Иммунный анализ

Другим перспективным направлением в разработке амперометрических биосенсоров является создание устройств, основанных на иммунологических реакциях. Принцип иммунного анализа заключается во взаимодействии исследуемого вещества, называемого антигеном (АГ), со специфически связывающимся с ним антителом (АТ) с образованием комплекса АГ -АТ. При фиксированной концентрации антитела (антигена) равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена (антитела) зависит от его общей концентрации. Таким образом, неизвестную концентрацию антигена (антитела) можно определить при помощи фиксированного количества меченых антител (антигенов). Для этого антиген или антитело метят ферментами. Разработанные к настоящему времени иммуноферментные амперометрические датчики можно классифицировать следующим образом [c.506]

Рис. 7.8-3. Типы иммуносенсоров, а — Moдифициpoвaiшaя антителами поверхность преобразователя б — конкурентный иммунный анализ, [ ] ос l/[Ag] в — сандвичевый иммунный анализ, [ ] ос [Ag] г—гомогенный иммунный анализ, [ ] ос l/[Ag].

Конкурентный иммунный анализ включает конкуренцию между определяемым веществом пробы и меченым определяемым веществом за ограниченное число активных центров. [c.569]

ИММУННЫЙ АНАЛИЗ Цели изучения [c.565]

Внешний иммунный анализ с меткой [c.551]

Понять различные варианты иммунного анализа. [c.565]

Количество 6-МАМ выше в тканях с меньшей гидролитической активностью (мозг, селезёнка, СМЖ), чем в тканях с высокой гидролитической активностью (печень, легкие, почки). Содержание 6-МАМ в стекловидном теле в 41 образце да 223 положительных по иммунному анализу от 10 до 125 нг/мл 31]. Помимо 5-МАМ, в стекловидном теле определены кодеин и морфин в различных соотношениях. [c.32]

Ознакомиться с тем. как можно проводить иммунный анализ с использованием меток. [c.565]

Иммунный анализ основан на измерении доли занятых активных центров. [c.569]

Хотя конкурентный вариант иммунного анализа имеет свои преимущества и очень популярен, он имеет и практические ограничения. Очевидным недостатком является то, что маркирование определяемого вещества Ag может изменить или даже полностью устранить способность связываться с АЬ вторая опасность особенно существенна, если маркирование включает в связы- [c.571]

В Сандвичевом иммунном анализе определяемое вещество из пробы захватывается избытком антител, а количество захваченного определяемого вещества оценивают с помощью второго антитела, образующего, таким образом, сандвич. [c.572]

В последнем разделе были очерчены основные теоретические принципы, но можно разработать почти неограниченное число вариантов связывания активных центров последовательностей и сандвичей, которые в конечном итоге достигают одной цели, а именно оценки концентрации определяемого вещества Общими чертами классических методов иммунного анализа является то, что они определяют содержание не напрямую, а с помощью меченого аналога определяемого вещества или меченой системы распознавания определяемого вещества. Они также требуют разделения сигналов от свободного и связанного меченого маркера это требование является первостепенным в иммунном анализе. [c.574]

Эта разработка положила начало развитию твердофазного иммунного анализа, в котором, однако, возникают дополнительные трудности, особенно в аспекте термодинамики взаимодействий. Твердофазный анализ отличается от анализа в жидкой фазе как по реакционной способности иммобилизованного антитела или антигена, так и по различию кинетики реакций в растворе и реакций, включающих твердую фазу (см. также разд. 7.8). [c.574]

Поверхностная иммобилизация может вызывать изменение конфигурации белка и в связи с этим изменение кинетики иммунного анализа. [c.574]

В твердофазном иммунном анализе твердая фаза играет роль несущей подложки . Ее, однако, нельзя рассматривать как пассивный компонент. Можно использовать и химическую, и физическую адсорбцию антитела или антигена, хотя большинство иммунных определений основано на физической, нековалентной адсорбции. Как обсуждалось в разд. 7.8, даже физическая адсорбция представляет собой недостаточно изученный процесс. Связывание белков, по-видимому, имеет гидрофобную природу, и все же в естественной конфигурации белков в водном растворе гидрофильные группы стремятся расположиться на поверхности, а гидрофобные группы — внутри полимера. Следовательно, связывание с гидрофобными поверхностями неизбежно вызывает изменение кон- [c.574]

Трудность разработки теоретической модели твердофазного иммунного анализа состоит также в том, что ряд основных допущений и понятий не полностью применимы. В большинстве твердофазных определений константа скорости прямой реакции между частицами в растворе и иммобилизованной распознающей фазой ограничена диффузией, а не константой сродства, относящейся к акту распознавания. Первостепенное влияние оказывают вязкость анализируемого раствора и относительное распределение активных центров, но также влияет и степень упорядочения частиц раствора при приближении к поверхности. [c.575]

Если общая концентрация каннабиноидов в моче менее 50 нг/мл (по данным иммунного анализа), то, возможно, это связано с употреблением дозы ранее чем период 36 ч, или быть следствием долговременной экскрешн, свойственной хроническим потребителям. Если при последовательных еженедельных анализах первая проба была положительной, а вторая и третья отрицательные, то это может быть вызвано случайным или разовым потреблением средства. [c.132]

Иммунный анализ может быть гомогенным, т.е. проводиться в жидкой фазе, или гетерогенным, когда один из реагентов присоединен к твердой фазе. [c.577]

Наиболее широко в качестве радиоактивных меток для иммунного анализа используют и Н. [c.581]

В конкурентном иммунном анализе устанавливают число центров, не занятых пробой он может иметь различные варианты, но суть в том, что определяемое вещество пробы смешивают с меченым определяемым веществом, и они конкурируют за активные центры (рис. 7.9-4). Метсд требует разделения связанного и свободного антигена или антитела с целью определения их относительных количеств. Если определяют антиген, присутствие меченого антигена позволяет оценить относительное разделение. Как можно заключить из кривых иа рис. 7.9-3, оптимальная чувствительность достигается при уменьшении концентраций меченого антигена и антитела. [c.569]

Рассеяние света на частицах даст информацию о размерах частицы или агрегата. которую можно использовать для проведения иммунного анализа. [c.584]

Положительная проба мочи по данным иммунного анализа указывает на потребление марихуаиы (или продуктов ее переработки) в течеиие периода от 1 ч вплоть до нескольких недельот момента отбора пробы. [c.132]

Бели определяемое веидаство является антигеном, оно может быть определено с помощью иммунного анализа (см, разд. 7.9), Для проведения такого анализа обычно используют метку, и выбор преобразователя зависит от природы [c.519]

Схема 7.в-11. Пути реакций согласно связанноь с редокс-ферментом ампе-рометрическощг измерению с помощью редокс-медиатора, для конкурентного иммунного анализа с использованием антигена, меченного ферроценом. [c.539]

В иммунном анализе определяемое вещество не связано с продуктом каталитической реакции, а является меткой, маркирующей наличие комплексного или свободного антигена илн антитела. Основы иммунного анализа обсуждаются в разд. 7.9. Так же, как в ферментативных тест-наборах (например, для определения глюкозы), на основе иммунного анализа создано большое число тест-наборов например, в тесте на беременность — хотя здесь результат рассчитан на наблюдение пользователя за развитием о1фаски и не контролируется автоматически (т. е. детектором служит человеческий глаз ). На такой тест-полоске [c.551]

Устройство ввода на основе решетки позволяет завести свет в световод. Решетка —это периодическая структура (например, треугольная, пилообразная, синусоидальная) (рис. 7.8-21), которая нанесена на поверхность световода. Когда свет падает на решетку он возбуждает в световоде проходящую моду в зависимости от периода решетки. Чтобы усилить эффект изменения показателя преломления на границе раздела, изменения, происходящие на поверхности решетки, надо перенести на световод. Например, на рис. 7.8-21 свет, падающий вблизи устройств ввода, будет возбуждать проходящие моды, зависящие от показателя преломления окружающей среды. В этом варианте поверхность становится чувствительной к тонким изменениям показателя преломления. Этот вариант, следовательно, подходит для проведения безметочного иммунного анализа, поскольку связывание между иммобилизованным антителом и антителом пробы дает большую плотность этих молекул на расстоянии порядка длины волны вглубь от поверхности (заметьте, что глубина проникновения света составляет величину порядка длины волны, уравнение 7.8-34) и, таким образом, приводит к изменению показателя преломления. Например, конкурентный иммунный анализ можно применить для определения пестицидов, при этом на модифицированной аминосиланом поверхности устройства связи ковалентно иммобилизован триазиновый гаптен, а связывание антитела детектируют за счет измерения угла несвязывания [7.8-53, 7.8-54]. Чтобы детектировать присутствие триазиновых пестицидов, пробу следует предварительно выдержать с антителами, а затем — перенести к иммобилизованному гаптену. Очевидно, чтобы обеспечить невмешательство пользователя в эту процедуру анализа, в устройстве должен быть предусмотрен этап выдержки. [c.559]

При разработке иммунного анализа целью является проследить за равновесием между антителом и антигеном. При анализе исследуют связывание антигена с антителом и различают связанный и несвязанный антиген. Поскольку процесс имеет равновесный характер (уравнение 7.9-1), линейной зависимости от концентрации антигена нет. Следовательно, важно знать характеристический отклик связьгеания как функцию концентрации антигена. [c.567]

Из кривых на рис. 7.9-5 очевидно, что изменение сигнала в результате [AAg ] является функцией концентрации антитела, используемой в анализе (рис. 7.9-5,б), и что уровень антител, даюищй максимальную чувствительность, зависит от концентраций меченого и определяемого антигена. Традиционно системы иммунного анализа имеют тенденцию давать погрешность при высокой концентрадии реагента со степенями связывания 0,4-0,5. Действительно, из рис. 7.9-3,а и б, видно, что связывание в этой области (0,4-0,5) слишком велико, чтобы привести к большому изменению степени связывания антигена при низкой концентрации последнего. Однако нельзя игнорировать сигнал, относящийся к неспецифическому связыванию, поэтому чувствительностью поступаются в пользу более низких помех за счет неспецифического связывания при более высоких концентрациях антител. [c.571]

Пожалуй, наиболее удобной пов хностью для иммобилизации в рутинном иммунном анализе являются полистирольные микротитрующие пластины, трубки и каналы. Однако эффективность их использования в значительной мере зависит от воспроизводимости взаимодействия. Для увеличения емюэсти связывания и улучшения воспроизводимости разработаны способы облучения, и химической обработки поверхностей, за счет чего матрицы микротитрующих каналов массового производства улучшили воспроизводимость <вдентичных [c.580]

Принципы работы с этими оптическими метками во многом те же, что и с радиоактивными метками, за исключением того, что метод детектщ)Ования включает спектрофотометрическое измерение. Однако большинство прямых методов с колориметрической меткой, когда длины волн возбуждения и детектирования совпадают, редко достигают высокой чувствительшсти в иммунном анализе. Но можно получить улучшение на порядок величины, разделив эти длины волн. Существует дна основных класса меток, пригодных для этого флуорофоры и хемилюминесцеитиьш реагенты. [c.585]

Непрерывно разрабатываются новые флуоресцентньш зонды, чтобы покрыть все более широкий спектр и приспособиться к потребностям специфических длин волн. В табл. 7.9-3 суммированы некоторые из них. Весьма чувствительными флуорофорами ивляются гидроксильные производные кум фи-на (умбеллифероны), которые открывают широкие возможности для получения различных флуоресцентных свойств. Многие из производных этого ароматического фенола, такие, как фосфаты, гликозиды и др., не флуоресцируют, ио флуоресцирующие частицы могут быть получены при их гцлролизе это свойство также можно испольэовать в иммунном анализе с меткой, как уже обсуждалось ранее. [c.588]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология