецепторов. Вывод из этих опытов очевиден в селезенке иммунизированного животного есть много лимфоцитов, связывающих антиген за счет сорбированных антител (комплексов антиген-антитело). [c.149]

При исследовании прямых хромосомных препаратов клеток тимуса и фабрициевой сумки Т/В-клеточных химер через 3—4 нед после переноса клеток можно показать, что размножающиеся клетки тимуса принадлежат хозяину, в то время как размножающиеся клетки фабрициевой сумки являются потомками клеток донора (Weber, 1975). Количество В-клеток хозяина и Т-клеток донора в организме химер ничтожно мало на протяжении всего времени наблюдения за ними (2,5 года химе-ризма вплоть до сегодняшнего дня). Более того, последние работы показывают, что в химерах этого типа большинство реконструированных фолликулов в фабрициевой сумке являются клональными, т. е. клеточная популяция в пределах одного фолликула возникает из одной донорской клетки (Pink et al., 1984). Ценность химер состоит в том, что их можно многократно использовать как доноров крови, содержащей идентифицируемые Т- и В-клетки. В последние годы методы культивирования лимфоцитов, особенно В-клеток, усовершенствованы. Описание этих методов приведено ниже. [c.414]

При культивировании мышиных лимфоцитов в среду выде ляются факторы, помогающие образованию антител и заменяющие Т-хелперы. Хелперная активность была обнаружена в среде при культивировании лимфоцитов, стимулироваииых 1) аллогенными клетками, 2) митогенами и 3) чужеродными антигенами. Некоторые характеристики этой активности сопоставлены в табл. 1. [c.227]

Большой прибор для культивирования лимфоцитов по Марбруку кристаллизационные чашки из стекла Pyrex диаметром 10 см ребристые чашки из стекла Ругех диаметром 15 см специально изготовленные стеклянные воронкообразные вставки. [c.227]

Известны два основных метода культивирования лимфоцитов in vitro метод Мишелла—Даттона и метод Марбрука. По неясным пока причинам в системе Мишелла — Даттона не удается индуцировать синтез антиген-специфического хелперного фактора поэтому приходится использовать только метод Марбрука. [c.229]

Инкубируя клетки с неспецифическнми антигенами, можно получить данные об иммунологической специфичности хелперных факторов, образующихся при культивировании лимфоцитов по Марбруку. Следует отметить, что специфические факторы проявляют хелперную активность в культурах спленоцитов мышей nude при ответе на гомологичные антигены, но неэффективны при ответе иа эритроциты барана. [c.238]

Усиление клеточной пролиферации и синтеза макромолекул — это опосредованный эффект, отдаленный результат первоначального взаи 0Действия между аллогенными клетками. Неоднозначность такого взаимодействия лежит в основе ложных положительных еакций, которые можно наблюдать, в частности, при культивировании лимфоцитов Fi с клетками родительских лини и или лимфоцитов мышей nuinu с аллогенными клетками. Как выяснилось, положительный ответ в этих случаях обусловлен обратной стимуляцией отвечающих клеток, которая происходит в результате абортивной аллогенной активации облученных стимулирующих клеток интактными отвечающими клетками. [c.252]

При культивировании лимфоцитов совместно с клетками сердечной мышцы эмбриона, с куриными фибробластами или эпителием щитовидной железы человека удавалось получить переживание небольшого числа лимфоцитов в течение нескольких недель (Bloom, 1928, 1937 Pulvertaft, 1959). [c.108]

Биотехнологическим методом получают и интерлейкины — сравнительно короткие (около 150 аминокислотных остатков) полипептиды, участвующие в организации иммунного ответа. Образуются в организме определенной группой лейкоцитов (микрофагами) в ответ на введение антигена. Используются как лечебные средства при иммунных расстройствах. Путем клонирования соответствующих генов в Е.соЦ или культивирования лимфоцитов in vitro получают интсрлейкин-L (для лечения ряда опухолевых заболеваний), фактор крови VIII (культивированием клеток млекопитающих), фактор IX (необходим для терапии гемофилии), а также фактор роста р-лим-фоцитов, фактор активизации макрофагов, Т-заместительный фактор, активатор тканевого плазминогена. [c.179]

Лимфоциты, помещенные in vitro вместе с клетками стромы, реагируют на антиген по-разному в зависимости от природы стромальных клеток (А. Я. Фриденштейн и др., 1978). Наиболее интенсивная реакция антителообразования развивается при совместном культивировании лимфоцитов с клетками стромы селезенки и тимуса. В присутствии клеток стромы, полученных из костного мозга, лимфоциты не реагируют на антиген. [c.118]

Помимо специфичного связывания антигена рецепторами, для эффективной активации Т- и В-клеток необходимо межклеточное взаимодействие с участием других компонентов поверхности, например, в случае Т-клеток, D28 (см. гл. И). Индуцированная антигеном активация и дифференцировка Т- и В-клеток обычно происходит в лимфоидных тканях и может быть воспроизведена in vitro при культивировании лимфоцитов в присутствии активирующего агента. Такими агентами могут служить [c.29]

Как установлено, в подобных смешанных культурах возможна стимуляция Тх-клеток D4 , в результате которой они пролиферируют и выделяют эффекторные цитокины. В тех же культурах образуются Тц-клетки DS" их цитотоксическую активность можно определить в тесте с высвобождением Сг (см. рис. 29.26). Тц-клетки могут быть также получены при культивировании лимфоцитов в присутствии ИЛ-2 для увеличения популяции эффекторных клеток, образовавшихся in vivo. Активность Тц-клеток следует отличать от активности нормальных киллеров (НК) для их дифференциации возросшую популяцию лимфоцитов исследуют с использованием соответствующих стандартных культур. [c.383]

Помимо определённого комплекса клинических аномалий, синдром Мартина-Белла сопровождается характерной цитогенетической картиной ломкостью в дистальной части длинного плеча Х-хромосомы (в зоне Xq), что внещ-не напоминает спутник длинного плеча (рис. 4.33). Эта ломкость выявляется лищь при культивировании лимфоцитов в условиях дефицита фолиевой кислоты, поэтому для обнаружения ломкости нужно либо использовать культуральные среды, лишённые фолиевой кислоты, либо вводить в культуральную среду антагонисты фолиевой кислоты, но даже и при этих условиях ломкость Х-хромосомы выявляется не во всех клетках (до 60%). [c.147]

Число разных активных центров (центров связывания), образуемых лимфоцитами в форме антител, по примерным оценкам, составляет 10 это значительно больше (примерно на два порядка), чем число разных центров связывания, образуемых в форме всех других белков всеми другими клетками, вместе взятыми. Разнообразию антител соответствует разнообразие В-лимфоцитов. Как показали опыты по культивированию лимфоцитов in vitro, колония клеток, выращенных из одной клетки (моноклональная культура), синтезирует антитела одного типа. Моноклональные колонии, выращенные из разных клеток лимфоцитов, синтезируют разные антитела. Следовательно, популяция лимфоцитов в организме гете-рогенна существует клонов лимфоцитов, каждый из которых синтезирует антитела только одного типа. Общее число лимфоцитов в теле человека составляет 10 следовательно, они образуют 10 клонов по 10 клеток в каждом клоне (все приведенные величины являются приближенными). [c.478]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология