ДНК экстрагирование из вирусов

Дальнейшие данные были получены с помощью актиномицина D [126]. РНК, экстрагированная из асцитных опухолей Кребс II и отцентрифугированная затем в сахарозном градиенте, образует три пика, поглощающих при 256 ммп. При идентификации оказалось, что пики эти соответствуют РНК с константами седиментации 30S, 19S и 4S. Если клетки в течение короткого времени (20 мин) инкубировать с уридином, меченным тритием, то радиоактивность обнаружится только в двух пиках меньшая — в пике 4S-PHK (растворимая РНК) и большая — в очень небольшом пике 40S-PHK. Обычные клетки и клетки, зараженные вирусом ЕМС, дают аналогичные результаты. При более длительной инкубации (2 час) радиоактивность находят не только в пике 40S-PHK, но и в трех пиках, поглощающих в ультрафиолете. Такая же картина наблюдается в зараженных клетках. [c.247]

Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о том что генетический код, установленный для Е. соИ, является универсальным. Так, например, в лабораториях Уитмана и Френкель-Конрата препарат РНК, экстрагированный из вируса табачной мозаики, обработали азотистой кислотой известно, что при этом происходит дезаминирование многих остатков цитозина с образованием урациловых остатков, в результате чего кодоны U U (серин) превращаются в UUU (фенилаланин). Аналогичным путем из кодона ССС (пролин) может образоваться СиС (лейцин). Оказалось, что при заражении растений табака препаратом РНК, обработанной азотистой кислотой, аминокислотная последовательность вирусного белка оболочки, выделенного из мутантных штаммов, действительно меняется [22]. Причем многие из происшедших изменений можно было точно предсказать исходя из данных, приведенных в табл. 15-3. Сходным образом, замены аминокислот в дефектных молекулах гемоглобина (рис. 4-17) в большинстве случаев могут быть обусловлены изменением только одного основания. Так, гемоглобин S может образовываться в результате одного из следующих изменений в седьмом кодоне GAA(Glu) GUA(Val) или GAG(Glu)- ->GUG(Val). Еще один аргумент в пользу универсальности генетического кода состоит в способности рибосом и молекул тРНК из Е.соН осуществлять трансляцию цепи мРНК, кодирующей синтез гемоглобина, и синтезировать при этом полноценный гемоглобин [23]. [c.195]

При всех положительных качествах стерилизующей фильтрации через мембраны нельзя не отметить и недостатки этого способа, к которым относятся адгезия частиц к мембранам, неоднородность пор по диаметру ("абсолютных мембран по стерилизующей эффективности не существует, но стерильность может быть достигнута и достигается вследствие наложения других причин, например, адсорбции частиц на мембране), удержание части стерилизуемой дорогостоящей жидкости на мембране при фильтрации малых объемов ее, а также возможная селективная адсорбция ионов (чаще — катионов) из небольших объемов растворов, недостаточная или плохая смачиваемость мембран водой и др К тому же по-прежнему актуальной остается проблема вирусного загрязнения БАВ и очистки БАВ от вирусов Ситуация, связанная с очисткой биопродуктов от вирусов, обострилась еще и потому, что появилось сообщение о контаминации гормона роста человека, получаемого из гипофиза, "медленным вирусом болезни Крейтц-фельда-Якоба, и это на фоне возрастающей роли ретровирусов (включая ВИЧ) Как следствие — усилилась настороженность к препаратам из крови, гормонам, экстрагированным из тканей млекопитающих, рекомбинантным белкам, образуемым культивируемыми клетками животных Более того, ряд вирусов животных являются патогенными для человека (зоонозные вирусные инфекции) [c.256]

Установлено, что лишенная белка РНК, экстрагированная из некоторых животных вирусов, действует как инфекционное начало и обладает поэтому свойствами генетического детерминанта. Подобного рода инфекционная РНК была получена из вирусов лошадиного энцефаломиелита [14, 15, 101], энцефалита Менго [16], полиомиелита [16—18], западнонильского энцефалита [17], энцефаломиокардита (ЭМК) мышей [23] и ящура [22, 87]. [c.155]

ДНК вируса осповакцины имеет двухцепочечное строение ее молекулярный вес составляет 80-10 [88]. Из вируса папилломы Шопа были получены две формы ДНК с одинаковым молекулярным весом, но с различными константами седиментации (21 S и 28 S). 288-компонент представляет собой, но-видимому, двухцепочечное кольцо, которое раскрывается с образованием 218-компонента [89]. ДНК, экстрагированная из вируса герпеса простого, харак- [c.155]

Е. Экстрагирование. Пробы воды помещаются в целлюлозный диализный мешочек, погружаемый в гидрофильное вещество — полиэтилеигликоль [23—25]. Вода адсорбируется из мешочка, а вирусы, подобно другим молекулам с высоким молекулярным весом, остаются внутри него. [c.281]

Следует отметить одно исключение. Зиншеймер обнаружил, что вирус бактериофага 0Х 174 имеет молекулярный вес (определенный по рассеянию света) 6,2-10 . Этот вирус содержит 25 вес, % ДНК, После экстрагирования ДНК Зиншеймер нашел, что она имеет молекулярный вес 1,7-10 . Это говорит [c.339]

Это относительно небольшие вирусы с икосаэдральной симметрией. Средний размер вирусных частиц — 22—30 нм. Устойчивы к действию жировых растворителей. Геном образует несегментированная молекула +РНК. Экстрагированная РНК сохраняет иифекционность даже после удаления молекулы белка под действием протеаз. [c.132]

Обычно раствор вируса энергично перемешивают или гомогенизируют с равным объемом дважды перегнанного фенола, насыщенного водой или буфером. Затем смесь центрифугируют, а водный раствор отделяют пипеткой от фенола и студенистого пограничного слоя. Таким же образом водную фазу обрабатывают фенолом второй раз. При необходимости в количественном выходе РНК фракции фенола и пограничного слоя можно снова промыть водой или буфером. Все водные фракции соединяют и обрабатывают 2—3 объемами этилового спирта с добавлением (в том случае, если эти фракции не содержат буферных растворов) ацетата (pH 6—7) до конечной концентрации приблизительно 0,05 М для образования хлопьевидного осадка РНК. Трех- или четырехкратное иереосаждение РНК из водного раствора этанолом с последующим тщательным сливанием надосадочной жидкости с хорошо уплотненного осадка РНК приводит к количественному удалению фенола и делает нену/кным широко принятое экстрагирование эфиром. [c.57]

Фенольную обработку обычно проводят при комнатной температуре, хотя в некоторых случаях рекомендуется проводить ее при 0° [162], а при извлечении РИК из такого источника, как вирус восточного энцефаломиелита лошадей, необходима высокая температура [544]. При выделении РНК из некоторых вирусов растений, как и при выделении ДГН из многих вирусов, хорошие результаты дает сочетание экстрагирования фенолом с обработкой детергентом (0,1%-пый раствор додецилсульфата натрия, 0,01%-ный ЭДТА, 37°, 15 мин). Многие из ДНК-содер-жаш,их вирусов необходимо предварительно обрабатывать какой-либо протеазой (например, нроназой) для получения хороших выходов ДНК — независимо от того, будет ли использован фенольный или детергентный метод или же сочетание обоих этих методов. [c.58]

Было показано также, что в процессе экстрагирования вирусных нуклеиновых кислот и отделения их от белка может происходить комплексирование в действительности одноценочечных комплементарных молекул, так что обнаруживаемая двухцепочечность может быть на деле артефактом, связанным с фенольным или детергентным методами выделения внутриклеточной РНК. Были получены данные в пользу гипотезы, что матричная (—)-цень удерживается в комплексе с возникающей (4-)-цепью в основном не за счет спаривания оснований, а каким-то менее жестким способом, возможно с помощью молекул репликазы [117, 549]. Именно выраженной способностью образующейся РНК действовать в качестве информационной РНК и связываться с рибосомами, может быть, и объясняется быстрое снятие этой цепи с матрицы. Наряду с этими данными, однако, в последнее время были получены новые данные о существовании РФ- и РПФ-форм РНК у фагов и вирусов растений [25, 46, 221]. Проведенный недавно анализ образующихся 5 -концевых групп [c.241]

Недавно в одной из работ сравнивалась глюкозосвязывающая фракция, выделенная из культур нормальных куриных фибробластов, с фракцией, выделенной из куриных фибробластов, трансформированных вирусом саркомы Рауса (Lee, Lipmann, 1977). Значение экстрагированного связывающего фактора при определении было примерно в 2,5 раза выше в трансформированных клетках по сравнению с нормальными фибробластами, а значение поглощения глюкозы было выше в трансформированных клетках, чем в нормальных. [c.162]

Большое разнообразие макромолекул, изучаемых с помощью антител, включает не только естественные продукты животных н растений, но, и продукты микробного происхождения, и синтетические вещества. Приготовление поликлональной антисыворотки к определенным молекулам может включать предварительную очистку, если нельзя получить очищенный коммерческий препарат. Для компонентов клеточной поверхности современный подход — это получение моноклональных антител требуемой специфичности при этом решается проблема очистки иммуногена (см. гл. 3). С другой стороны, с помощью уже существующих антител можно очистить компоненты клеточной поверхности, а также проводить обогащение клеток, экспрессирующих антиген-мишень. Эти подходы обсуждены в гл. 5. Метод экстракции имеет большое значение в тех случаях, когда необходимо получить полиспецифическую антисыворотку к смеси иммуногенов, например экстрагированных клеточных мембран, гомогенатов тканей, разрушенных ультразвуком бактерий, вирусов и паразитов. Невозможно в этой главе привести детальное руководство по экстракции и очистке огромного разнообразия иммуногенов. Существует специальная литература, посвященная методам получения углеводных, бактериальных, вирусных, грибковых и паразитарных антигенов [21]. Очистка с помощью аффинной хроматографии описана в гл. 5, а приготовление иммуноглобулинов [c.50]

Краситель экстрагируют из клеток 1 мл 50%-ного этанола, содержащим 0,1 М NaH2P04, и определяют его количество спектрофотометрически при 540 нм. Полученные данные сравнивают с количеством красителя, экстрагированного из незараженных клеток и из клеток, зараженных стандартным вирусом. [c.145]

В клетке некоторые вирусы существуют в виде окруя енных мембранами агрегатов (фото 54). Поэтому требуется время для высвобождения вируса после получения экстракта из листьев. Если проводить центрифугирование вскоре после экстрагирования, то даже при низкой скорости большая часть вируса будет потеряна с первым же осадком. [c.42]

В системно инфицированных ВЖМТ молодых (длиной около 3 см) листьях китайской капусты концентрация 838-рибосом временно возрастает это увеличение содоржаиия 833-рибосом отмечается при анализе экстрактов, приготовленных пепосредственно перед том, как вирус становится доступным определению в градиепте плотности. Одиако дело здесь, вероятно, в том, что под влиянием вируса рибосомы легче поддаются экстрагированию, а вовсе не в интенсификации синтеза (Рэндле и Мэтьюз, неопубликованные данные). [c.240]

Дополнительные полезные данные можно получить, наблюдая воздействие на нематод и на передачу вируса различных способов обработки зараженной почвы. Так, Кедмен и Харрисон [315] показали, что если почву, зараженную вирусом черной кольцевой пятнистости томатов и вирусом мозаики резухи, высушивать в течение недели, то нематоды погибают и почва утрачивает инфекционность. Точпо так н е при просеивании почвы инфекционность-сохраняется в тех фракциях, в которых находятся нематоды [721]. Обработка почвы химикатами, которые ие действуют на вирус в экстрагированном соке растения, но уничтожают присутствующих в почве нематод, предотвращает передачу вирусов черной кольцевой пятнистости томатов и мозаики резухи. [c.384]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология