Асцитная жидкость

Для очистки больших количеств моноклональных антител из асцитных жидкостей применяют хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.316]

Асцитная жидкость полностью стабильна при хранении в стерильном состоянии при 4°С. В течение долгого времени моноклональные антитела могут храниться при 4°С в 50%-ном сульфате аммония. [c.169]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРОВ АНТИТЕЛ В АСЦИТНЫХ ЖИДКОСТЯХ [c.321]

Методом ИФА (с. 320) определяют титры антител в асцитной жидкости. Затем ее концентрируют (N1 4)2804 и хранят при 4° С до использования. [c.315]

Потребности в белках детей определяются в первую очередь возрастом и массой тела. Дети даже раннего детского возраста нуждаются в 55—72 г белка в сутки. С возрастом (от 12 до 15 лет) эта норма увеличивается до суточной нормы взрослого человека. Суточные потребности в белке резко возрастают при беременности и лактации, а также при некоторых патологических состояниях, когда организм теряет белок с мочой или асцитной жидкостью, экссудатами при нефритах, тяжелых инфекционных заболеваниях, ожогах, травмах и т.д. [c.413]

Суточные потребности в белке резко возрастают при беременности, а также при некоторых заболеваниях, связанных с вьщелением белка с мочой, экссудатами, асцитной жидкостью и т. д. [c.360]

Для получения больших количеств антител вводят гибридомные клетки в организм животных и получают от них асцитную жидкость. Предварительно животным вводят агенты, повышаю- [c.117]

Важнейшим свойством гибридом, унаследованным от миеломных клеток, представляется их способность давать асцитные опухоли при введении мышам и синтезировать при этом до 15 мг антител на 1 мл асцитной жидкости. [c.166]

Инъекция гибридом и сбор асцитной жидкости [c.266]

Кроликов иммунизировали глобулиновой фракцией мышиной асцитной жидкости, содержащей моноклональные антитела. Эту фракцию получали преципитацией 18%-ным сульфатом натрия и диализом против PBS. При каждом введении использовали 2,5 мкг белка. Первую инъекцию осуществляли в/ м в оба бедра в комплексе с НАФ. Бустерные инъекции осуществляли через 6 нед в две точки п/к с НАФ, а на четвертом месяце — также, но без адъюванта. Кровь брали спустя [c.87]

Выделение антител из культурального супернатанта и из асцитной жидкости [c.144]

Асцитная жидкость, полученная в результате интраперитонеальной инъекции гибридных клеток мышам [c.145]

Каждой мыши вводят по меньшей мере 10 , а желательно по Ю клеток в PBS. Гибридома растет в виде асцитной опухоли, и асцитная жидкость содержит антитела в концентрации, приблизительно в 10—500 раз превышающей таковую в культуральной жидкости (концентрация антител в асцитной жидкости составляет несколько мг в 1 мл). [c.145]

Для того чтобы собрать асцитную жидкость, мышь забивают дислокацией шейных позвонков. Делают надрез таким образом, чтобы обеспечить доступ в перитонеальную полость, и дренируют ее пастеровской пипеткой, отбирая асцитную жидкость. [c.145]

Центрифугируют асцитную жидкость (при высоком числе оборотов в минуту) для удаления клеток и клеточного дебриса. Супернатант лучше всего хранить при —20 °С, разлив на али- [c.145]

Первостепенное значение для осуществления контроля качества имеет создание запаса замороженных гибридомных клеточных линий с указанием даты заморозки. Следует замораживать образцы культивируемых клеток на каждой фазе роста. Образцы асцитных жидкостей следует замораживать с обозначением номера каждого пассажа. [c.146]

Самый простой путь определения концентрации моноклональных иммуноглобулинов в асцитных жидкостях — электрофорез с последующим окрашиванием гелей. На электрофоре-грамме должны быть видны отдельные полосы, характеризующиеся определенным положением в случае антител данной специфичности. Их интенсивность можно сравнить с интенсивностью полос, полученных при исследовании проб, отобранных на более ранних пассажах. Данный метод более удобен и информативен, чем титрование специфических антител, хотя время от времени следует применять и последний. [c.148]

В препарате МКА (даже в виде асцитной жидкости) фактически все молекулы иммуноглобулина представляют собой антитела нужной специфичности в отличие от препарата поликлональных антител, в котором самое большее 20% молекул иммуноглобулина, а зачастую и намного меньше имеют необходимую специфичность. Это значит, что, используя МКА, можно приготовить аффинные колонки очень высокой емкости, пусть даже не достигающие теоретически возможной (см. ниже). [c.165]

Асцитные жидкости центрифугируют при 50 ООО в течение 30 мин. Супернатант разбавляют в четыре раза холодным фосфатным буфером. Добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония при постоянном перемешивании и оставляют на 1 ч при 4°С. Центрифугируют при 5000 g в течение 10 мин. Осадок растворяют в буфере В и диализуют против буфера Б. Меняют буфер через 3—4 ч. Диализуют не менее 8 ч. Центрифугируют при 15000 g в течение 10 мин для удаления денатурированных белков. Измеряют экстинкцию при 280 нм предварительно разбавленного в 100 раз раствора и по формуле ( 280 1,25) рассчитывают содержание белка в миллиграммах (асцитн ле жидкости содержат обычно 25—35 мг/мл белка). [c.316]

В наших работах 5-образные кинетические кривые были отчетливо выявлены при изучении кинетики накопления асцитной жидкости и числа опухолевых клеток в асците при асцитной лейкемии ЬЛ2 0 на мышах-гибридах ДВА12 и С57 черные (рис. 3), а так/ке при асцитном раке Эрлиха Г на беспородных мышах и мышах линии Ва1Ь. [c.535]

Растворимость кремнезема в жидкостях тела уменьшается в присутствии некоторых солей металлов. Кинг и Макджордж [91] нашли, что в асцитной жидкости величина насыщения кремнезема приближается к 9 лгг на 100 мл (близко к растворимости аморфного кремнезема в воде). Эти авторы также показали, что свеже-осажлениая кремневая кислота растворяется до такой же степени в асцитной жидкости кроме того, железо и особенно алюминий [c.279]

Метод очень эффективно работает для всех антител класса IgG мыши, кроме подкласса IgGl. Эти последние антитела обладают очень низкой аффинностью по отношению к белку А. Поэтому для получения хорошего их выхода метод следует модифицировать. Очистка иммуноглобулинов других классов здесь не рассматривается, поскольку подавляющее большинство гибридом, получаемых в результате гипериммунизации и слияния, проводимых в соответствии с описанными методиками, продуцирует антитела класса IgG. Мы не советуем вам получать антитела нз асцитной жидкости (разд. 6.3.8), поскольку такие же количества антител, причем более чистых, могут быть получены прн использовании методов, описание которых приводится выше. [c.198]

Общее потребление всего организма массой 70 кг тогда будет =80- 100 г/(л-сутки). Сравним с этими цифрами скорости потребления глюкозы раковыми клетками карциномы Эрлиха в благоприятных условиях (при 5 5о) и в реальных условиях (5 < 5о) (см. рис. 6.1). Имеем соответственно (9х)тах=1>67 мг(мин-г)= = 2,4(сутки) и (9х)реал=0Л58 (сутки)" . Мы видим, что даже реальные скорости, лимитированные низким содержанием глюкозы в асцитной жидкости, почти в 30 раз превышают удельную скорость потребления нормальной ткани. Однако общее потребление опухолью будет мало, так как масса ее составляет ничтожную долю от массы организма д /1 =10 —10 . Еще в большей мере это отно- [c.131]

Для многих целей не требуется очистка антител, и они используются в виде культуральных жидкостей или асцитных жидкостей. Грубую иммуноглобулиновую фракцию можно получить высаливанием белков сульфатом аммония (45% насыщения) с последующим диализом. Если антитела необходимо выделить в чистом виде, то предварительно определяют их класс и подкласс, так как способы очистки различаются для антител разных классов. Это можно сделать с помощью метода иммунодиффузии по Ухтерлони. Антитела из культуральной жидкости концентрируют в 10 раз, для чего их высаливают сульфатом аммония, диализуют и разводят в объеме 1/10 от первоначального объема. Для идентификации класса антител используют набор антисыво- [c.118]

Традиционный метод получения больших количеств моноклональных антител включает введение мышам или крысам гибри-домных клеток выбранного клона с последующем развитием опухолевых асцитов и отбором асцитной жидкости. От одной мыши можно полу> ить до 50 мг антител. Однако при получении очень больших количеств антител использование животных уже нецелесообразно, поскольку для получения 1 кг очищенного продукта потребуется 20 ООО мышей. Следовательно, необходимо развивать промышленную технологию получения моноклональных антител in vihv. [c.38]

Использование моноклональных антител, выделенных и асцитной жидкости или культуральной среды, существенно облегчает получение подклассов IgG мыши. Значительно более-высокая концентрация Ig олределенного изотипа в сочетании с гомогенностью белка позволяет с помощью протеина А получать иммуноглобулины высокой чистоты. [c.110]

Эуглобулиновую фракцию асцитной жидкости получают с помощью сульфата аммония и диализуют ее против PBS (или диализуют непосредственно культуральную среду). [c.110]

Разумеется, асцитная жидкость загрязнена другими иммуноглобулинами мыши. Содержание примесей зависит от чистоты содержания животных. Предпочтительно использовать мышей, свободных от видоспецифических патогенных возбудителей, если таковые доступны. Степень загрязнения антител увеличивается и при значительном излиянии крови в асцитную жидкость. Некоторые гибридомы хорошо растут в брюшной полости. Другие же линии, образующие достаточное количество антител в культуре, in vivo продуцируют мало антител, несмотря на хороший рост в виде асцитных опухолей. Некоторые гибридомы формируют солидные опухоли или метастазы. Иногда, ще не достигнув значительного роста, такие опухоли служат причиной гибели хозяина-носителя. [c.146]

Асцитные жидкости можно хранить в замороженном виде, но в этом случае отпадает необходимость в соблюдении стерильности (препараты будут использованы для последующих в/б инъекций), которая должна быть обеспечена при замораживании клеток для последующего культивирования in vitrp. После центрифугирования асцитной жидкости осадок ресуспендируют в PBS, а не в среде ГАТ. [c.147]

Во-первых, в зависимости от области применения существует возможность выбора наиболее подходящего и удобного источника получения моноклональных антител культуральной или асцитной жидкости. При использовании препаратов асцитной жидкости возникают определенные трудности при интерпретации полученных результатов, обусловленные примесью естественных мышиных антител к моноклональным антителам (высокие фоновые уровни). Однако в 1 мл асцитной жидкости содержится несколько мг МКА. Поэтому, когда используют разведение 1 1000 или более, значительная часть посторонних мышиных антител удаляется разбавлением. Иногда необходимо полностью удалить из препарата примесь естественных иммуноглобулинов (например, при использовании моноклональных антител для выделения и очистки небольшого количества белкового антигена с целью биохимического анализа). В последнем случае предпочтительно выделять моноклональные антитела из культуральной жидкости. При использовании в иммунологических реакциях асцитной жидкости следует иметь в виду присутствие посторонних фоновых антител. В некоторых случаях в организме мыши может существовать высокий титр природных антител, реагирующих с антигеном, специфически распознаваемым моноклональными антителами. При использовании асцитной жидкости возникают и проблемы неспецифического характера. Например, культуральная жидкость дает более ясное и точное окрашивание образца в иммуногистологических исследованиях. [c.148]

Предназначенный для связывания иммуноглобулин должен (быть сравнительно чистым и в идеале состоять преимущественно из молекул специфических антител. Это не представляет проблемы при использовании МКА, полученных из асцитной жидкости и затем очищенных. В качестве препарата поликлональных антител лучше всего ис пользовать антитела, очищенные путем аффинной хроматографии, или по край ней мере фракцию иммуноглобулинов, полученную с помо-ддью (Ионообменной хроматографии (ам. гл. 2, разд. 10). Метод связывания с эритроцитами должен быть мягким, неденатурирующим, поскольку специфическая антигенсвязывающая способность антител очень лабильна.. Ниже приведены две наиболее распространенные и простые методики. [c.262]

РТГА часто пред почнтают ПГА как /метод количественного определения антигена. Он обладает рядом преимуществ. Так, напр[имер, нет необходимости, в получении очищенных ант ител из антисыворотки ил и асцитной (Жидкости антиген может быть мономерным использоваться в реа кции в нативном состоянии. [c.265]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология