Нуклеозидтрифосфаты активность

ТОМ. Поэтому кинетически нуклеозидтрифосфаты — более активные доноры нуклеотидного остатка, чем пирофосфаты, независимо от того, рассматривается ли нуклеофильная атака на а-атом фосфора нуклеотида сильного нуклеофильного реагента (такого, как алкилфосфат) или слабого нуклеофильного реагента (такого, как спиртовая гидроксильная группа). Термодинамически, т. е. по отношению к положению равновесия реакции, определение условий реакции безусловно важно. Однако при одних и тех же внешних условиях в области значений pH от 6 до 8 можно ожидать, что реакция Б будет протекать в направлении слева направо в большей степени, чем реакция А, если различия в резонансной стабилизации, ионизации, сольватации, влиянии ионов металлов и электростатических эффектов у продуктов реакции и АТФ (реакция Б) будут больше, чем у продуктов реакции и АДФ (реакция А). [c.356]

Активный центр должен также содерн<ать участок, который связывает растущий конец новой цепи, и участок, специфически взаимодействующий с нуклеозидтрифосфатами (дифосфаты не действуют), но тоже неспецифичный по отношению к пуриновым и пиримидиновым основаниям. По-видимому, можно рассматривать нуклеотид ДНК-матрицы, находящийся в данный момент в области активного центра фермента, как временную часть активного центра, придающую ферменту специфичность по отношению к пуриновым и пиримидиновым основаниям, которой лишен сам активный центр. Основание такого работающего нуклеотида матрицы благодаря положению групп, образующих водородные связи, придает центру специфическое сродство к нуклеотиду, содержащему комплементарное осно- [c.11]

Регуляция ферментативной активности путем фосфорилирования и дефосфорилирования в известной мере аналогична регуляции по принципу обратной связи. Оба типа регуляции обеспечивают быстрое изменение потока метаболитов в ответ на тот или иной физиологический сигнал и в том и в другом случае экспрессия генов не затрагивается. При обоих типах регуляции действие направлено на ферменты начальных этапов многостадийной цепи метаболических реакций, чаще всего принадлежащих одному пути биосинтеза, причем не на каталитические, а на аллостерические центры. Однако ингибирование по принципу обратной связи направлено избирательно на один фермент и не зависит от гормональной или нервной регуляции. Напротив, регуляция ферментов млекопитающих путем фосфорилирования— дефосфорилирования распространяется на несколько белков, осуществляется при участии АТР или других нуклеозидтрифосфатов и находится под прямым нервным и гормональным контролем. [c.110]

Фосфор-кислород Л. катализируют отщепление пирофосфорной к-ты от нуклеозидтрифосфатов. Сюда входят нуклеотидил-пиклазы-аденилатциклаза и гуанилатциклаза. Ферменты важны для регуляции клеточной активности. [c.589]

Синтез ДНК в бесклеточной системе впервые был осуществлен А. Корнбергом, удостоенным за эти работы Нобелевской премии в 1959 г. Для проведения синтеза необходимо пять существенных компонентов. Первый из них — фермент полимеразу — получали из культуры бактерий Е. oli с выходом 10 мг на 1 кг-культуры (такой выход составляет 20% от максимально возможного, так как на одну клетку приходится всего лишь около 100 молекул этого фермента). Кроме фермента необходимы аденозинтрифосфат (АТФ), являющийся источником энергии, Mg++, ДНК-затравка и монофосфаты всех четырех нуклеозидов, входящих в ДНК. После того как было показано, что под действием ферментов киназ дезоксинуклеозидмонофосфаты превращаются в соответствующие дезоксинуклеозидтрифосфаты, в экспериментах начали добавлять нуклеозидтрифосфаты. Именно по отношению к ним активна полимераза. Для синтеза существенны все четыре дезоксинуклеозида если присутствует лишь один из пред- [c.329]

Ведущее место в синтезе клеточной РНК принадлежит РНК-полиме-разе (РНК—нуклеотидилтрансферазе). Данный фермент обнаружен в животных и растительных тканях, а также в микроорганизмах. Максимальная активность РНК-нолимеразы в опытах in vitro проявляется в присутствии четырех нуклеозидтрифосфатов (АТФ, ЦТФ, ГТФ, УТФ), ДНК, ионов Mg или Мп , а также (З-меркаптоэтанола или других реагентов, содержащих SH-группы рН-оптимум фермента 7,5—8,0. Удаление из реакционной среды одного из нуклеозидтрифосфатов, ионов Mg + или ДНК почти полностью прекращает реакцию. [c.443]

E. oli, которую брали в избытке, и смеси нуклеозидтрифосфатов. В интервале 0,4—0,6 М Na l происходила резкая деконденсация материала, выражающаяся в набухании ядерного геля и даже растворении ДНП (если далее вести механическую обработку). При этом, как было показано, избирательно удалялся гистон Н1. Одновременно с деконденсацией хроматина происходило резкое усиление его матричной активности (рис. 26). Дальнейшее увеличение концентрации солей в экстрагирующем растворе вело к удалению других гистонов и некоторому, но не слишком выраженному дополнительному увеличению матричной активности. [c.145]

Влияние УТФ (стимуляция деаденилирования и увеличение глутаминсинтетазной активности) противоположно ингибирующему действию одного из конечных продуктов ЦТФ. Это обеспечивает сбалансированный синтез указанных нуклеозидтрифосфатов. [c.41]

Б этом разделе описывается синтез РНК-зондов пзггем транскрипции in vitro клонированных ДНК, несущих фаговый промотор [37, 38]. Заметим, что удельная активность таких РНК-зондов ниже, чем полученных стандартным способом и традиционно используемых при тестировании геномных ДНК (10 Ки/ммоль на один меченый NTP). Такой активности достаточно для работы с одной десятой от общего количества ДНК, получаемой в ПЦР, или с очень небольшим объемом клонированной ДНК- Преимущество этих зондов состоит в том, что они сохраняют стабильность более 1 нед (а не 1—2 дня, как зонды с высокой удельной активностью). Кроме того, длинные зонды с выступающими концами легче синтезировать так как при этом нуклеозидтрифосфаты не лимитируют реакцию транскрипции. Если исследуется геномная ДНК и не проводится ПЦР, то следует использовать зонды с высокой удельной активностью (200—400 Ки/ммоль по одному из NTP). Важно, чтобы концентрация меченого NTP в начале транскрипции была не менее 10 мкМ, поэтому для синтеза высокоактивного зонда требуется 40—80 мкКи меченого NTP. [c.149]

Расщепление этого фрагмента на более мелкие с помощью эндонуклеаз рестрикации и мечение образовавшихся концов (с помощью полинуклеотидкиназы и РуАТФ или при застройке липких концов большим фрагментом ДНК-полимеразы I, сохранившим полимеразную, но не экзонуклеазную активность — см. гл. 6 — в присутствии нуклеозидтрифосфатов, один из которых мечен Р в а-положении). На этом этапе обычно получаются фрагменты, меченные с обоих концов, поэтому каждый меченый фрагмент выделяют из геля и либо подвергают электрофорезу для разделения цепей, либо гидролизуют еще одной рестриктазой для получения субфрагментов, несущих Р только с одного конца. [c.285]

Замечательная особенность процесса трансляции от разрыва состоит в том, что (во всяком случае in vitro) он не ограничивается восполнением нуклеотидов, отсутствующих в месте разрыва, т. е. заделкой разрыва. Одновременно с синтетической фермент Корнберга обладает и экзонуклеазной активностью, причем также в направлении 5 ->-3. Благодаря этому он убирает нуклеотиды, находящиеся впереди него в достраиваемой нити ДНК, уже за пределами первоначального разрыва, и тут же заменяет их на новые (в силу условия комплементарности— точно такие же) нуклеотиды за счет находящихся в среде нуклеозидтрифосфатов. Последние могут быть радиоактивно меченными либо по основаниям ( С, Н), либо по фосфору, стоящему в а-положении. В этом случае описанный процесс приводит к [c.258]

Другие виды ферментативной активности. В вирионах и сердцевинах реовирусов обнаружена нуклеозидтрифосфат-фосфо-гидролазная активность [36, 139, 322]. Она катализирует отщепление неорганического фосфата от различных нуклеотидов, предпочтительно от АТР. Этот же фермент отщепляет фосфатные группы от трифосфорилированных концов полинуклеотидов (нуклеотидфосфогидролаза, реакция 2 в табл. 20,10), [c.282]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология