Гибриды клеток мыши и человека

Использование таких приемов отбора позволило получить гибриды не только путем слияния линий клеток одного вида, о и межродовые гибриды клеток человека с клетками мыши м крысы. Эти линии клеток грызунов/человека нестабильны, тричем легче они теряют хромосомы человека, так что после тридцати делений в процессе выращивания у них остается всего семь из 24 хромосом человека, изначально присутствовавших в гибридной клетке. Этот процесс элиминации хромосом был Применен при картировании генома человека, поскольку таким путем удается быстро локализовать определенные гены на хромосомах. [c.313]

Потеря хромосом у гибридов между клетками мыши и человека-это случайный процесс. То, какая хромосома сохранится и стабилизируется в гибридной линии,-дело случая. Однако из всей популяции гибридных клеток можно отобрать стабильные линии, содержащие желаемые гены и хромосомы, используя селекционные методы. Эти процедуры аналогичны тем, которые используются для отбора определенных классов рекомбинантов, образующихся при скрещиваниях бактерий или дрожжей. [c.298]

Гибриды клеток мыши и человека имеют тенденцию к утрате многих хромосом человека. Показано, что утрата носит случайный характер, и поэтому среди большого числа гибридов всегда можно найти клетку, сохранившую какую-нибудь одну конкретную хромосому человека. [c.201]

Цитологический метод приобрел большое значение в связи с возможностями, которые открыла гибридизация соматических клеток. Как было показано в гл. 11, получение гибридов между соматическими клетками человека и мыши позволяет в значительной степени преодолеть проблемы, связанные с невозможностью скрещиваний, и картировать многие гены, контролирующие метаболизм клетки. [c.507]

Необходимо иметь в виду, что, в оттшчие от половой гибридизации, соматическая гибридизация эукариотических клеток завершается объединением под одной мембраной не только ядерных геномов двух (или более) особей, но и генов цитоплазмы (митохондриальных, хлоропластных, емкостью в 1000—2000 генов), что может отразиться на функциональной активности гибрида У межвидовых гибридов часть хромосом может затрачиваться за счет элиминации, которая оказывается видоспецифичной Так в гибридах протопластов клеток "мышь х человек" и "человек х комар" элиминируются хромосомы человека и комара соответственно При морфологическом различии хромосом такие гибриды удобны для картирования генов Напомним, что в соматических клетках мыши содержится 20 пар хромосом, в клетках человека 23 пары хромосом и три пары — в диплоидных клетках комара [c.183]

Обратная транскриптаза —РНК-зависимая ДНК-полимераза. этот фермент обнаружен в составе онкогенных и неонкогенных вирусов, в спонтанной карциноме млекопитающих, в нормальных клетках мыши и человека, а также в клетках опухолей человека при отсутствии каких-либо РНК-содержащих вирусов. Обратная транскриптаза, осуществляющая синтез ДНК, использует в качестве матрицы одноцепочечную РНК. Рибонуклеозидтрифосфаты в этой реакции не могут заменить дезоксирибо-нуклеозидтрифосфаты. Актиномицин D в этом случае не влияет на процесс синтеза ДНК. Непосредственным продуктом реакции является двухцепочечный гибрид РНК—ДНК, образующийся в результате синтеза комплементарной цепи ДНК на одноцепочечной РНК. . [c.64]

Используя вирус Сендай, удалось осуществить слияние клеток абсолютно разных видов организмов и тканей. В качестве родительских брали самые разные клетки животных, человека и бактерий. При слиянии клеток разных видов животных были получены межвидовые гибриды клеток мыщи и человека (рис. 67), крысы и человека, человека и китайского хомячка, человека и курицы, человека и москита, крысы и мыши, мула и мыши и др. Оказалось возможным также гибридизировать клетки разных тканей, например лимфоцита и фибропласта, или нормальные клетки с опухолевыми. Такие межвидовые гибридные клетки оказываются жизнеспособными и часто размножаются в течение длительного времени. [c.168]

Традиционные методы генетического анализа, разработанные Менделем, основаны на переходе из диплоидного состояния в гаплоидное в процессе мейоза. Восстановление диплоидности происходит при оплодотворении. Изменения плоидности обеспечивают сегрегацию генов, то есть их распределение в потомстве. Несколько десятилетий назад было показано, что соматические клетки эукариот можно размножать in vitro, т.е. поддерживать в виде так называемых клеточных культур (рис. 18.1). У этих культивируемых in vitro клеток в норме не происходит смены диплоидной и гаплоидной фаз. Тем не менее существуют различные способы, позволяющие изучать определенные генетические феномены на культурах клеток. Существенным преимуществом клеточных культур является то, что возникновение новой клеточной генерации занимает несколько часов, тогда как появление нового поколения на уровне целой особи-это месяцы или годы. Дополнительное преимущество для изучения генетики человека-это возможность комбинировать наследственные детерминанты клеток в культуре, поскольку проведение направленных скрещиваний между людьми, естественно, невозможно. Недавно были разработаны способы получения гибридных клеток, содержащих наследственную информацию различных видов организма, например человека и мыши. Такие гибриды нельзя получить другими способами, т.е. на уровне целых организмов. [c.290]

Низкая эффективность метода MMGT означает, что загрязнение целыми клетками является серьезной проблемой даже в том случае, когда система селекции предусматривает подавление их роста. В некоторых экспериментах мы обнаружили гибриды целых клеток и даже ревертанты донорных клеток, которые смогли избежать элиминации. Конечно, процедура очистки мини-клеток в какой-то степени решает проблему, но ценой уменьшения выхода мини-клеток и, как следствие, последующего уменьшения выхода гибридов. Один из способов разрешить это противоречие — использовать реципиентные и донорные клетки с различной морфологией. Например, в наших опытах в роли реципиентов выступали клетки эмбриональной карциномы мыши (ЭК). Их морфология является рецессивным признаком по отношению к морфологии L-клеток. В экспериментах, где гибридные клетки человек—грызун с морфологией L-клеток используются в качестве доноров человеческих хромосом, а ЭК-клетки — в качестве реципиентов, гибриды целых клеток могут быть легко выявлены по их морфологии. [c.22]

Первой стадией при создании гибридных моноклональных антител является получение обычной гибридомы, синтезирующей моноклональные антитела желаемой специфичности к одному из двух антигенов. Затем гибридому адаптируют к росту в присутствии 8-азогуанина и отбирают те клетки, которые способны размножаться на НАТ-среде. Эти первичные гибридомы, выступающие в роли миеломного партнера, подвергают слиянию с иммунными лимфоцитами мышей, иммунизированных вторым антигеном. В результате слияния и отбора получают дочерние (вторичные) гибридомы, способные синтезировать антитела двойной специфичности. Таким способом были получены гибридные моноклональные антитела, которые одновременно связывались с кислой фосфатазой простаты человека и поверхностным антигеном гепатита В. Гибридные антитела оказались стабильными в процессе хранения, не изменяли своей двойственной специфичности и обладали достаточно высокими константами связывания по отношению к обоим антигенам. Гибридные антитела, взаимодействующие с пероксидазой и соматотропи-ном, были успешно использованы для изучения локализации сома-тотропина в клетке. [c.166]

В отличие от гибридом грызунов клетки человека, образующие антитела, разумеется, невозможно выращивать в брюшной полости сингенного хозяина. Однако исследуется возможность размножения клеток человека в брюшинной полости крыс и мышей nude. Большинство же препаратов МКА человека в настоящее время получают непосредственно в виде культуральной среды. Если антитела предполагается использовать для диагностических целей, достаточно просто профильтровать среду через мембрану с диаметром пор 0,2 мкм, чтобы удалить небольшую примесь вируса, который может латентно инфицировать лимфобластоидные клеточные линии. [c.162]

Рис. 2. Прямой анализ продуктов, секретируемых гибридными клетками. Культуры гибридом получали, проводя слияние спленоцитов мышей, иммунизированных линией опухолевых клегок человека, с клетками мышииой мне ломы Х63-Аё8. Взвесь, содержащую 5-10 клеток гибридомы в 1 мл, культивировали в течение ночи в полной среде для тканевых культур в присутствии 100 мкКи/мя 5-метионина. Культуральную жидкость центрифугировали 15 мин при 20 000 Затем 100 мкл надосадочной жидкости смешивали перед ДСН-ПАГЭ с 50 мкл 3-кратного концентрата ДСН-буфера для образца. На гель наносили пробы по 50 мкл. Электрофорез проводили при постоянном токе 25 мА на пластинку геля в течение 3,5 ч. Т и Л —соответственно тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов 1 и — окрашенные элек трофореграммы и радиоавтографы одних и тех же образцов. Стрелками указаны легкие цепи пмм ко лобулино8, кодируемые геномом клеток Х63-Ай8.

Для получения гибридомы, образующей антитела N 5/1, мышей иммунизируют перевиваемыми лимфобластами человека, берут клетки мышиной селезенки и проводят их слияние с клетками мышиной миеломы, а затем отбирают полученные гибриды. В качестве реагента, содержащего моноклональные антитела, используют разбавленный 1 10 нли 1 20 супернатаит среды, в которой культивировалась данная линия гибридных клеток. Чтобы избежать спонтанного Т-клеточного розетирова-иия, образование розеток с участием моноклональных аитнтел к DR-антнгенам проводят с эритроцитами быка (ЭБ), а ие барана. [c.202]

Эффективно продуцировать моноклональные антитела могут любые В-клетки, необходимо лишь сделать их для этого бессмертными и пролиферирующими. Чаще всего для этой цели получают гибридные клетки — путем слияния мышиных спленоцитов с миеломными В-клетками от мышей той же линии, не секретирующими собственных антител. Возможно также получить межлинейные или межвидовые гибриды, однако они часто нестабильны. Другой метод имморта-лизации — это трансформация клеток, например в случае В-клеток человека путем инфицирования вирусом Эпштейна—Барр. [c.537]

Помимо картирования генов в определенной хромосоме, разработаны также методики регионального картирования в определенном участке изучаемой хромосомы. Для этого используют различные методы. Наиболее точный уровень картирования был достигнут при использовании клонированных генов и рекомбинантных ДНК в сочетании с методами генетики соматических клеток. Можно без преувеличения сказать, что применение методов молекулярной биологии революционизировали методы картирования. Применяется гибридизация клонированного гена с метафазными хромосомами гибрида или с хромосомами клеток родительской формы (гибридизация in situ). Важно отметить, что эти методы позволяют картировать гены, не экспрессирующиеся в гибридных клетках, что характерно для многих тканеспецифичных генов. Гибридизация in situ меченых клонированных генов с метафазными хромосомами позволяет с высокой достоверностью идентифицировать участок локализации гена (цит. по Варшавер, 2000). Впервые с помощью этого метода были картированы гены а- и (3-глобулинов у гибридов между клетками человека и мыши (Риск, Као, 1982). [c.255]

Анализ клеточных гибридов человек—мышь показывает, что локус полиовирусных рецепторов расположен в 19-й хромосоме человека [58, 213], а локус рецептора для вирусов Коксаки В — в маленькой акроцентрической хромосоме [156]. Присутствие функциональных вирусных рецепторов на одних клетках в организме и отсутствие на других указывает на то, что они экспрессируются на клеточной поверхности в соответствии с программой дифференцировки и роста. Разнообразие рецепторов, используемых различными пикорнавирусами, делает их полезным инструментом для исследования экспрессии рецепторов. [c.219]

Функционирующие в гибридных клетках хромосомы синтезируют определенные белки. Фенотипически хромосомы мыши и человека отличаются. Нетрудно определить, какие хромосомы присутствуют в гибриде и выяснить, синтез каких белков связан с данными хромосомами человека. Обычно гибридные клетки теряют хромосомы целиком, поэтому, если ка-кие-либо гены присутствуют или отсутствуют вместе, то они могут быть отнесены к одной хромосоме. Это позволяет картировать хромосомы человека. В ряде случаев для картирования используют хромосомные перестройки, что дает возможность установить локализацию генов в определенном участке хромосомы, определить последовательность их расположения, т. е. построить карты хромосом человека. [c.33]

В гибридных клетках человек-мышь, полученных в результате слияния ане-уплоидных Ь-клеток мыши и диплоидных эмбриональных фибробластов человека, 75-95% человеческих хромосом утрачиваются в процессе культивирования, причем их утрата носит случайный характер. Среди множества разнообразных гибридов всегда найдется клетка, сохравдвтая ту или иную хромосо.му человека. После размножения этой клетки можно провести анализ ферментов, активность которых связана с наличием именно данной хромосомы. Использование методов дифференциального окрашивания хромосом позволяет связать п ны с определенными локуса-ми хромосом, так как в гибридных клетках довольно часты хромосомные разрывы, перестройки, присутствие не целых хромосом, а отдельных фрагментов. [c.123]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология