Гибриды бактериальны

Хозяин может отдать одну из своих собак другому, так и бактерии способны обмениваться плазмидами. Вот это свойство плазмид легко переходить из рук в руки , доставляющее столько хлопот медикам, оказалось как нельзя кстати для генных инженеров. Если плазмиды извлечь из бактерий, вставить в них чужую ДНК, а затем примешать такие гибридные плазмиды к бактериальным клеткам, то по крайней мере часть гибридов будет успешно размножаться в бактериях. Иными словами, благодаря крайней простоте своего устройства плазмиды оказались теми организмами, которые легко переносят хирургическое вмешательство — встройку в них чужеродных генов. Более сложные организмы, даже вирусы, такую операцию переносят гораздо болезненнее. [c.61]

Выведение устойчивых к болезни сортов и гибридов кукурузы. 6. Борьба с насекомыми — переносчиками возбудителя бактериального увядания. [c.54]

Особая ценность протопластов для селекции растений определяется целым рядом их свойств. Во-первых, протопласты можно получать в большом количестве и отбирать из них разновидности с полезными свойствами. Хотя сами протопласты генетически единообразны, формирующиеся из них каллусы дают растения, существенно различающиеся по внешним признакам. Во-вторых, отсутствие клеточной стенки облегчает слияние протопластов и образование гибридов. Поскольку при этом сливаются соматические, как минимум диплоидные, клетки, селекционер растений получает в свои руки мощный инструмент для отбора. В-третьих, в отсутствие клеточной стенки облегчается-захват чужеродной ДНК — фрагментов молекул или же бактериальных плазмид, в результате чего формируются растения с совершенно новым набором признаков. [c.383]

Обсуждены разные приемы клеточно-инженерной технологии на растительных, животных н бактериальных клетках. Рассмотрены проблемы модификации протопластов и соматической гибридизации клеток растений, способы получе ния гибридов и методы идентификации и выделения ассоциаций клеток высших растений с микроорганизмами. [c.4]

Кондиционированные среды. Использование клеток питающего слоя имеет ряд недостатков 1) их приготовление трудоемко и накладывает определенные ограничения по времени на приготовление гибридом 2) они представляют собой потенциальный источник бактериального загрязнения 3) они метаболизируют питательную среду, что создает необходимость часто менять ее 4) растущие клетки в питающем слое могут перерастать или убивать гибридомы 5) клетки питающего слоя препятствуют визуальной идентификации растущих колоний гибридом. [c.106]

После отмывки фильтров от несвязавшегося радиоактивного зонда их высушивают и анализируют с помощью авторадиографии с использованием чувствительной к радиоактивному излучению рентгеновской пленки. Образование специфических гибридов обнаруживают после проявления рентгеновской пленки по появлению на ней четких гибридизационных сигналов в виде темных пятен, положение которых точно соответствует таковому определенных колоний или бляшек на исходной чашке Петри. В результате проведения исследования идентифицируются бактериальные колонии или фаговые бляшки, содержащие искомые рекомбинантные ДНК. С этого момента с помощью обычных микробиологических и биохимических методов можно получать неограниченное количество идентичных копий клонированной последовательности нуклеотидов ДНК для дальнейших исследований. В ряде случаев, когда нет необходимости в скрининге большого числа клонов, гибридизацию с зондами можно заменить ПЦР. При таком подходе в качестве источника матричной ДНК используют суспензию бактериальных клеток или фаговых частиц отдельных клонов без специальной очистки матричных нуклеиновых кислот. [c.163]

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного из них состоит в трансформации клеток требуемым геном, соедршенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера. Примером может служить метод получения клеток, дефектных по синтезу фермента тимидинкиназы (ТК -клетки). Такие клетки трансформировались фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген фермента ТК, и после трансформации они приобретали способность к синтезу фермента на селективной среде, т.е. становились ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от клеток TK , поскольку способны расти на средах с ами-ноптерином (ингибитор, блокирующий определенные стадии биосинтеза нуклеотидов), гипоксантином и тимидином. Следовательно, в данном случае для трансформации клеток животных бьши использовапы гибриды бактериальных плазмвд с геном ТК из вируса герпеса. Для этого предварительно проводили клонирование и идентификацию генов в клетках Е. соИ и затем полученная рекомбинантная плазмида вводилась в ТК -клетки. Анализ мето- [c.125]

А можно в принципе придумать какую-нибудь страшилку пострашнее, не заботясь о научной достоверности вообще сЕще одна проблема заключается в токсинах замедленного действия. Известно, что время проявления токсичного действия белка может занимать более 30 лет. ГМ-соя отличается от обычной по белкам на 74%, Поскольку эти белки — гибриды бактериальных и растительных организмов, они действительно принципиально новые, поэтому не могут приравниваться к растительным или бактериальным, Превращение белка из полезного в болезнетворный может зависеть от малейшего изменения аминокислотного составам (из [c.92]

Основные этапы генно-инженерного синтеза соматостатина показаны на рис. 5.14. Синтетический ген соматостатина был встроен в плазмиду pBR322 Е. соН вблизи конца гена, кодирующего фермент -галакгозидазу. Между двумя генами был помещен кодон метионина. После выделения рекомбинантной плазмиды в бактериальную клетку кишечная палочка стала синтезировать гибрид- [c.137]

Ренатурация позволяет получать гибридные двойные спирали из ДНК различного происхождения. Получены гибриды ДНК, выделенных из различных штаммов Е. oli, и межвидовые бактериальные гибриды. Гибридизация ДНК вскрывает эволюционногенетические связи между бактериями. [c.246]

Тем не менее, следует особо выделить методы клеточной и генной инженерии, когда в экспериментальных условиях удается создавать клетки с заведомо известными свойствами Так осуществлены соматическая гибридизация клеток картофеля и томата (гибрид назван "помато"), перенос генетической информации о синтезе человеческого или животного гормона инсулина в бактериальные клетки (кишечной палочки), способных затем продуцировать полипептидные цепи инсулина [c.41]

Среди рибосомных РНК обнаружено два основных вида. Из рибосом Е. oli с константой седиментации 50 S и 30 S (фиг. 48) получены РНК с молекулярным весом 1,12 - 10 (23 S-РНК) и 0,56 10 (16S-PHK) соответственно [65]. Было высказано предположение, что обе эти РНК построены из одной и той же субъединицы, причем 23S-PHK является димером 16S-PHK [91]. Однако это заключение не соответствует действительности, поскольку рассматриваемые виды РНК различаются по относительному расноло/кению оснований [92, 93] кроме того, в опытах по гибридизации они образуют гибриды с различными частями бактериального генома (стр. 239). [c.54]

Поскольку нуклеотидный состав рибосомной РНК не коррелирует с нуклеотидным составом ДНК в тех же клетках, казалось сомнительным, чтобы и рибосомная РНК действительно образовывалась на ДНК-матрице. Однако, как показали Яновский и Спи-гелман [61—64] методом гибридизации, рибосомная РНК представляет собой продукт транскрипции лишь небольшой части ДНК бактериальной клетки [61—64]. Яновский и Снигелман выбрали организмы, ДНК которых резко отличается по составу от рибосомной РНК, пометили их РНК с помощью Р или Н и позволили затем клеткам находиться на нерадиоактивной среде еще некоторое время. За этот период метка исчезала из быстро метящейся т.-РНК и накапливалась в стабильной г-РНК. Затем дали возможность образоваться гибридам, после чего удалили РНК-азой всю негибридизированную РНК и выделили устойчивые к РНК-азе гибриды. Оказалось, что только менее 0,4% всей ДНК комплементарно РНК из 16S- и 238-рибосом. Нерибосомная РНК из данного организма не конкурирует за эту фракцию ДНК. Более того, сами г-РНК из 16S- и 238-рибосом берут начало от различных участков ДНК. Это предположение основано на следующих фактах во-первых, максимальное количество РНК, способное образовать гибрид с ДНК, различно для этих двух РНК. Во-вто-рых, когда / -РНК из 168- и 238-рибосом присутствуют одновременно в насыщающих концентрациях, то образование гиб- [c.239]

Еще одним доказательством комплементарной природы РНК, полученной на данной ДНК-затравке, служит образование специфического комплекса при нагревании с последующим охлаждением смеси ДНК-затравки и РНК-продукта. При эквимолекулярных соотношениях два полинуклеотида образуют гибридные комплексы, причем ренатурация ДНК исключается благодаря большей стабильности гибрида. Образование гибрида специфично для ДНК-затравки и не происходит с другими дезоксинуклеиновыми кислотами, даже если они обладают сходным нуклеотидным составом. Следовательно, средний нуклеотидный состав, анализ ближайшего соседа и полная комплементарность последовательности — все говорит о доминирующей роли последовательности нуклеотидов в затравочной ДНК в определении природы ферментативно синтезированной РНК- При использовании определенной бактериальной системы Mi ro o us lysodeikti us) не было обнаружено, чтобы матрица и продукт образовывали промежуточные соединения, гибриды (в отличие от ДНК-полимеразы). Далее, после ферментативного синтеза РНК не происходит изменений в плотности матрицы и денатурации (разделении нитей) ДНК- Следовательно, либо двухспиральная ДНК действует как матрица, не раскручиваясь, либо механизм заключается в том, что функционируют небольшие одноцепочечные олигонуклеотидные участки, непосредственно прилега- [c.319]

Для обогащения ДНК данным участком генома можно с успехом использовать явление переноса генетического материа.ла. Принцип этого подхода заключается в переносе ( )рагмента хромосомной ДНК на значи тельно меньшую но разлтерам ДНК другой природы и в последующем вы делении этой структуры. Подобные случаи встречаются у бактерий, у которых данный участок генома может связываться с ДНК фага [41—43] или с половым фактором [44, 45]. Фаговая ДНК или половой фактор, нри-соедшшвшие такой участок бактериального генома, могут содержать до 50% хромосомной ДНК, в результате чего ДНК обогащается данным участком генома в 200 раз. Соотношение РНК/ДНК в гибридах, построенных из трапсдуцироваиной ДНК и гомологичной ей РНК, достаточно высоко, в особенности если ДНК перед гибридизацией была фрагментирована ультразвуком. [c.168]

На фиг. 198, А представлены результаты опыта, в котором в пробы гибридизацконпой смеси, содержащие одинаковое количество гомологичной бактериальной ДНК, добавляли возрастающие количества очищенной 16S- или 23S-pPHK. Во всех пробах затем определяли количество РНК в гибриде. Четко видно, что и 16S-, и 23S-pPHK гибридизируются с бактериальной ДНК, причем количество РНК, вошедшей в гибрид, воз- [c.397]

Возможная токсичность и опасность для здоровья, связанные с появлением принципиально новых белков (так как они являются гибридами белков растительного и бактериального происхождения), содержашдхся в генетически модифицированных продуктах. [c.502]

Рис. 10-24. Описание эксперимента, позволяющего выявить в составе белка-активатора а14 у дрожжей, независимые ДНК-связывающие и активирующие транскрипцию домены Функциональный белок-активатор может быть получен при соединении карбоксиконцевой части белка а14 и ДНК-связывающего домена бактериального белка-регулятора (белок 1ехА) методом слияния генов. Полученный таким образом бактериально-дрожжевой гибрид будет активировать транскрипцию дрожжевых генов, если перед этими генами встроить специфический сайт, необходимый для его связывания. А. Нормальная активация транскрипции белком а14. Б Химерный белок-регулятор для проявления своей активности нуждается в сайте ДНК, связывающем белок 1ехА. Аналогичные эксперименты продемонстрировали наличие отдельных доменов

Если опылять растения такой мужски стерильной линии пыльцой специально подобранной линии традиционной селекции, дающей при скрещивании гетерозисное потомство, то действительно можно без проблем получить гибридные семена, поскольку самоопыление материнских форм исключено. Однако само гетерозисное потомство получится мужски стерильным, что совсем нежелательно. Поэтому в качестве опылителя используют такую же линию, но несущую трансген barstar от той же бактерии Ba illus amyloliquefa iens. Этот ген кодирует образование фермента-ингибитора РНКаз, благодаря чему у гибридов восстанавливается фертильность пыльцы. Именно используя систему трансгенных линий с этими двумя бактериальными генами, удалось создать целый ряд коммерческих сортов рапса, которые представляют собой гетерозисные гибриды F1. [c.54]

Культуральную жидкость гибридов собирают, когда погибнет около 80% клеток. Объединяют вместе несколько культур объемом 200 мл и клеточный дебрис отделяют либо фильтрованием, либо центрифугированием при 1000 д 15 мин. После этого к надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония из расчета 350—400 г/л. Суспензию перемешивают на магнитной мешалке 1 ч при 4°С и затем еще инкубируют 18—24 ч при 4°С без встряхивания. В результате практически весь преципи-тированный материал оседает на дне. Осторожно удаляют >80% надосадочной жидкости, а оставшуюся взвесь центрифугируют при 5000 д 30 мин для осаждения фракции, содержащей иммуноглобулины. Осадок ресуспендируют в минимальном объеме ЗФР или ЗБР и диализуют против избытка того или другого буфера. Предпочтительнее использовать ЗБР, так как при этом существенно снижается опасность бактериального роста. После хроматографии на носителе 5ерЬасгу1 5-200 (для выделения IgG) или 5ерЬасгу1 8-300 (для выделения IgM) получают МА 95%-ной чистоты. [c.190]

Первые гибриды Е. oli-S. typhimurium и другие бактериальные межродовые и межвидовые гибриды получали традиционным генетическим методом — конъюгацией. Однако при этом обмен генами между клетками, относящимися к разным семействам, практически не происходит. Неограниченные возможности для объединения геномов, включая и геномы эволюционно далеких организмов, открывает техника слияния протопластов в присутствии полиэтиленгликоля. При межвидовой и межродовой гибридизации бактерий и дрожжей таким способом удается [c.438]

Одним из приоритетных направлений ген-но-инженерных исследований является достижение правильной экспрессии генов высших эукариот и их вирусов в бактериальных клетках. Однако в данных случаях экспрессию многих клонированных генов уже нельзя выявить по функциональной комплементации в силу некоторых принципиальных различий в организации прокариотических и эукариотических клеток. Несомненно, такой подход неприменим и при клонировании большинства вирусных генов. Поэтому в данной ситуации для поиска требуемых клонов гибридов можно использовать метод радиоиммуноанализа белков in situ, первые варианты которого были описаны в 1978 г. В основу метода (рис. 1.21) положена способность молекул иммуноглобулинов связываться с полистиролом или поливинилом. Кроме того, предполагается, что исследуемый белок имеет не менее двух антигенных детерминант и может связывать по крайней мере две разные молекулы иммуноглобулинов, присутствующих в препарате поликлональных антител, полученных на целевой белок. [c.35]

Удобны векторы замещения на основе транс-дуцирующих фагов Я (см. рис. 2.17, г-е). При встраивании в эти векторы экзогенной ДНК обычно из фаговой ДНК удаляются фрагменты, в состав которых входят трансдуцируемые этим фагом бактериальные гены. Гибриды выявляются на соответствующих мутантных бактериальных клетках как фаги, утратившие бактериальный ген и поэтому уже не комплементирую-щие мутацию в клетке-хозяине. [c.101]

Смотреть страницы где упоминается термин Гибриды бактериальны: [c.441] [c.172] [c.398] [c.398] [c.382] [c.437] [c.174] [c.39] [c.217] [c.177] [c.195] [c.398] [c.489] [c.49] [c.69] [c.23] [c.76] [c.365] [c.439] [c.118] [c.85] [c.101] [c.110] [c.403] [c.464]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология