Тимидинкиназа

Этой плазмидой трансформируют культуру дефектных по тимидинкиназе животных клеток, обычно фибробластов куриного эмбриона, предварительно инфицированных ВКО дикого типа, который синтезирует функциональную тимидинкиназу. [c.239]

Экспрессия гена тимидинкиназы вируса простого герпеса в соматических клетках мыши после инъекции рекомбинантного гена в яйцеклетки [c.428]

Глиобластома, СПИД, рак яичников Тимидинкиназа вируса простого герпеса Клетки опухоли, Т-лимфоциты [c.486]

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного из них состоит в трансформации клеток требуемым геном, соедршенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера. Примером может служить метод получения клеток, дефектных по синтезу фермента тимидинкиназы (ТК -клетки). Такие клетки трансформировались фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген фермента ТК, и после трансформации они приобретали способность к синтезу фермента на селективной среде, т.е. становились ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от клеток TK , поскольку способны расти на средах с ами-ноптерином (ингибитор, блокирующий определенные стадии биосинтеза нуклеотидов), гипоксантином и тимидином. Следовательно, в данном случае для трансформации клеток животных бьши использовапы гибриды бактериальных плазмвд с геном ТК из вируса герпеса. Для этого предварительно проводили клонирование и идентификацию генов в клетках Е. соИ и затем полученная рекомбинантная плазмида вводилась в ТК -клетки. Анализ мето- [c.125]

Представляют немаловажный интерес микроинъекции ДНК непосредственно в ядро клетки. Так, плазмиды, содержащие фрагмент вируса герпеса с геном тимидинкиназы, и плазмиды рВК322 были инъецированы в ТК-клетки, при этом ТК-ген пронрпс в ядра и нормально в них реплицировался. [c.126]

Недавно [204] составлен список из 10 желательных специфичных свойств антивирусного агента. В этом списке значатся легкость приготовления, хорошая растворимость при физиологических значениях pH, химическая и метаболическая стабильность, достаточная неполярность для преодоления проблем транспорта в клетку, отсутствие включения в ДНК неинфицированных клеток, отсутствие иммуносупрессии, отсутствие активации вирусов, отсутствие тератогенного, мутагенного или канцерогенного эффектов. 2 -Дез-окси-5-иодуридин, очевидно, не обладает некоторыми из этих свойств, а 5-фтор-, 5-этил-, и 5-циано-2 -дезоксиуридины, очевидно, способны быть антивирусными агентами. Обнадеживающие результаты были также сообщены для ряда других 5-алкил-2 -дез-оксиуридинов, включая 5-аллил-, 5-пропил- и 5-винил-2 -дезокси-уридины [206]. Полагают, что эти вещества оказывают эффект за счет ингибирования вирусспецифических тимидинкиназ. [c.125]

Сегмент ДНК, кодирующий специфичный антиген (например, HB Ag), встраивают в плазмидный вектор непосредственно после клонированного ВКО-промотора, включенного в какой-либо несущественный ген ВКО, например ген тимидинкиназы (рис. 11.9, A). [c.239]

Поскольку дефектные по тимидинкиназе ВКО спонтанно возникают с относительно высокой частотой (примерно 1 на 10 -10" вирусных частиц), нередко проводят котрансфекцию клеток каким-либо селективным маркером и нужным геном. Это облегчает разграничение спонтанных мутантов и мутантов, полученных с помощью гомологичной рекомбинации. В качестве селективного маркера обычно используют ген neo, кодирующий фермент неомицин-фос-фотрансферазу И и обеспечивающий устойчивость к аналогу канамицина G-418. Этот ген, в отличие от других селективных маркеров, остается стабильным при встраивании в геном ВКО. [c.240]

Вектор для позитивно-негативной селекции обычно содержит следующие элементы 1) два блока последовательностей (НВ1 и НВ2), гомологичных отдельным участкам сайта-мишени 2) трансген (ТО), кодирующий новую функцию реципиента 3) последовательность, кодирующую устойчивость к соединению 0-418 (КеоО 4) два разных гена тимидинкиназы 1к1 и 1к2) вируса простого герпеса типов 1 и 2 (Н8У-Г / и Н8У-/ 2) (рис. 19.5, А). Ключевым для позитивно-негативной селекции является взаимное расположение этих элементов. Трансген и ген устойчивости к 0-418 (МеоО должны находиться между двумя участками ДНК, гомологичными сайту-мишени, а гены Н8У- А / и НБУ-(к2 - по бокам этой конструкции. Если встраивание происходит в случайный сайт (не в НВ1 и НВ2), то с высокой вероятностью вместе с другими последовательностями интегрируют один или оба гена Н8У-/ (рис. 19.5, А). Напротив, если интеграция происходит в результате гомологичной рекомбинации путем двойного кроссинговера в нужный сайт, то в геном встроятся только трансген и ген N60 а гены Н5У-/Л - нет (рис. 19.5, Б). При выращивании трансфицированных клеток в присутствии 0-418 клетки, не несущие ген Neo расти не будут. Выживут только клетки, в которых произошла интеграция -иными словами, осуществляется позитивная селекция. Если одновременно с 0-418 в среду [c.422]

Впервые возможность переноса ДНК при помощи микроинъекций в пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки мыщи была проиллюстрирована Дж. Гордоном и др. В этом эксперименте в несколько сотен оплодотворенных яйцеклеток инъецировали плазмидный вектор pBR322, содержащий ген тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV) и часть генома обезьяньего вируса 40 (SV40). Из 78 потомков, рожденных приемными матерями, два содержали плазмидную ДНК. Авторы сделали вывод, что эти данные свидетельствуют о возможности использования рекомбинантных плазмид в качестве вектора для введения чужеродных генов непосредственно в эмбрионы мыщей, которые сохраняют эти гены в ходе развития . К сожалению, плаз- [c.428]

Бринстер и др. инъецировали ген тимидинкиназы HSV под контролем промотора гена метал-лотионеина-1 и обнаружили, что у одной из полученных трансгенных мышей синтезировалось больше тимидинкиназы HSV в клетках печени и почек, чем у трех других, синтезировавших этот фермент лишь в небольшом количестве. Кроме того, восемь других трансгенных животных несли ген тимидинкиназы HSV, но не синтезировали активного фермента. По данным Саузерн-блоттинга, у всех трансгенпых мышей введенная ДНК присутствовала в большом числе копий. [c.428]

Клонирование в клетках животных. Проблема клонирования в клетках животных имеет большое значение для исследования функционирования геиов высших эукариот. Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Один нз путей включает в себя кон-трансформацию клеток требуемым геном, соединенным с одним нз генов, для которых осуществляется селекция. Примером являются клетки мыши, дефектные по синтезу тимидинкиназы (ТК -клетки). Клетки трансформируются фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген тими-динкниазы, и после трансформации приобретают способность к синтезу фермента, т. е. становятся ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от ТК. поскольку они способны расти на средах с ами- [c.440]

В течение 10—14 дней дефектные клетки элиминируются. Миеломные клетки, устойчивые к бромдезоксиуридину, дефектны по тимидинкиназе (ТК ), а устойчивые к 8-азогуанину, не содержат ГГФРТ (ГГФРТ). Эти клетки не располагают обходными путями синтеза пуринов или пиримидинов, но способны синтезировать [c.575]

Одна из наиболее важных киназ — тимидинкиназа, фосфори-лирующая тимидин до дТМФ по многим признакам она является [c.186]

При изучении динамики киназ в регенерирующей печени крысы после частичной гепатоэктомии было показано [106], что ферменты, по-видимому, появляются в определенной последовательности (фиг. 62). К 24 час начинает резко увеличиваться активность тимидинкиназы, достигая максимума через 30 час после операции. Вслед за ней возрастает активность дТМФ-киназы максимум суммарного включения Н -тимидипа приходится примерно на [c.187]

Исследования влияния фенольных ингибиторов на жизненный цикл раковых клеток также показали высокую активность этих соединений 21. На примере клеточной культуры рака шейки матки Hela было установлено, что фенольные ингибиторы подавляют митотическую активность этих клеток и увеличивают количество хромосомных аберраций. Методом авторадиографии с использованием меченного тритием тимидина было показано, что причиной этих явлений является торможение адаптивного синтеза тимидинкиназы, необходимой для синтеза белковых структур раковой клетки [c.330]

Какой же механизм радиационного поражения ферментов, контролирующих синтез ДНК Ответить на этот вопрос помогли следующие наблюдения. При облучении гепатоэктомированных крыс дозой 400 р через 6 час. после операции, т. е. в период Сь последующего нарастания ферментативной активности, обычно происходящего в дальнейшем у необлученных животных, не наблюдалось. Если облучение проводили через 16 час. после гепатоэктомии, то даже такая высокая доза, как 1500 р, не влияла на дальнейший уровень ферментативной активности. Например, система тимидинкиназ и ДНК-нолимеразная активность в регенерирующей печени крысы полностью угнетались лишь в том случае, если животных облучали Через 6 час. после операции. Эти же ферменты оказывались устойчивыми к радиации, если облучение проводили на 16-м часу регенерации печени [15]. Известно, [c.123]

Далее, при исследовании in vitro включения Н -тимидина в ДНК асцитной карцинол1ы Эрлиха не удалось обнаружить угнетения синтеза ДНК после облучения [40]. В данном случае как ДНК-полимераза, так и система тимидинкиназ оказались устойчивыми к действию радиации. Выше отмечалось, что у асцитных клеток предсинтетический период G очень короткий и синтез ДНК начинается почти сразу после окончания деления. Вероятно, и в данном случае ферменты синтеза ДНК оказываются устойчивыми к радиации. [c.124]

Регуляция синтеза ДНК. Определенную роль играет фермент ти-мидинкиназа — индуцибельный фермент, индукция которого возможна только во время короткого периода интерфазы, незадолго до начала репликации ДНК. Вне этого промежутка времени фермент заблокирован. Ученые считают, что ген для тимидинкиназы имеет временную регуляцию. Это же касается и ДНК-полимеразы, которая активируется почти одновременно с тимидинкиназой. Тиминдинкиназа (тимидин -> ТМФ) — фермент, необходимый для образования ТТФ, участвует в репликации ДНК. Как участник указанного пути обмена фермент включается в регуляцию процессов ядерного и клеточного деления. [c.394]

Метод трансфекции успешно применяется для введения генов в геном животных (рис. 38.14). Плазмиды, несущие интересующий исследователей ген, вводятся в зародышевый пузырек (ядро) ооцита мыши или в пронуклеус оплодотворенного яйца. Затем это яйцо имплантируется самке. Таким образом, были введены гены глобина и гибридные гены, содержащие промотор для металлотионеина, который сцеплен с кодирующей последовательностью тимидинкиназы. Промотор МТ ведет происхождение от природного гена мыши его присутствие можно определить по способности отвечать на обычную индукцию тяжелыми металлами или глюкокор-тикоидами (ответ определяют по активности тимидинкиназы). [c.501]

Молекулярная биотехнология принципы и применение (2002) -- [ c.428 , c.486 , c.503 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.0 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.217 ]

Биохимия нуклеиновых кислот (1968) -- [ c.186 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.7 , c.21 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.27 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.200 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.27 ]

Нейрохимия (1996) -- [ c.12 ]

Генетика с основами селекции (1989) -- [ c.538 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.405 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.258 ]

Генетическая инженерия (2004) -- [ c.160 , c.300 , c.340 , c.386 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология