Иммунный анализ гомогенный

Рис. 7.8-3. Типы иммуносенсоров, а — Moдифициpoвaiшaя антителами поверхность преобразователя б — конкурентный иммунный анализ, [ ] ос l/[Ag] в — сандвичевый иммунный анализ, [ ] ос [Ag] г—гомогенный иммунный анализ, [ ] ос l/[Ag].

Интересным развитием идеи использовать ферментные метки является контроль соотношения связанный свободный> путем изменения активности фермента в результате связывания в конъюгат с антителом или дополнительного связывания антиферментных антител. Такие способы анализа не нуждаются в этапе разделения, а значит, можно упростить проведение определения. Разработано несколько способов гомогенного ферментативного иммунного анализа (ФИА). [c.595]

Гомогенный ферментативный иммунный анализ [c.595]

Титр антисыворотки сильно зависит от концентрации антигена, используемого дл я тестирования и от способа его определения. Например, одна и та же сыворотка может иметь титр 100 в тесте иммунопреципитации и 100 000 в тесте иммуноферментного анализа. Поэтому при тестировании сыворотки и определении титра лучше всего применять тот же метод, что и при анализе, а концентрацию антигена выбирать близкую к минимальной в том диапазоне, который выбран для анализа. Кроме того, следует учитывать, что в иммуноферментном анализе используют как гомогенные, так и гетерогенные методы определения концентрации антигена, которые могут сильно отличаться по структуре образующихся иммунных комплексов. В частности, в твердофазных методах вероятность образования циклических комплексов антиген — антитело значительно меньше, чем в гомогенных, а следовательно, и Наблюдаемая аффинность антител в обеих системах будет разная. [c.158]

Иммунный анализ может быть гомогенным, т.е. проводиться в жидкой фазе, или гетерогенным, когда один из реагентов присоединен к твердой фазе. [c.577]

Одним из свойств, резко отличающих лектины от иммунных антител, является их гомогенность. Я имею в виду не физическую гомогенность — в больщинстве случаев не удавалось очистить лектины до такой степени, чтобы можно было судить об их гомогенности по данным электрофоретического анализа или уль- [c.92]

Гомогенный тип и простота метода ЛИКА позволяют использовать его для экспресс-анализа антител, оценки связывающей способности иммунных сывороток. Действительно, тепень ингибирования светового излучения конъюгата кофактор— антиген гомологичной иммунной сывороткой пропорциональна концентрации в ней антител и определяется их константой связывания. Анализируя ряд сывороток в одних и тех же разведениях, можно достаточно быстро оценить и сравнить их связываюш,ую способность. [c.127]

При разработке конкретного варианта ИФА перед исследователем встает проблема выбора фермента в качестве метки. Для правильного выбора следует учитывать многие факторы например, в гомогенном ИФА в исследуемом образце должны отсутствовать свободный фермент-метка, или фермент, имеющий сходную с ним специфичность, ингибиторы или активаторы фермента и т. д. Выбор фермента может быть обусловлен также и целями ИФА. Например, при одновременном анализе очень большого числа образцов, выполняемого в течение довольно длительного времени, необходимо для уменьшения ошибки анализа использовать более стабильные субстраты. Гидролитические ферменты, например щелочная фосфатаза и р- )-галактозидаза, имеют более стабильные субстраты, чем оксидоредуктазы, такие, как пероксидаза и глюкозооксндаза, поэтому последние менее предпочтительны в случае реакции с продолжительным периодом инкубации, но могут быть с успехом использованы в быстрых методах иммуно-анализа. [c.68]

Детали этого метода описаны Кабатом и Мейером [66, 77]. Если можно получить сильные осаждающие антисыворотки, химический анализ преципитата гликопротеин — антитело может дать полезные сведения. Если гликонротеин гомогенен, то весь его гексозамин, гексозы, фукоза и сиаловые кислоты должны быть найдены в иммунном осадке (после поправки на растворимость осадка и если антитело присутствует в избытке). Ценность этой методики для гликонротеинов ясна в противоположность простым белковым антигенам гликонротеины могут содержать значительные количества таких легко определяемых компонентов, которые иммунный у-глобулин содержит только в небольших количествах [78—81]. Естественно, если препарат содержит несколько антигенных компонентов и антисыворотка содержит антитела ко всем этим компонентам, количественный анализ преципитации может указывать на гомогенность, хотя образец загрязнен. При таких обстоятельствах полная кривая осаждения даст большую информацию, и ингибирование осаждения низкомолекулярными веществами (если они доступны) также иногда можно использовать, чтобы отличить гомогенные препараты от гетерогенных. [c.54]

В целях удобства классификации целесообразно проводить разделение гетерогенных методов по характеру проведения первой стадии узнавания , которая является определяющей для всего анализа. Если на первой стадии антиген или антитело используют в иммобилизованном состоянии, а следовательно, формирование специфического иммунокомплекса проходит на твердой фазе, то метод относится к твердофазным (англ. solid phase assay). Если же на первой стадии анализа образование специфических иммунных комплексов происходит в растворе, а лишь затем для целей разделения используют твердую фазу с иммобилизованным реагентом, то такие методы целесообразно классифицировать как гомогенно-гетерогенные. [c.82]

ИФА, основанный на использовании в качестве метки электронного медиатора. На примере определения тироксина предложен гомогенный метод, основанный на способности иммуно симически активного конъюгата тироксина с производным ферроцена функционировать в качестве медиатора электронного переноса между оксидоредуктазным ферментом и электродом. При связывании с антителами против тироксина конъюгат утрачивает медиаторные свойства. Для проведения анализа инкубируют анализируемую [c.121]

Недостатки гомогенного метода ЛИКА — это недостатки, присущие любому гомогенному варианту иммуноанализа. К ним следует прежде всего отнести влияние на результат анализа эндогенных примесей в образце и в самих реагентах. Использование АТР и NAD в качестве маркера требует удаления примесей этих кофакторов из препаратов антител (иммунных сывороток) и из образца. Для удаления АТР может быть использована обработка образца биологической жидкости раствором NalO в течение 10—15 мин, [c.128]

При данных условиях с колонки элюируется несколько фракций антител (рис. 29) с разными значениями констант связывания инсулина (численные значения констант определены гомогенным методом биолюминесцентного иммуно-кофакторного анализа с использованием инсулина, меченного АТР). Значениям pH элюции 3,8 3.3 2,5 2,2 2 соответствовали фракции с константами связывания 10- 3-10- 8-10- 3-10- > М, [c.221]

В настоящее время 30% всех иммуноанализов в США включают применение изотопных меток. Остальные 70% выполняются в основном с помощью методов, в которых роль меток выполняют флуорофоры или ферменты. Применение нефелометрии ограничено анализом иммунных белков. Инфекционные заболевания в основном диагностируют с помощью гетерогенных методов с применением ферментных меток и бусин в качестве носителей, хотя 30% анализов выполняются с помощью более дешевых методик типа РИА. Контроль лекарственных препаратов осуществляют с помощью гомогенных методик, включающих применение ферментных меток или регистрацию поляризации флуоресценции. В случае анализа гормонов имеется большой выбор как гомогенных, так и гетерогенных методик с радиоактивными, ферментными и флуоресцентными метками. Доля неизотопных методов составляет 65% и имеет тенденцию к росту. Альтернативные методы йммуноана-лиза часто используются внутри определенной диагностической группы, например в анализах на тиреоидный статус. В США наиболее важным фактором является стоимость анализа, а различные технические аспекты обычно имеют второстепенное значение. В частности, 50% инструментального парка, используемого в иммуноанализе, работает с промышленно выпускаемыми реагентами. [c.19]

Гомогенный анализ (homogeneous assay) - аналитическая система, в которой для количественной оценки иммунной реакции реагенты и системе не разделяют. [c.259]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология