Гибридомная технология

Моноклональные антитела, полученные с помощью гибридомной технологии, можно выделять из двух источников. [c.144]

Гибридомная технология интенсивно развивается. По-видимому, менее чем через десять лет будет получено около 10 различных типов моноклональных антител различной специфичности, синтезированных гибридомами, полученными при слиянии клеток крыс и мышей. Большинство из этих гибридом будет рассредоточено во всем мире по отдельным лабораториям. Очевидно, в пределах различных центров некоторые виды гибридом будут многократно дублироваться. Это создает проблему иного плана, чем просто явное повторение. Важным свойством моноклональных антител является то, что они могут быть получены в количествах, достаточных для снабжения ими большого числа лабораторий, занимающихся сходными или дополняющими данную тему анализами. Результаты этих исследований можно сопоставить и сравнить. Однако часто различ- [c.150]

Наиболее эффективный метод получения антител к подклассам IgG человека основан на гибридомной технологии 124, 50]. [c.104]

Созданы и применяются в производстве высокочувствительные диагностические препараты на основе метода ИФА (иммуноферментного анализа), ДНК-зондов, внедрения полимеразной цепной реакции (ПЦР).Используются моноклональные антитела, полученные методом гибридомной технологии. Получены генетически трансформированные кролики с геном асРНК, устойчивые к вирусам лейкоза, а также трансгенные кролики с геном альфа-2 интерферона. Разработана рекомбинантная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота на основе оспененного вектора. На культуре клеток нарабатывается антиген и производится диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Генно-инженерные вакцины против ящура и сибирской язвы производятся в объемах, обеспечивающих потребности в них России, стран СНГ и ряда других государств мира. [c.428]

Создание специфических антител, не вызывающих перекрестных реакций, представляет собой довольно трудную задачу, поскольку получение антител человека путем традиционной гибридомной технологии сталкивается с рядом проблем. [c.214]

Один из подходов получил название метода гибридных антител . Ферментативным гидролизом получают РаЬ-фрагменты молекул антител против определяемого антигена и используемого фермента. Затем смесь продуктов гидролиза подвергают восстановлению меркаптоэтанолом при этом РаЬ-фрагменты обратимо диссоциируют на симметричные части. После удаления восстанавливающего агента молекулы снова ассоциируют, образуя гибридные молекулы антител, специфичные к определяемому антигену и ферменту. При добавлении фермента образуется комплекс антитело—фермент (рис. 19, а). Гибридомная технология открывает принципиально новый путь получения гибридных антител, который заключается в том, что сливаются моноклональные клеткн, специфичные против данного антигена и фермента-маркера, в результате чего образуются гибридомы второго поколения, синтезирующие антитела, с двумя специфичностями (рис. 19. б). [c.112]

При иммунизации животных иммунный ответ вырабатывается на все антигенные детерминанты всех компонентов вводимого материала. Это значительно осложняет отбор клонов, продуцирующих антитела к интересующей антигенной детерминанте, так как их доля может быть крайне незначительной. Поэтому по возможности для иммунизации применяют очищенные антигены, по крайней мере на последних этапах иммунизации. Однако одним из основных достоинств гибридомной технологии и является как раз то обстоятельство, что специфические антитела против данного антигена можно получить, взяв для иммунизации неочищенный препарат антигена, и употреблять впоследствии эти антитела для очистки антигена. [c.100]

Выполняемая на кафедре работа по гибридомной технологии связана с совершенствованием методов иммунизации вне орга- [c.121]

С развитием гибридомной технологии вновь появилась надежда на то, что антитела можно будет использовать в качестве терапевтических средств для поддержания постоянного уровня чистых моноспецифичных антител в организме. Однако остаются проблемы, связанные с риском развития перекрестных реакций, приводящих к развитию иммунного ответа и анафилаксии ведь в организме больного могут вырабатываться собственные антитела на детерминанты моноклональных антител мыши. Поэтому основная задача в настоящее время состоит в том, чтобы разработать методы получения моноклональных антител человека, обладающих как специфическими иммунотерапевтическими свойствами, так и пониженной иммуногенностью. [c.211]

Несмотря на то что потребность в МКА человека совершенно очевидна, в настояш,ее время известно удивительно мало со-обш,ений об их успешном получении. Причина этому — пока еще не решенные проблемы гибридомной технологии клеток человека. Эти проблемы заслуживают детального рассмотрения, поскольку в них отражаются принципиальные различия стратегий получения МКА человека и грызунов. [c.154]

На раннем этапе исследований был сделан ряд попыток применить пассивную иммунотерапию поликлональной антисывороткой, но они остались без продолжения из-за трудности получения специфичных антител в высоких титрах. Возможно, эти проблемы поможет решить гибридомная технология получения моноклональных антител. Хотя специфические опухолевые антигены пока [c.388]

Методы, используемые разными авторами на каждом из этапов, в деталях почти всегда несколько отличаются. Здесь будет описан вариант гибридомной технологии получения моноклональных антител, успешно применяемый в нашей лаборатории. Учитывая, что публикуемый сборник посвящен методам культивирования клеток, основное внимание будег уделено этапам работы, связанным с культивированием клеток. Подробно с методами, относящимися [c.194]

Описаны все этапы гибридомной технологии для получения моноклональных антител мышиного происхождения. Особое внимание уделено этапам, связанным с культивированием клеток. Библиогр. 14 назв. [c.317]

Следует остановиться на одном благоприятном обстоятельстве, способствующем широкому распространению гибридомной технологии. Как отмечали Кёлер и Милстейн (1975), слияние приводит как бы к обогащению в отношении антителообразующих клеток. Гибридов получается больше, чем можно ожидать, исходя из частоты слияния и доли специфических антителообра- [c.95]

Еще одна область применения моноклональных антител связана с диагностикой рака. С использованием гибридомной технологии удалось обнаружить ряд уникальных раковых маркеров, в частности маркеры СА125 и СА19-9 (Корго зк1 е1 а ., [c.397]

На этапе соединения кДНК Н- и L-цепей в одном векторе образуется широкий спектр генов различных антител. Некоторые из них кодируют уникальные сайты связывания, получить которые с помошью обычной гибридомной технологии было бы невозможно. Пул антител млекопитающих включает 10 -10 разных антител. Фаговая библиотека содержит примерно столь- [c.219]

Хотя гибридомные технологии еще продолжают достаточно активно использоваться, с появлением новых эффективных методов белковой инженерии, в том числе систем отбора белков на основе разнообразных дисплеев и репрезентативных клонотек случайных белковых последовательностей, mAb начинают постепенно сдавать свои позиции. Новые технологии позволяют отбирать антитела требуемой специфичности непосредственно из суспензии фаговых частиц без иммунизации лабораторных животных и при этом получать белки с совершенно новой специфичностью к антигенам, которые неиммуногенны in vivo. Новые подходы дают возможность снять ограничения, накладываемые на производство антител особенностями иммунного ответа живого организма. В последние годы удалось получить большое количество рекомбинантных антител с новыми свойствами значительно уменьшить размер их молекул, а также объединить антитела в поливалентные гибридные комплексы, сильно повысив при этом их авидность. Генно-инженерными методами удалось объединить фрагменты антител с разнообразными аминокислотными последовательностями для обеспечения адресной доставки макромолекул. Такие гибридные молекулы, кроме антител, включают ферменты для активации предшественников цитоток-сичных лекарственных препаратов, токсины, белки вирусных частиц, используемые в генотерапии, и сами могут быть включены в липосомы для повышения эффективности химиотерапии. Рекомбинантные антитела применяют для получения биосенсоров, используемых при мониторинге исследуемых молекул в реаль- [c.409]

В настоящее время эту задачу удается решить с помощью так называемой гибридомной технологии, разработанной в середине 70-х годов Дж. Кёлером и Ц. Мильштейном. Гибридомная технология основана на слиянии соматических клеток и заключается в гибридизации иммунных В-лимфоцитов с опухолевыми клетками (рис. 113). [c.211]

Современная схема получения абзимов на основе аналогов субстратов в переходном состоянии (TSA) представлена на рис. 57 [275]. Работа начинается с выбора реакции, которую необходимо осуществить с помощью каталитических антител, далее следует разработка структуры стабильных TSA и их химический синтез. Для повышения иммуногенности низкомолекулярных TSA получают их конъюгаты с высокомолекулярным носителем, например БСА, которыми иммунизируют лабораторных животных. Селезенку иммунизированных животных после спле-нэктомии можно затем использовать для получения поликлональных и/или mAb к TSA по гибридомной технологии и/или для выделения TSA-связывающих фрагментов антител с применением методов фагового или рибосомного дисплеев. На заключительном этапе среди представителей антител, взаимодействующих с TS А, отбирают макромолекулы, катализирующие исследуемую ферментативную реакцию. [c.429]

Принципиальным решением множества проблем, связанных с применением антител, явилось создание новой гибридомной технологии, которая позволила получить моноклональные антитела. Эта техника бьгла разработана в 1975 г. У.Келлером и А.Милстейном. Получаемые с помощью этого метода гибридные клетки синтезируют и вьщеляют в культуральную среду антитела, абсолютно одинаковые по своему сродству к той или иной антигенной детерминанте. [c.269]

Поликлональные антитела, применявшиеся ранее в тестах на беременность, неизменно давали перекрестные реакции с LH, имеющимся в моче любой женщины, поэтому с помо1Цью этих тестов можно было надежно определять только высокие концентрации h G. Кроме того, аффинность специфичность поликлональных аятисывороток и содержание специфических антител в них изменялись от партии к партии в широких пределах. Развитие гибридомной технологии получения моноклональных антител [6 ] позволило решить проблемы, связанные со специфичностью и непостоянством свойств антисывороток. На базе моноклональных антител появилась возможность создания высокочувствительных тестов с использованием не только кон урентных, но и прямых сандвич -методов. [c.94]

Более подробно мы эту важную проблему не рассматриваем, поскольку обычные методы, используемые для получения поликлональных антител к аитигеиа1М клеточной поверхиости, в настоящее время вытеснены методами гибридомной технологии (гл. 3). [c.89]

Антисыворотки к подклассам IgA и IgG могут быть получены с помощью гибридомной технологии. Готовые к применению аффинно очищенные антитела могут быть использованы как в качестве им муногенов, так и в качестве сорбирующих антигенов. При этом простота в определении изотипов моноклональных антител сочетается с возможностью успешного получения специфической преципитирующей антисыворотки. Сыворотки получают, вводя животному интактные молекулы Ig илн F -фрарменты, затем их истощают на колонках со смесью других изотипов, содержащих как х-, так и Я-цепи. Получение чистого IgGaa мыши для иммунизации и адсорбции может быть осуществлено физико-химическими методами (разд. 10.6.1). [c.104]

Другим способом получения индивидуальных антител определенной специфичности служит гибридомная технология — создание иммортали-зованной (бессмертной) линии клеток, продуцирующих антитела только одной специфичности, Т. е. моноклональные (рис. 29.16). В такой культуре можно поддерживать антителообразование неопределенно долгое время. Моноклональные антитела несравнимо лучше соответствуют целям иммуноанализа, чем гетерогенные сыворотки, получаемые от иммунных животных, и поэтому нашли широкое применение в различных областях биологии в качестве высокоспецифичных зондов. [c.537]

Описанные исследования проводились в течение последних двадцати лет. Разработка гибридомной технологии получения моноклональных антител к поверхностным маркерам лимфоцитов овец позволяет в настоящее время более полно охарактеризовать субпопуляции их лимфоцитов (Miyasaka et al., 1983). Дальнейшие исследования субпопуляций лимфоцитов in vivo [c.444]

МонАТ являются новым поколением иммунодиагностических и иммунотерапевтических препаратов. Благодаря им иммунологические методы стали шире использоваться в различных отраслях науки, даже в тех, где ранее применение иммунологических подходов было ограничено или они вовсе не использовались. Это определило интерес к гибридомной технологии многих исследователей, занимающихся решением научных и прикладных задач. Принципы метода, а также возможности применения МонАТ описаны в ряде обзоров [2-4]. [c.194]

Для получения МонАТ используют различные клеточные системы. Особое внимание уделяется получению гибридом человеческого происхождения, поскольку МонАТ, полученные на их основе, имеют первостепенное значение для клинического применения. В этом направлении имеются некоторые успехи [5]. Однако в настоящее время основной клеточной системой в гибридомной технологии являются клетки мышиного происхождения, поэтому подробное описание метода, которое будет дано ниже, касается только мышиных МонАТ. [c.194]

Подготовка миеломных клеток. В гибридомной технологии используют различные миеломные линии (см. обзор [Ю]). Все они имеют генетические маркеры, позволяющие работать с ними в селективных условиях. Наиболее распространены в настоящее время две линии — 5р 2/0 Agl4 и Х63Ад8 6.5.3. Эти клеточные линии имеются во Всесоюзной коллекции клеточных культур. Обе они являются цроизводными линии РЗК, полученной из миеломы мышей ВАЬВ/с МОРС-21. Преимуществом этих клеток является вторичная утрата ими способности синтезировать собственные иммуноглобулины. Клетки дефектны по ферменту гипоксантин-гуанинфосфорибозил-трансфераза, благодаря чему устойчивы к 8-азагуанину и чувствительны к среде ГАТ (см. ниже). Реверсии в этих клетках являются чрезвычайно редким событием, тем не менее рекомендуют каждые 3—б мес эти клетки культивировать в течение 2—3 пассажей на среде с 8-азагуанином (2- 10 М). [c.196]

Страхование клеточного материала осуществляют с помощью )иоконсервации. На всех этапах гибридомной технологии (тестиро-шия, клонирования) клетки дополнительно размножают и замора-ивают в жидком азоте. [c.203]

Многие проблемы уже были упомянуты при описании отдельных этапов гибридомной технологии (подбор оптимальной среды, условий культивирования, тестирования и др.). Осложняет работу с гибридомами возможность инфекций. Поскольку в культуральную среду при получении и культивировании добавляют гентамицин (50 мкг/мл), то бактериальное заражение наблюдается чрезвычайно редко. Основную трудность представляет заражение плесневыми грибами, источником которого являются некоторые типы СОг-инкубаторов. Некоторые авторы используют противогрибковые антибиотики, например фунгизон. Однако они являются высокотоксичными. [c.204]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология