Препаративные электрофорез и хроматография на бумаге

Для. препаративного использования разделения, сочетающего достоинства хроматографии и электрофореза на бумаге, удобен метод непрерывного электрофореза на бумаге Он является [c.563]

Для разделения пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов в лабораторной практике используют все виды хроматографии хроматографию на бумаге (включая электрофорез на бумаге и фингерпринт ), тонкослойную хроматографию [16], все типы колоночной хроматографии (адсорбционную, распределительную, ионообменную и гель-проникающую). Считают, что при разделении методом тонкослойной хроматографии оптимальное количество нуклеотидов составляет 0,2—30 мкг методом хроматографии на бумаге 10—200 мгк методом электрофореза на бумаге 100—500 мкг. На колонке можно делить нуклеотиды в количестве от 50 мкг до нескольких сотен миллиграммов. Конечно, в отдельных случаях аналитического или препаративного разделения эти рамки можно существенно раздвинуть. [c.37]

Среди методов, используемых для аналитического и препаративного разделения пуринов, следует отметить бумажную, колоночную (иногда на субстратах, пропитанных солями меди и серебра), газожидкостную, ионообменную, тонкослойную и высокоэффективную жидкостную хроматографию, а также электрофорез на бумаге и гель-фильтрацию на сефадексе G-10. [c.595]

Высокой разрешающей способностью обладает также комбинированный метод двумерного разделения веществ, представляющий собой сочетание бумажной хроматографии в одном направлении и электрофореза на бумаге — в другом. Для препаративного разделения веществ можно использовать непре- [c.29]

Препаративные электрофорез и хроматография на бумаге [c.361]

При одновременном проведении хроматограмм и электрофореза повышается во многих случаях степень разделения близких по свойствам веществ. Для препаративного разделения смеси веществ удобен метод непрерывного электрофореза. Этот метод сочетает достоинства двумерной хроматографии и электрофореза. Анализируемую смесь наносят на полосу бумаги на нижний ее конец и погружают в резервуар с раствором электролита так, что зона компонентов перемещается по бумаге снизу вверх. Под прямым углом, поперек полосы бумаги, подводят постоянный ток. Зоны достигают верхнего края бумажной полосы в различных точках, что объясняется, с одной стороны, неодинаковым распределением компонентов между двумя жидкими фазами, с другой, — различной миграцией в электрическом поле (рис. 33, а). [c.87]

При одновременном проведении хроматографирования и электрофореза во многих случаях повышается степень разделения близких по свойствам веществ. Для препаративного разделения смеси веществ удобен метод непрерывного электрофореза. Этот метод сочетает достоинства двумерной хроматографии и электрофореза. Анализируемую смесь наносят на нижний конец полосы бумаги и погружают его в резервуар с раствором электролита, так что зоны компонентов перемещаются по бумаге снизу вверх. Под прямым углом поперек полосы бумаги подводят постоянный ток. [c.111]

Период с 1944 по 1954 г. был ознаменован развитием аналитических методов, современной техники разделения веществ, а также выяснением строения белков. Базой для дальнейшего развития и усовершенствования методики синтеза пептидов явилось введение в практику исследовательской работы хроматографии на бумаге, препаративной колоночной хроматографии, значительно более широкое применение электрофореза и противоточ-ного распределения и, наконец, выяснение структуры оксито-цина В. дю Винье и Г. Таппи и установление строения инсулина Ф. Сэнджером. После того как был успешно завершен синтез окситоцина, основные усилия исследователей были направлены на получение других биологически активных полипептидов. Это характерно для химии пептидов и на сегодняшний день. В течение всего лишь нескольких лет некоторые биологически активные полипептиды были синтезированы в таких количествах, что стало возможным проводить их фармакологическое и медицинское изучение. Эти соединения в настоящее время начинают находить терапевтическое при.менение. Синтез аналогов этих пептидов сыграл важную роль в понимании связи между строением и действием биологически активных полипептидов. [c.8]

Параллельно с исследованиями Эллиотта были проведены работы по выделению и очистке брадикинина, образующегося из бычьей плазмы при действии змеиного яда. С этой целью Прадо и сотр. [1764], а также Андраде и сотр. [54] использовали хроматографию на колонке с окисью алюминия и целлюлозой, а Андраде и Роша э Сильва [55] — ионообменную хроматографию на колонке с амберлитом ЩС-50 (ХЕ-64). Наибольшего успеха достигли Хамберг и сотр. [921, 926, 927], применявшие хроматографию на колонке с амберлитом ШС-50 (pH 5), препаративный электрофорез и хроматографию на бумаге. Аминокислотный анализ выделенного таким образом чистого полипептида показал, что последний содержит те же аминокислоты и в таких же соотношениях, что и трипсиновый брадикинин. Тщательное сравнение фармакологических свойств показало, что оба брадикинина, образующиеся при гидролизе белков как змеиным ядом, так и трипсином, идентичны синтетическому бради-кинину. Сообщение о выделении брадикинина из продуктов инкубации бычьей плазмы со змеиным ядом было опубликовано также Зубером и Жаком [2680]. [c.106]

Наряду с хроматографией на бумаге и аминокист лотным анализом чистоту пептидов можно легко проверить с помощью электрофореза на бумаге. Этот метод особенно удобен в случае пептидов, имеющих в своем составе аминокислотные остатки, несущие заряд. Можно также проводить препаративный электро- [c.140]

С ПОМОЩЬЮ электрофореза на бумаге после препаративной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, однако, возможно, это вызвано тем, что исходный Д1атериал разрушается во время осаждения хлорной кислотой. [c.72]

Тонкослойная хроматография (ТСХ английское TL ) и предшествовавший ей метод хродгатографии на бумаге до середины 70-х годов занимали центральное место в исследованиях структуры белков и нуклеиновых кислот. В последнее десятилетие эти методы были явно оттеснены электрофорезом и высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографией при высоком давлении. Оба метода превосходят ТСХ но разрешающей способности, а второй из них — и по скорости анализа. Кроме того, в результате ЖХВД экспериментатор получает уже разделенные жидкие фракции исходного препарата, в то время как после ТСХ ему надо еш,е локализовать пятна на пластинке, а в случае необходимости дальнейшего анализа — выполнить длительные операции элюции из них веш,ества. Точное и проводимое в ходе самого фракционирования определение микроколичеств вещества во фракциях прп ЖХВД, которое позволяют осуществить высокочувствительные детекторы и интегрирующие устройства современных жидкостных хроматографов, оставляет далеко позади соответствующие возможности ТСХ — ввиду плохой воспроизводимости процессов элюции из пятен и высокого уровня фона или самопоглощения в слое носителя при использовании оптических, флюоресцентных и радиоактивных методов оценки количества вещества в пятнах на пластинке без его элюции. Наконец, в препаративном варианте фракционирования количественные возможности ТСХ на несколько порядков меньше, чем у обычной колоночной хроматографии и даже у электрофореза. [c.457]

Если электрофорез и хроматографию на бумаге можно отнести к микропрепаративным методам, то метод разделения смеси пептидов с помощью ионообменной хроматографии следует, пожалуй, считать макропрепаративным. Его главное преимущество заключается в том, что он позволяет обрабатывать большие количества материала и получать несомненно большие выходы фракций. Применение при ионообменной хроматографии летучих буферов дает возможность избежать трудоемкой процедуры обессоливания, которая осложняла ранее предложенные методики [49, 92]. Большим достижением в области ионообменной хроматографии является введение сферических смол. Их применение способствует увеличению скорости потока фракционируемых веществ через колонку и значительно сокращает продолжительность препаративного разделения. Сферические смолы в автоматических аминокислотных анализаторах обеспечивают воспроизводимую сравнительную хроматографию пептидов с высокой разрешающей способностью, т. е. позволяют автоматически проводить анализ методом отпечатков пальцев . [c.38]

Хроматография и электрофорез являются важными и удобными методами разделения смеси веществ с целью анализа и препаративной их очистки. Исключительное значение в контроле производства промежуточных продуктов и красителей приобрела жидкостная распределительная хроматография на бумаге, в колонках и в тонком слое на различных носителях (адсорбентах). [c.275]

Метод пептидных карт на одном листе бумаги сейчас следует рассматривать скорее как аналитический, чем как препаративный. При препаративном разделении пептидов в тех же условиях обычно смесь пептидов последовательно разделяется методами электрофореза и хроматографии в несколько приемов, каждый раз нанося пробу во всю ширину бумаги. После проведения электрофореза вырезают полосы бумаги таким образом, чтобы в середине и по трем краям оставались узкие полоски бумаги. После проявления этих полосок нингидрином вырезанные полосы вставляются обратно, и на них карандашом отмечаются пептидные зоны. Пептиды соответствующих зон с нескольких листов бумаги после смывания объединяются и хроматографируются опять же на полном листе (каждая объединенная зона отдельно). Подобные трудоемкие операции связаны с необходимостью иметь достаточное количество вещества для дальнейшего анализа. Повышение чувствительности методов анализа концевых групп даст возможность определять всю аминокислотную последовательность пептида после получения пептидной карты на одном листе бумаги. Для анализа К-концевых аминокислот уже разработан [8] флуоресцентный метод с 1-диметиламинонафталин-5-сульфонилхлЬри-дом, который в сто раз чувствительнее (достаточно 10 — 10" мкмоль пептида) обычно используемого метода с динитро-фторбензолом [9]. [c.237]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология