Фазово-контрастные устройства

Рис. 8. Фазово-контрастное устройство.

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ ВОЛОКОН С ПРИМЕНЕНИЕМ ФАЗОВО-КОНТРАСТНЫХ УСТРОЙСТВ [c.36]

При работе с фазовоконтрастным устройством из системы микроскопа удаляется кронштейн с конденсором. На место снятого кронштейна устанавливается другой кронштейн, а, в кольцо последнего— фазовоконтрастное устройство КФ-1. Работа осуществляется на фазовых объективах, входящих в комплект КФ-1. Фазово-контрастное устройство позволяет определять показатели преломления мелкокристаллических веществ и изуч.ать тонкие структуры материалов (глинистые минералы и т. д.). Поляризованный свет, необходимый для определения оптической плотности минералов, создается посредством накладного поляроида. Общее увеличение микроскопа составит u = V V2, где V — увеличение, даваемое объективом V2 — увеличение, даваемое окуляром. [c.110]

На рис. 36 показаны поперечные срезы полинозного волокна, полученные с применением обычного метода (а), при помощи фазово-контрастного устройства КФ-4 (б) и фазово-темнопольного устройства МФА-2 (в). [c.39]

Микроскопия с фазово-контрастным устройством [c.91]

Рис. 35. Фазово-контрастное устройство КФ-4

Для проведения исследований необходимо в дополнение к световому микроскопу иметь фазово-контрастное устройство (в настоящее время наиболее широко применяется модель КФ-4), которое состоит из фазовых объективов (на оправе имеется буква Ф ), конденсоров с набором кольцевых диафрагм и вспомогательного микроскопа (оптического устройства, помещаемого в тубус вместо окуляра при установке фазового контраста). [c.18]

Фазово-контрастное устройство КФ-4 + 4- 4- [c.308]

Большое практическое значение для исследования структуры волокон имеет применение фазово-контрастных устройств, которые позволяют получать более контрастные изображения, где темные и светлые места соответствуют различной толщине или оптической плотности препарата. Применение фазово-контрастных устройств выявляет более тонкую структуру волокон. [c.36]

В фазово-контрастном устройстве КФ-4 (рис. 35) имеется набор фазовых объективов, которые отличаются от обычных тем, что в их оптической системе имеется фазовое кольцо. В револьвере 2 конденсора 1 помещены кольцевые диафрагмы, изображения которых проецируются на фазовое кольцо объектива. Для каждого объектива предусмотрена своя диафрагма. Фазовое кольцо вместе с кольцевой диафрагмой обеспечивает получение эффекта фазового контраста в изображении. При помощи винтов изображение кольцевой диафрагмы центрируется относительно фазового кольца. При правильной настройке устройства изображение кольцевой диафрагмы должно совпадать с фазовым кольцом (т. е. кольцо должно перекрывать изображение диафрагмы по всей окружности). Для наблюдения за плоскостью фазового кольца во время настройки [c.37]

Обычный и инвертированный микроскопы с фазово-контрастным устройством. [c.96]

Объект можно сделать более контрастным, либо почти до предела закрывая диафрагму конденсора, либо окрашивая клетки, либо применяя фазово-контрастное устройство. Первое нежелательно, так как снижает апертуру конденсора и тем самым заметно уменьшает разрешающую способность микроскопа. Окрашивание препарата дает хорошие результаты, но в большинстве случаев оно осуществляется после фиксации микроорганизмов, что не всегда желательно. Основная ценность метода фазового контраста состоит в том, что он дает возможность наблюдать живые объекты, не прибегая к их фиксации и окрашиванию. Применение фазово-контрастного устройства не позволяет увеличить разрешающую способность микроскопа, но дает возможность увидеть прозрачные объекты более четко и даже выявить некоторые структуры и включения в клетках крупных бактерий. [c.91]

Рис. 49. Схема хода лучей при использовании фазово-контрастного устройства

Широкое применение нашли фазово-контрастные устройства, выполненные по схеме позитивного контраста. Наиболее распространенной моделью является КФ-4 (рис. 51). Фазово-контрастное устройство представляет собой приставку к микроскопу, состоящую из вспомогательного окуляра, специальных фазовых объективов и конденсора с набором кольцевых диафрагм, каждая из которых соответствует фазовой пластинке определенного объектива. Кольцевые диафрагмы установлены в револьверном диске под конденсором и поворотом диска могут легко меняться, причем в окне крышки диска появляется цифра, соответствующая увеличению применяемого объектива. Кроме того, в револьверном диске имеется свободное отверстие — нулевая диафрагма — для наблюдений обычным способом. Конденсор снабжен двумя винтами для центрировки кольцевой диафрагмы относительно фазового кольца объектива. Все фазовые объективы имеют на оправе обозначение ф . Им и можно пользоваться и при обычной микроскопии, но из-за наличия фазового кольца они дают изображение пониженного качества. [c.93]

ПОРЯДОК РАБОТЫ С ФАЗОВО-КОНТРАСТНЫМ УСТРОЙСТВОМ [c.94]

Люминесценцию в сине-фиолетовых лучах видимого света можно наблюдать с помощью обычного микроскопа, установив на пути лучей синий стеклянный или жидкий светофильтр, пропускающий сине-фиолетовые лучи видимого спектра. Синие лучи, мешающие выявлению люминесценции, убирают желтым светофильтром, который помещают на окуляр микроскопа. В результате наблюдатель видит на темном фоне люминесцирующие объекты. Однако для микробиологических исследований наиболее удобен люминесцентный микроскоп, в котором люминесценция возбуждается сине-фиолетовыми лучами и ближним ультрафиолетом. Оптическая схема микроскопа МЛ-2 позволяет наблюдать объекты при освещении их как в проходящем, так и в падающем свете. Чаще свет, возбуждающий люминесценцию, направляется на препарат сверху, через объектив. При освещении объектов сверху (для возбуждения люминесценции) одновременно допускается освещение объектов снизу с помощью конденсора темного поля ОИ-13 или фазово-контрастного устройства. Люминесцентный микроскоп также позволяет исследовать объекты в видимой области спектра в проходящем и отраженном свете в темном поле. Устройство люминесцентного микроскопа и порядок работы даны в описании каждой конкретной модели и здесь не приводятся. [c.95]

Клетки микроорганизмов измеряют под микроскопом с помощью окулярной линейки — микрометра или окулярного винтового микрометра. Для измерения лучще использовать живые, а не фиксированные клетки, так как фиксация и окраска клеток приводят к некоторому изменению их истинных размеров. Удобно определять размеры клетки, пользуясь фазово-контрастным устройством. Если клетки подвижны, препарат слегка подогревают или к капле исследуемой суспензии добавляют каплю 0,1%-ного водного раствора агара. Размеры клеток выражают в микрометрах (мкм). [c.102]

Наблюдение живых клеток. Споры по сравнению с цитоплазмой характеризуются более высоким показателем преломления света, поэтому при микроскопировании в светлом поле они видны как более темные включения округлой или овальной формы. При использовании фазово-контрастного устройства споры имеют вид, светлых включений на фоне почти черных клеток. [c.111]

Подсчет клеток в капиллярах Перфильева. Для изучения и подсчета микроорганизмов в естественных субстратах иногда применяют капилляры Перфильева. Они имеют прямоугольное сечение и по принципу подсчета аналогичны счетной камере. При погружении капилляра в субстрат (ил, почву и т. д.) он заполняется в силу своих капиллярных свойств. Затем капилляр помещают на предметное стекло, заливают конец расплавленным парафином и подсчитывают клетки, используя объективы 40 X, 90 X или фазово-контрастное устройство. [c.119]

Для проведения исследовании необходимо к биологическому микроскопу иметь фазово-контрастное устройство КФ-4, состоящее из фазового конденсора с револьвером, вспомогательного микроскопа (рис. 21), специальных объективов, иа оправе которых имеется буква Ф. Выпускается таклсе модель КФ-5. [c.43]

Эффект фазового контраста наблюдается в том случае, если удается совместить фазовое кольцо объектива с кольцевой диафрагмой конденсора. Порядок работы при установке фазово-контрастного устройства следующий. [c.43]

В передней фокальной плоскости конденсора 3 вместо апертурной диафрагмы устанавливается кольцеобразная диафрагма 4, которая конденсором и объективом изображается в задней фокальной плоскости объектива 2. Здесь помещена фазовая пластинка 1, представляющая собою фазовое кольцо, нанесенное на поверхности линзы вблизи заднего фокуса объектива. Это кольцо поглощает значительную часть света, прямо прошедшего через препарат, и сдвигает его фазу, т. е. обусловливает запаздывание (негативный контраст) или опережение (позитивный контраст) во времени на четверть длины световой волны Ч к). Свет, рассеянный, диафрагмированный, препаратом (пунктирные линии), проходит мимо фазового кольца и не претерпевает дополнительного сдвига фазы. Таким образом фазово-контрастное устройство ослабляет интенсивность и задерживает яркий нулевой дифракционный спектр, не внося каких-либо изменений в остальные спектры, благодаря чему в неокрашенных прозрачных объектах становится хорошо видна их структура. Темные и светлые места в фазово-контрастном изображении соответствуют различной толщине или оптической плотности препарата. Для преобразования невидимого фазового изображения препарата в обычное видимое изображение применяются фазовоконтрастное приспособление КФ-4 и фазовотемнопольное приспособление МФА-2, которые устанавливают на микроскопах вместо обычного конденсора. [c.37]

Для изучения митоза и его отдельных фаз прижизненные наблюдения можно провести на волосках тычиночных нитей традесканции при помощи фазово-контрастного устройства, а также в поляризованном или флуоресцентном свете. В большинстве же случаев для этих целей используют меристематические клетки конуса нарастания корней или стебля после их фиксации и последующего изготовления препаратов. Препараты исследуют на светлом поле микроскопа в проходящем свете. [c.139]

Просмотр препарата под микроскопом с фазово-контрастным устройством. [c.164]

Предназначены для расширения возможностей исследования либо для улучшения вксплуатационных свойств прибора. Среди принадлежностей к оптическим микроскопам осветители для проходящего и отраженного света, окулярные насадки, фазово-контрастные устройства, объективы и окуляры, предметные и покровные стекла. [c.313]

Отдельный бактериальный жгутик настолько тонок, что неразличим в световом микроскопе, если он не окрашен особым способом, который увеличивает кажущуюся толщину жгутика. Так, диаметр отдельных жгутиков колеблется в пределах 0,01 — 0,02 мкм (у Bdellovibrio 0,04—0,06 мкм), а максимальное разрешение светового микроскопа составляет 0,2 мкм. Лишь у немногих бактерий, например у представителей рода Spirillum, пучки жгутиков достаточно плотны и их удается обнаружить при наблюдении в светлом поле с помощью фазово-контрастного устройства или в темном поле. [c.106]

Модификация метода прямого подсчета с применением фазово-контрастной микроскопии. А. Г. Кокина (1956), А. С. Разумов, Л. Е, Корш (I962), Ri hards, КгаЬек (1954) использовали фазово-контрастную микроскопию для подсчета общего числа бактерий, предварительно сконцентрированных на мембранном фильтре. После высушивания мембранного фильтра (без окрашивания) готовят препарат и просчитывают бактерии под микроскопом с помощью фазово-контрастного устройства. При подсчете бактерий используют зеленый светофильтр, благодаря которому получается поле зрения спокойного зеленого цвета. Бактерии на зеленом поле выглядят довольно контрастно, как черные точки или палочки различных размеров. [c.85]

Иммобилизация вибрионов холерными сыворотками и типовыми холерными фагами. Капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды обрабатьшают холерной О-сьшороткой, типовыми сьшоротками Огава и Инаба или типовыми холерными фагами. Готовят из них препараты <<раздавленная капля, которые исследуют в микроскопе, снабженном темнопольным или фазово-контрастным устройством. В положительном случае через 3- 5. мин движение вибрионов прекрщается. [c.192]

Чистоту культур микроорганизмов обязательно нужно контролировать под микроскопом. Для этого следует приготовить препарат фиксированных окрашенных клеток и просмотреть его с иммерсионной системой или препарат живых клеток и просмотреть его, используя фазово-контрастное устройство. Чистая культура многих микроорганизмов, как правило, морфологически однородна допустимо лишь незначительное варьирование размеров клеток. Однако необходимо помнить, что клетки некоторых бактерий, например, микобактерий, нокардий и др., очень полиморфны, поэтому определение чистоты таких культур при микроскопировании вызывает некоторые затруднения. Чистоту культур микроорганизмов обязательно проверяют высевом на питательные среды. Прежде всего выделенную культуру высевают на питательную среду, благоприятную для ее роста. Однородность выросших колоний — свидетельство чистоты культуры. Обязателен посев на мясо-пептонный агар — среду, которая обеспечивает рост многих хемоге-теротрофов. Критерием чистоты культуры является однородность выросших колоний или отсутствие роста, если данные микроорганизмы на мясо-пептонном агаре не развиваются. Следует иметь в виду, что заключение о чистоте некоторых культур микроорганизмов нельзя сделать только по результатам высева на МПА. Особенно это касается автотрофных микроорганизмов, а также представителей гетеротрофов, склонных развиваться с одним или несколькими спутниками. Чистоту таких культур микроорганизмов проверяют высевом еще на ряд сред — сусло, мясо-пептонный бульон, картофельный агар и др. Набор сред и их состав определяются особенностями метаболизма выделенных микроорганизмов, а также их возможных спутников. [c.80]

Липидные гранулы. У дрожжей и мицелиальных грибов запасные липиды представлены нейтральными жирами, которые легко обнаруживаются в живых клетках без специальных методов окраски в виде сильно преломляющих свет капель. Бактерии в качестве резервных липидов образуют поли-р-оксимасляную кислоту. Гранулы поли-р-оксибутирата хорошо заметны при микроскопировании живых бактериальных клеток с фазово-контрастным устройством, однако чаще для их выявления клетки окрашивают ли-пофильными красителями — Суданом III или Суданом черным. Готовят тонкий мазок клеток, высушивают его на воздухе и фиксируют в пламени горелки. Заливают поверхность мазка раствором Судана черного и оставляют краситель на 5—15 мин. Избыток красителя сливают, просушивают препарат фильтровальной бумагой, просветляют в ксилоле, погружая в него несколько раз предметное стекло. Время просветления препарата не должно превышать 1 мин. После этого клетки дополнительно окрашивают в течение 10 с 0,1%-ным водным раствором сафранина. Более длительная обработка сафранином нежелательна, так как маскируется основная окраска. Гранулы поли- -оксибутирата окрашиваются в темный цвет, остальная часть клетки — в розовый. [c.109]

Для работы в научно-исследовательских лабораториях используют микроскопы с более совершенной оптикой, чем у рабочих. Большой биологический микроскоп МББ-1 (рис. 8) в отличие от рассмотренных выше моделей микроскопической техники имеет встроенный осветитель, обеспечивающий постоянное освещение во время исследовательских работ в проходящем свете при прямом и косом освещении. Бинокулярная насадка АУ-26 позволяет получать три степени увеличения. К микроскопу прилагается восемь объективов — один плаиахромати-ческий, шесть апохроматических и один ахроматический три компенсационных окуляра и большой набор вспомогательных принадлежностей — темнопольный конденсор, фазово-контрастное устройство КФ-4, поляфильтры и т. д. [c.16]

Почти не отличается от фазово-контрастного устройства аноптральный микроскоп, котором нет фазовой пластинки, но вблизи выходного зрачка объектива наносится поглощающая кольцевая пленка из копоти. [c.44]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология