Нингидрин, колориметрия

Обработка нингидрином+ + колориметрия [c.270]

Нингидринная реакция широко используется для анализа аминокислот. Реакция протекает количественно. Образующийся альдегид является характерным для каждой аминокислоты Специфическое определение альдегида позволяет установить соответствующую аминокислоту. Колориметрия окрашенного комплекса в сочетании с хроматографией и ионо-форезом является сейчас одним из самых распространенных методов аминокислотного анализа белковой молекулы. [c.469]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Распределительная 2) -Бутил. спирт 3) Крахмал вода 4) -Бутил, спирт 5) Обработка нингидрином -f- колориметрия [c.270]

Заметная флуоресценция появляется при температуре не ниже 37°. Преимуществом этого метода является то, что аминокислоты не разрушаются, в то время как при применении реактивов вроде нингидрина они переходят в другие соединения. Однако цветные реакции являются более чувствительными. При количественном анализе аминокислот применяют обычные методы, как, например, титрование, визуальную и фотоэлектрическую колориметрию и т. д. [c.160]

Количественное определение глютаминовой кислоты проводилось по следующему методу [12]. Хроматограмму протягивали через 1%-иый раствор нингидрина, испаряли ацетон на воздухе (1—2 мин) и для развития окраски пятен выдерживали в течение 25 мин в термостате при 60 . Нингидриковые производные аминокислот элюировали 4 мл 40%-ного метилового спирта i 2 мл 0,5%-ного раствора хлористого кадмия в 40%-ноы метиловом спирте в течение 2 ч. Растворы колориметрировали на колориметре ФЭК-М со светофильтром № 2 (длина волны 530 ммк). В связи с тем, что цветовой выход нингидриновых производных аминокислот подвержен некоторым колебаниям и оптические плотности растворов различаются даже для различных хроматограмм из одной камеры, на каждый лист наносили стандартный раствор аминокислоты в количестве 10—20у. [c.214]

По скорости и эффективности хроматография аминокислот уже начала превосходить классические системы детектирования, и дальнейшее усовершенствование анализаторов продолжалось на основе более глубокого изучения кинетики реакции аминокислот с нингидрином и отработки конструкции реактора и колориметра [7, 16, 17]. В результате удалось еще более повысить разрешение и чувствительность анализа. Время одного анализа составляло уже менее 8 ч, и, следовательно, появилась возможность увеличить эффективность за счет круглосуточной работы прибора. Большинство операций уже осуществлялось в автоматическом режиме, однако для полной автоматизации необходимо было иметь блок ввода образцов (автосамплер). Первая модель устройства с одной петлей для ручного ввода образца уже была разработана [18], поэтому не составляло труда преобразовать ее в блок для автоматического ввода большого числа образцов. В дальнейшем для этих целей были созданы специальные патроны [19]. Теперь рабочая программа, заложенная в программирующее устройство, стала включать и управление автосамплером. Высокая эффективность прибора потребовала включения в систему интегратора или ЭВМ для автоматического обсчета результатов анализа. В последующих разделах дано описание неавтоматического базового анализатора и анализатора Te hni on, а затем совсем коротко приведены основные характеристики современных аминокислотных анализаторов. [c.316]

Также очень неточен метод экстракции окраски пятна от нингидрина ацет-оном [16] и последующего колориметрического определения густоты окраски в колориметре. Действительного внимания заслуживает метод Войвода ( о1 уос1) [17, 18], представляющий собой модификацию метода Попа и Стивенса [19] для определения д-NH2-aзoтa аминокислот и пептидов. Метод оказался пригодным для определения микроколичеств (1—25 у) К 2-азота. [c.405]

При приготовлении описанного выше нингидринового реагента нам не раз приходилось встречаться с трудностями. Эти трудности обычно приписывались качеству метилцедлозольва. Важно, чтобы метилцеллозольв не только не содержал следов перекисей (<3 млн. д.), которые мешают протеканию цветной реакции с нингидрином, но и не вызывал помутнения раствора, как это бывает с некоторыми партиями, после контакта с воздухом (особенно если последний попадает при перемешивании нингидринового реагента). При использовании такого недоброкачественного метилцеллюлоза в ходе анализов образуется белый осадок, который удерживается на внутренних стенках трубки реактора и в кюветах колориметра. Этот осадок не похож на гидриндантин, так как он нерастворим в метилцеллозольве, но растворяется в разбавленной кислоте. Для уменьшения образования этого осадка после нингидринного насоса помещают специальный фильтр. [c.55]

Визуальное колориметрическое определение количества аминокислоты производится следующим образом участок бумаги, содержащий аминокислоту, предварительно вырезают из бумажной хроматограммы, помещают в пробирку и обрабатывают раствором нингидрина. Экстрагированную и окрашенную нингидрином аминокислоту исследуют на количественное содержание нри помощи какого-либо колориметра. Следует отметить, что точность и чувствительность этого метода зависят от ряда условий температуры, при которой происходит нин-гидриновая реакция, количества воды, концентрации нингидрина, времени реакции, рП раствора. Поэтому, прежде чем приступить к колориметрированию растворов, необходимо исследовать влияние этих условий на ход количественного анализа, выбрать оптимальные условия и в дальнейшем проводить измерения только при этих вполне определенных условиях. Предельная чувствительность этого способа достигает 1 -]f. [c.152]

На этой основе бы.по разработано большое число мотодов, ошибка которых составляет около 5% (для гистидина эта величина больше). К наиболее старым пз них относится метод, предложенный Нэфталнном. Для колориметрии используются чаще всего реактивы, которые наряду с нингидрином содержат еще продукт его восстановления — гидриндан-7ИН, так как иначе кислород воздуха будет способствовать получению [c.436]

С 1951 г. введен ряд модификаций нингидринового реагента некоторые из этих модификаций удовлетворяют требованиям отдельных методик разделения аминокислот, другие — улучшают колориметрию. Метод Смита [96] отличается главным образом тем, что нингидрин, хлористое олово и буферные растворы прибавляют отдельно, а не в виде одного реагента. Мур и Стейн [4] изменили состав своего прежнего реагента, увеличив буферную емкость в пять раз прибавлением раствора ацетата натрия (pH 5,5). Это устранило необходимость отдельной нейтрализации фракций. Вместо хлористого олова в нингидриновый реагент был введен гидриндантин во избе- [c.145]

Разделение аминокислот можно проводить разными методами, но для анализа аминокислотного состава полипептида после его гидролиза обычно используют автоматическую ионообменную хроматографию. Полное разделение аминокислот, их идентификация и количественная оценка занимают менее трех часов. В методе Мура и Штейна используют короткую и длинную колонки, заполненные смолой из сульфонированного полистирола в Ыа+-форме. Когда кислотный гидролизат при pH 2 наносят на колонку, аминокислоты связываются в результате катионного обмена с Na+. Далее колонку элюируют раствором цитрата натрия при заранее запрограммированных значениях pH и температуры. Короткую колонку элюируют одним буфером, длинную— двумя. Элюат обрабатывают нингидрином, измеряя интенсивность окраски с помощью проточного колориметра. Данные автоматически регистрируются на ленте самописца и могут передаваться в компьютер для вычисления площади под пиком (рис. 3.12). [c.31]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология