Культура клеточных суспензий

Существует также суспензионная культура клеток, которую выращивают в жидкой питательной среде, так называемое глубинное культивирование. Клеточные суспензии образуются как из каллусных тканей, так и непосредственно из экспланта. Для получения суспензионных культур предпочтительнее брать каллусы рыхлого типа. Если для этой цели необходимо использовать плотный каллус, то его можно разрыхлить, исключив из питательной среды соли Са " . С этой же целью можно культивировать ткань на среде, содержащей ауксин 2,4-В или ферменты — пектиназу (0,2 мг/л) и [c.166]

Вьщеление нерастворимых фибриллярных белков не сопряжено с особыми трудностями, в то же время очистка индивидуальных глобулярных белков из животных или растительных тканей, бактериальных культур и клеточных суспензий сильно затруднена одновременным присутствием в растворе многих других белков, углеводов, нуклеиновых кислот, липидов и других [c.345]

КУЛЬТУРА КЛЕТОЧНЫХ СУСПЕНЗИЙ [c.93]

Как получают и используют культуру клеточных суспензий [c.159]

Другие условия формирования ЦРК связаны с автолизом клеточных суспензий, типичным для стареющих микробных культур. В силу генетически детерминированной гетерогенности микробных популяций клетки культуры обладают различной чувствительностью к действию как факторов d , так и факторов d2, индуцирующих автолиз. При этом из автолизирующихся клеток одной части популяции (чувствительных к индукции автолиза) высвобождаются внутриклеточные факторы dj, что повышает их общий концентрационный уровень в среде. По достижении определенного концентрационного порога факторы di индуцируют формирование ЦРК клетками другой части популяции, устойчивыми к автолизу. [c.98]

Нередко, однако, и в экспоненциальной фазе роста клетки периодической культуры претерпевают изменения, так как постепенно изменяется среда уменьшается концентрация субстрата, увеличивается плотность клеточной суспензии и накапливаются продукты обмена. В связи [c.196]

V э т а п (1940—1960 гг.). С открытием в 1955 г. нового класса фито-гормонов-цитокининов, и в частности кинетина, была получена возможность стимулировать деление клеток кусочка ткани сердцевинной паренхимы табака, лишенной проводящих пучков и камбия. В зависимости от концентрации и соотношения стимуляторов роста можно было усиливать деление клеток экспланта, поддерживать рост каллусной ткани, индуцировать морфогенез. В этот период было оценено положительное действие натуральных экстрактов типа эндосперма кокосового ореха, каштана, кукурузы и других растений для поддержания неорганизованного клеточного роста и стимуляции процессов морфогенеза в культуре каллусных тканей и клеточных суспензий. [c.79]

Центрифугируют клеточную суспензию или культуру. [c.110]

Суспензию клеток можно получить из каллуса, поместив его в жидкую питательную среду с автоматическим перемешиванием. Используя фермент, например пектиназу, получаем суспензионную культуру непосредственно из ткани экспланта (лист, стебель, корень и т. д.). Вначале на поверхности экспланта образуется каллусная ткань, а затем уже от нее отделяются клетки и клеточные агрегаты, в результате чего получается клеточная суспензия. [c.93]

Эффективным методом концентрирования клеточной суспензии, лишенным указанных недостатков, является ее флокуляция полиэлектролитами. Этот метод позволяет также добиться максимального разделения фаз биологической системы при минимальной инактивации и введения малого количества примесей, что весьма важно при концентрировании или осаждении бактериальных или вирусных культур. [c.156]

Для изучения метаболических процессов на протяжении цикла клеточного деления нужны такие суспензии, в которых клетки делились бы одновременно (синхронно). Чтобы достичь такого совпадения фаз цикла у разных клеток, прибегают к синхронизации культуры. Синхронизировать деление в какой-либо популяции клеток можно с помощью различных искусственных приемов, таких как изменение температуры, воздействие света, ограничение количества питательных веществ или пропускание микроорганизмов через специальный фильтр с целью получить клетки одного размера. Клеточная суспензия, синхронизированная той или иной обработкой, после нескольких одновременных делений постепенно переходит снова к асинхронному делению, так что число клеток увеличивается в дальнейшем уже не ступенчато, а непрерывно. [c.203]

При использовании суспензионных культур в качестве продуцентов вторичных веществ применяют закрытые или открытые системы ферментов в периодическом или проточном режимах выращивания клеток. В закрытой системе клеточная суспензия лишена притока свежей питательной среды до конца выращивания, а в случае непрерывного режима выращивания в открытой системе питательная среда меняется на свежую. Как при периодическом, так и при проточном режимах выращивания в открытой системе клетки остаются в питательной среде и не удаляются даже при ее замене. Однако в открытых системах культивирования при [c.93]

Выделяют одиночные клетки из клеточных суспензий, из тканей растений, например, из мезофилла листа после его мацерации ферментами, из культуры изолированных протопластов после восстановления клеточной стенки. [c.95]

Основополагающие эксперименты, проведенные в 1907 году, включали использование небольших фрагментов ткани или эксплантатов. В наше время культуры обычно готовят из клеточной суспензии, полученной путем диссоциации ткани. Большинство клеток, образующих ткани многоклеточных организмов, в отличие от бактериальных клеток не способны расти в суспензии. Для роста и деления им необходима твердая поверхность. Вначале, когда метод культивирования только появился, в качестве механической опоры использовали сгусток плазмы, но в настоящее время его обычно заменяют поверхностью пластиковой культуральной чашки фис. 4-39). Клетки очень различаются по своим потребностям некоторые из них способны расти или дифференцироваться только в том случае, если культуральная чашка покрыта компонентами внеклеточного матрикса, например коллагеном. [c.203]

После отмывания клетки центрифугируют для получения достаточно плотного осадка. Режим центрифугирования зависит от конкретной культуры. В опытах с рядом клеточных суспензий получают кривую формирования осадка (вроде изображенной на рис. 19.1), откладывая вес осадка против времени центрифугирования. [c.443]

Препараты хромосом можно приготовить из всех тканей и клеточных суспензий, содержащих делящиеся клетки. У человека в больщинстве случаев используют препараты из клеток костного мозга, кратковременной культуры крови или из длительной культуры фибробластов. Паи- [c.42]

В суспензии, однако, клетки могут поддерживать экспоненциальный рост в течение долгого периода и теоретически бесконечно, если их культивировать в хемостате, где увеличение поступления питательных веществ балансируется увеличением оттока клеточной суспензии это приводит к постоянству окружающих условий и числа клеток. На практике, однако, это трудно достигнуть из-за возможности бактериального заражения. Клетки в суспензии растут обычно в непроточных культурах, которые характеризуются примерно такой же кинетикой роста, как и клетки в монослое. [c.59]

Клеточную суспензию получают, помещая каллусную ткань в колбу с жидкой питательной средой. Эта суспензия перемешивается в колбах на качалке или в специальных сосудах с помощью роллеров разного типа. Для инициации суспензионной культуры необходимо 2—3 г свежей массы каллусной ткани на 60—100 мл жидкой питательной среды. Первичную суспензию получают на круговой качалке, имеющей скорость перемешивания 100— 120 об/мин. [c.22]

Однако при соблюдении всех этих условий процент разделившихся клеток остается очень низким. Более эффективны методы кормящего слоя (рис. 10) или ткани-няньки . Для создания кормящего слоя берут суспензию клеток того же вида растения, что и одиночная клетка, или близкого вида. Клеточная суспензия должна находиться в ранней экспоненциальной фазе ростового цикла. Каллусная культура, служащая тканью-нянькой , также должна быть в состоянии активного роста. При достижении колонией, возникшей из отдельной клетки, 0,5—1 мм клон может быть перенесен для дальнейшего выращивания на агаризованную питательную среду непосредственно или на фильтр, помещенный на поверхность агара. Использование кормящего слоя , ткани-няньки и минимального объема среды, в которую помещается отдельная клетка, связаны с феноменом, называемым действие фактора кондиционирования . Несмотря на многочисленные попытки определить химическую природу веществ (или вещества), индуцирующих, деление отдельной клетки, и механизм действия фактора кондиционирования, ясности здесь пока нет. Пожалуй, уверенно можно сказать только то, что фактор этот химической, а не физической природы и включает низкомолекулярные вещества (М. К- Павлова, Р. Г. Бутенко, 1965). [c.29]

Использование фидерных культур и переносных дисков , чтобы обеспечить совместное культивирование при низких плотностях клеток и создать твердую подложку колониям, которую легко можно переносить с одной среды на другую, не нарушая расположение колоний [41]. Эта технология используется при трансформации клеточных суспензий (разд. 2.10). [c.159]

Клеточные суспензии играют значительную роль в биотехнологии. Они могут бьггь использованы для получения изолированных протопластов, которые применяют для клеточной селекции, при введении чужеродных ДНК и других процессах. Клеточные суспензии культивируют в больших количествах для получения вторичных метаболитов, выявления новых веществ, для выращивания клеточной биомассы. Однако увеличение клеточной биомассы в результате деления клеток и синтез вторичных метаболитов разобщены во времени. Поэтому необходимо хорошо знать физиологию, свойства клеток в суспензионных культурах, чтобы получить максимальный выход продукта. Состояние клеточных суспензий характеризуется плотностью клеточной популяции. За 14—16 дней (средняя длительность пассажа) плотность обычно повышается от 5- Ю до 5-10 кл/мл. Качество суспензии определяется степенью агреги-рованности. Агрегаты должны содержать не более 10 — 12 клеток. [c.167]

Одним из вариантов PH является цветная проба (колориметрическая реакция нейтрализации). При положительном результате противовирусные антитела блокируют размножение вируса в культуре клеток, и под действием кислых метаболитов последних в среде меняется цвет индикатора. В пробирки вносят по 0,25 мл рабочего разведения вируса (100—1000 ЦПД50) и соответствующего разведения сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30 — 60 мин, добавляют в каждую пробирку по 0,25 мл клеточной суспензии и закрывают их резиновыми пробками или заливают стерильным вазелиновым маслом. Пробирки помещают в термостат на 6 —8 дней при 37 С. Результаты реакции учитывают колориметрически pH 7,4 и выше указывает на репродукцию вируса, 7,2 и ниже — на нейтрализацию вируса антителами. [c.271]

Исходные клеточные суспензии обычно получают из рыхлых, оводненных каллусных тканей (2—3 г на 60—100 мл питательной среды), подвергнутых обработке пектиназой и полигалактурона-зой, и помещаемых в жидкую питательную среду, лишенную ионов кальция, но содержащую ауксин — 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту. Условия выращивания поддерживают либо в периодическом, либо в непрерывном режиме, специально подобранном для конкретного биообъекта. В других случаях источниками суспензионных культур могут быть протопласты с реконструированными клеточными стенками. Стимулировать деления отдельных клеток изолированных протопластов можно с помощью обогащенных [c.508]

Флокулянты серий ВА и ВПК реагируют с гумусовыми веществами с образованием нерастворимых в воде комплексов, адсорбируются на отрицательно заряженных частицах коллоидных загрязнений воды, связывая их в крупные хлопья. Эти реагенты хорошо поглощаются также дисперсными частицами углей, оксидов, бактериальных культур и других, вызывая их агрегацию. Часто при этом с помощью ВПК удается сфлокулировать мелкие частицы, которые не агрегируют в присутствии высокомолекулярных неионных или анионных полимеров. Флокулянты ВПК с успехом могут быть использованы для очистки оборотных вод углеобогащения, концентрирования клеточных суспензий, для очистки сточных вод нефтеперерабатывающих фабрик и т. д. [c.128]

Все кинетические теории фотосинтеза сходятся в том, что низшая, приблизительно линейная часть световой кривой соответствует столь медленному первичному фотохимическому процессу, что нефотохимические— подготовительные и завершающие—реакции могут без задержки снабдить процесс исходными соединениями и переработать образуемые при фотореакции продукты. Может поэтому показаться, что максимальный квантовый выход, подсчитанный по предельному наклону световой кривой, должен быть равен числу квантов, действительно потребных для фотосинтеза (если пренебречь практически ничтожной частью, теряемой в виде флуоресценции). Экспериментально определяемая величина квантового выхода часто оказывается значительно ниже 0,1, и этот факт свидетельствует, что во многих случаях фотосинтетический аппарат или его часть находятся в недейственном состоянии, что ведет к потере большей части поглощенных световых квантов. В частности, в старых клеточных суспензиях максимальный квантовый выход может быть гораздо ниже, чем у здоровых молодых клеток (см. фиг. 183). Причины этого неактивного состояния до сих пор неизвестны и могут быть связаны с недостатком питания или недостатком энзиматических систем (вспомним, например, опыты Ван-Хилле по оживлению фотосинтеза постаревших культур Ohlorella) или с [c.576]

В литературе в качестве синонимов процесса агрегации микроорганизмов встречается ряд терминов флокуляция, агглютинация, коагуляция, ассоциация, агломерация и другие. Такое терминологическое разнообразие связано с многообразием процессов контактного взаимодействия клеток, рассмотрение которых выходит за рамки книги. Отметим, что под флокуляцией обычно понимают процесс потери агрегативной и седиментационной устойчивости суспензий, в том числе суспензий клеток микроорганизмов, под влиянием добавленных высокомолекулярных соединений (флокулянтов), либо под действием образующихся в процессе роста культуры биополимеров. В последнем случае говорят о биофлокулянтах, подчеркивая решающую роль биополимеров (био-флокулянтов) в процессе дестабилизации клеточной суспензии. [c.15]

Для работы с клеточными суспензиями необходимо знать их характеристики жизнеспособность, плотность клеток в суспензионной культуре, степень агрегированности, скорость роста. [c.94]

Две клетки, сливаясь, образуют гетерокарион - одну комбинированную клетку с двумя ядрами. Обычно, чтобы осуществить слияние клеток, клеточную суспензию обрабатывают инактивированными вирусами, или полиэтиленгликолем. Оба этих агента повреждают плазматическую мембрану клетки, что и приводит к слиянию клеток. Образование гетерокарионов дает возможность смешивать компоненты двух отдельных клеток с целью изучения их взаимодействия. Например, если неактивное ядро куриного эритроцита попадает в результате слияния в цитоплазму клетки, растущей в культуре ткани, то такое ядро реактивируется начинается синтез РНК, а затем и репликация ДНК. Именно в опытах по гибридизации клеток мыши и клеток человека впервые были получены данные, свидетельствующие о том, что белки поверхности клеток человека и мыши, находившиеся вначале на своих половинках гетерокариона, быстро диффундируют и перемешиваются по всей его поверхности [c.206]

К клеточной суспензии или жидкой культуре добавляют равный объем 5%-ного глутаральдегида в 0,2 М Ыа-какодилатном буфере, pH 7,4 (конечная концентрация глутаральдегида 2,5%)- В другом варианте клетки центрифугируют и суспендируют осадок в 2,5%-ном глу- [c.108]

Твердые культуры относительно свободны от мак-ромолекулярных компонентов и полностью свободны от частиц питательной среды, так как последние обычно находятся внутри агарового геля. Более того, твердые культуры относительно свободны от низкомолекулярных питательных веществ и продуктов метаболизма микроорганизмов, поскольку для их растворения необходимы значительно большие объемы среды. Следовательно, культуры, выращенные на твердой среде, особенно полезны для приготовления антигенов или для других целей, когда важна чистота клеточной суспензии. [c.363]

Бактерии культивируют в течение 18 ч при 37 °С на скошенном агаре, содержащем три ух левода и железо (разд. 20.3.34). Снимают выросшую культуру петлей с косяка и суспендируют в 0,25 мл физиологического раствора (0,85%-ный Na l) до получения густой суспензии. Добавляют каплю толуола, встряхивают суспензию и инкубируют в течение 5 мин при 37 °С. Добавляют 0,25 М Л диагностического реактива ОНФГ (разд. 20.4.13). Инкубируют в водяной бане при 37 °С и проверяют с интервалами до 24 ч. Следует также приготовить и инкубировать контрольную пробу без клеточной суспензии. Положительная реакция появление желтой окраски. [c.22]

Для некоторых целей рост клеток, прикрепленных к субстрату, оказывается предпочтительнее, но для других целей лучше использовать клеточные суспензии. Как правило, клетки, отделившиеся от субстрата, на котором они росли, неспособны к росту в суспензии и быстро дегенерируют. Было показано (Earle et al., 1954), что если L-клетки поддерживать во вращающемся флаконе при скорости его вращения 40 об/мин, то такие клетки не прикрепляются к поверхности, а добавление в культуру метилцеллюлозы (Metho el) до концентрации 0,1% предотвращает агрегацию клеток и поддерживает их жизне- [c.23]

При удалении из сосуда 10 мл клеточной суспензии в него входит 10 см воздуха. В связи с этим необходимо до минимума снижать содержание в воздухе микроорганизмов. В невен-тилируемой комнате споры бактерий и грибов быстро оседают на пол и стулья, так что в таких случаях достаточно постоянного мытья пола и стульев антисептическими растворами. Пол в рабочей комнате должен быть без щелей, и его следует ежедневно мыть дезинфицирующими растворами. Рабочую поверхность стола следует до и после работы протирать 70%-ным спиртом. Помимо всего прочего, это приводит к ликвидации попавших на стол культивируемых клеток и исключает возможность их попадания в другие культуры (разд. 2.1). [c.112]

Разработка методов иммобилизации клеток этой бактерии в полиакриламидный гель (ПААГ), в мембраны из поливинилового спирта и адсорбция ее на целлюлозе позволила повысить эффективность метода трансформации стероидов. Для иммобилизации в ПААГ культуру выращивали описанным выше способом, отделяли центрифугированием, отмывали фосфатным буфером. Система для полимеризации состояла из 10 %-ного полиакриламидного геля с 0,5 %-ным относительным содержанием сшивающего агента метиленбисакриламида и катализаторов тетраметил-этилендиамина (ТЕМЕД) и персульфата аммония. Акриламид перекристаллизовывали перед употреблением из хлороформа. В сосуд для полимеризации помещали 6 мл клеточной суспензии, содержащей 0,1—0,6 г биомассы, смесь 1,90 г акриламида с 0,10 г метиленбисакриламида в 11 мл воды, 3 капли ТЕМЕД а и 15 мг персульфата в 3 мл воды. Общий объем 20 мл. Полимеризацию мономера проводили при температуре 10—12 °С в атмосфере азота в течение 2—15 мин. Полученный блок геля механически фрагментировали, продавливая через сито 20—30 меш, промывали физиологическим раствором до исчезновения невключившихся клеток (4—5 л). Полученные гранулы помещали в термостатируемую колонку (1X28 см). Реакционная смесь, пропускаемая через колонку, содержала 0,1 г/л гидрокортизона в фосфатном буфере (pH 7,0), скорость потока через колонку 1,3 мл/ч на 1 мл геля (ЗУ), акцептор водорода — феназинметасульфатдобавляли в концентрации 0,1 г/л с момента трансформации, температура 20—22 °С. Выделение стероидов и определение активности проводили по методике, описанной выше. При таких условиях [c.545]

Экспериментальные данные, накопленные к началу 60-х годов, свидетельствовали о том, что для каждого типа замораживаемых клеток можно подобрать некоторое оптимальное значение скорости охлаждения, которое обеспечивает лучшую сохранность клеток. Зависимость показателя сохранности деконсервирован-ных клеток от скорости охлаждения в большинстве случаев имела куполообразную форму (как показано на рис. 24). В отсутствие криопротектора максимальное значение показателя сохранности для клеточных суспензий, как правило, мало. Оптимальное значение скорости охлаждения неодинаково и изменяется на три-четыре порядка для разных клеток. Так, для незащищенных эритроцитов человека оптимальная скорость охлаждения составляет около 3000°С/мин, для дрожжей — 10, для яйцеклеток мыши — 0,1, для клеток культуры ткани почки китайского хомячка — 100°С/мин. [c.56]

Фильтрование рекомендуется и в нескольких последующих субкультивированиях до приобретения клеточной суспензией желательных характеристик. Однако агрегированность суспензии зависит не только от характеристик начальной линии, но и от условий культивирования. На рис. 6 показано влияние условий перемешивания на состав и соотношение различных по агрегированности единиц, составляющих суспензионную культуру женьшеня и мака. [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология