Нингидрин, реакция с аминокислотами

Нингидрин. Реакция нингидрина (трикетогидринденгидрата) с аминокислотами используется для обнаружения и количественного определения аминокислот. Нингидрин, являющийся сильным окислителем, вызывает окислительное дезаминирование аминокислоты, приводящее к образованию аммиака, двуокиси углерода, соответствующего альдегида и восстановленной формы нингидрина [c.48]

Нингидринная реакция имеет большое значение для обнаружения аминокислот при их качественном и количественном анализе. Большинство аминокислот реагирует с нингидрином, выделяя соответствуюш,ий альдегид, СО и NN3, при этом раствор окрашивается в интенсивный сине-фиолетовый цвет ( =570 нм), растворы оранжевого [c.77]

Для качественного обнаружения а-аминокислот используют образование хелатов меди (И) н нингидринную реакцию, Нингидрин реагирует с а-аминокислотами, образуя сине-фиолетовый краситель. [c.503]

Реакция аминокислот с нингидрином имеет большое значение для обнаружения аминокислот на хроматограммах и для их [c.33]

Нингидринная реакция широко используется для анализа аминокислот. Реакция протекает количественно. Образующийся альдегид является характерным для каждой аминокислоты Специфическое определение альдегида позволяет установить соответствующую аминокислоту. Колориметрия окрашенного комплекса в сочетании с хроматографией и ионо-форезом является сейчас одним из самых распространенных методов аминокислотного анализа белковой молекулы. [c.469]

Rf может принимать значения от О до 1, чаще всего 0,90—0,25. Rf зависит от различных факторов стадии проявления хроматограммы сорта бумаги, направления волокон в куске бумаги реакции, применяемой для проявления концентрации разделяемых веществ, температуры, времени проявления и др. Чтобы получить наиболее надежные значения Rf, необходим надлежащий выбор цветной реакции для проявления пятен например, при разделении белков, полипептидов, аминокислот часто употребляют нингидринную реакцию. [c.520]

Нингидринная реакция. В качестве реактива для качественного и количественного определения аминокислот широко применяется нингидрин (трикетогидринденгидрат). При нагревании с аминокислотой нингидрин восстанавливается до ди-кетооксигидриндена, а аминокислота окисляется и распадается иа альдегид, двуокись углерода и аммиак [c.784]

Нингидринная реакция. В качестве специфического реактива на а-аминокислоты применяется нингидрин, или трикето-гидринден (см. том II). При нагревании с нингидрином аминокислота окисляется и распадается на альдегид, углекислоту и аммиак [c.674]

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

Положение аминокислот на бумаге можно обнаружить при помощи цветной реакции с нингидрином. Реакцию производят путем опрыскивания из пульверизатора высушенной [c.21]

Реакция обусловлена наличием в белке остатков а-амино-кислот. При взаимодействии с нингидрином а-аминокислоты окисляются и распадаются с образованием аммиака, альдегида и угольной кислоты. Нингидрин восстанавливается и конденсируется с другой частицей нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение мурексидного строения, окрашенное в синий цвет. Реакция может быть представлена в следующем виде [c.11]

Пептиды дают нингидринную реакцию, но в отличие от аминокислот, при этом не выделяется СО2. [c.504]

После установления условий проведении количественной нингидринной реакции Муру и Штейну удалось в 1948 г. разделить 2,5 мг гидролизата сывороточного альбумина быка с помощью распределительной хроматографии на колонке с крахмалом. Элюат был разделен на 4(Ю фракций, в каждой фракции проведена нингидринная реакция, и из интегральных кривых поглощения, соответствующих отдельным аминокислотам, рассчитывались их молярные доли в смеси. На коллег-современников большое впечатление произвели высокая скорость анализа (I нед), малое количество анализируемого вещества и малая погрешность ( 3%). [c.59]

Аминокислоты из ФТГ-производных обычно регенерируют действием гидроокиси бария [86] при 140° в течение 48 час (по другим данным [284], в течение 2 час) или 6 н. НС1 при 150° в течение 16 час [194]. Другие авторы [98, 275] предпочитают проводить регенерацию действием иодистого водорода при 140°. ФТГ-Производные желательно идентифицировать непосредственно, так как триптофан, аргинин, серии, треонин, цистеин и цистин разрушаются или лишь частично регенерируются из них кислотами и щелочами, причем при такой обработке образуются другие вещества, дающие положительную реакцию с нингидрином. Другие аминокислоты можно регенерировать количественно кислотами ([194], но см. также [108]) или щелочами [284]. [c.242]

Количественное определение аминокислот методом элюции и последующим фотоколориметрированием [105, 106]. С помощью этого метода можно определять в растворе или гидролизате белка 0,05—0,15 мкг аминокислоты. Метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного в результате реакции синего производного — дикетогидринделидендикетогидриндиамина (ДИДА) в стабильное производное меди оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. [c.117]

Работа 18. Реакция аминокислот с нингидрином [c.32]

Продукты реакции аминокислот с нингидрином экстрагируются органическими растворителями [128]. Это свойство используют для определения пролина в гидролизатах белков. Гидролизуют 1 г исследуемого белка кипячением с 1 мл 4 н. хлористоводородной кислоты в течение 15 ч, после чего раствор выпаривают досуха. Сухой остаток обрабатывают одновременно 4 мл 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 10%-ного раствора фосфорномолибденовой кислоты (для удаления пептонов) и фильтруют. Отбирают 0,5 мл фильтрата, вводят 0,5 мл 2%-ного водного раствора нингидрина и нагревают 10 мин при 100 °С. После охлаждения добавляют 50 мл воды и экстрагируют продукт реакции 10 мл изобутилового спирта в течение 3 мин. Верхний слой отделяют и измеряют оптическую плотность при 533 нм. [c.169]

Реакция с нингидрином. Большинство аминокислот реагирует с нингидрином, образуя СО , ННз и соответствующий альдегид н н [c.14]

Некоторые аминокислоты были определены по этой реакции в 1947 г., когда альдегиды фракционировали перегонкой с паром. Затем последовало ограниченное число разработок этого метода [4, 6, 7, 65], были также предприняты попытки сократить процедуру, проводя реакцию аминокислот с нингидрином в хроматографической колонке при повышенной температуре [148, 149]. В качестве декарбоксилирующих агентов использовали также дифенилметан и п-диметиламинобензальдегид, однако удалось получить выходы лишь от 40 до 80% [7, 33]. [c.89]

Цветная реакция с нингидрином. Альфа-аминокислоты дают с нингидрином цветное окрашивание от синего до фиолетово-красного цвета для разных аминокислот. Гидрат нингидрина имеет следующее строение [c.241]

Однако попытки использовать такие методы при определении аминокислот в пробах природных вод встретили серьезные затруднения не отделенные полностью нри концентрировании окрашенные органические вещества сильно мешают определению, маскируя образующуюся окраску пятна. Поэтому более целесообразным представляется проведение реакции непосредственно в растворе. С этой целью была изучена зависимость окраски, образующейся в результате реакции аминокислот с нингидрином в водном растворе, от соотношения реагентов, величины pH раствора, температуры и времени проведения реакции. Было найдено, что реакция (при низких концентрациях аминокислот) протекает тем полнее, чем выше концентрация аминокислот. [c.64]

В качестве детектора используют фотометр видимой области (А, = 440 и 570 нм), либо флуориметр. Разделенные аминокислоты переводят в производные, используя специальную гидравлическую схему, устанавливаемую между ионообменной колонкой и детектором. С помощью отдельного насоса подают раствор реагента (чаще всего нингидрина), который смешивается с элюатом. Полученная смесь поступает в реактор, который в простейшем случае представляет собой отрезок тефлонового капилляра. Объем реактора, его температура и расход раствора реагента подбирают таким образом, чтобы при минимальном размывании зон Лримерно за 1 мин реакция аминокислот с нингидрином произошла полностью. [c.329]

Большинство соединений не поглощает в видимой области спектра. Поэтому анализаторы снабжаются прибором, который вводит в поток элюата постоянное количество реагента, воспроизводимо реагирующего с анализируемым соединением. Продукты реакции обнаруживаются на различных длинах волн. Именно к этому типу детекторов относятся аминокислотные анализаторы, в которых в поток элюата вводят нингидрин. Большинство аминокислот дают с нингидрином окрашенные соединения спектры их поглощения показаны на рис. 8.19. Спектр поглощения продуктов реакции пролина отличается по положению максимума. При проведении количественного анализа боль- [c.68]

Следующая часть этого раздела посвящена оценке результатов. В процессе анализа аминокислот оценивается интенсивность окраски (обычно при 570 нм) продуктов реакции аминокислот с нингидрином. В начале элюирования самописец регистрирует только нулевую линию, которая может сдвигаться при изменении состава подвижной фазы. Если проводится количественный анализ, такие сдвиги следует учитывать. Интегратор обрабатывает сигнал детектора очень быстро (40— 2000 имп/с), в результате чего регистрируется прохождение даже одиночного компонента. В интеграторе можно предусмотреть автоматическую коррекцию нулевой линии, и он начнет интегрирование, только когда нулевая линия существенно изменится за несколько секунд. Некоторые управляющие элементы, которые ранее являлись частью анализатора, теперь функционально включены в интегратор. Чтобы результаты расчета были правильными, важно принять во внимание форму пиков. [c.75]

Новый метод анализа аминокислот быстро развивался. Появилась возможность с его помощью приступить к решению ряда сложных, казавшихся неразрешимыми проблем, и прежде всего проблёмы определения первичной структуры белков. Вскоре стало очевидным, что анализ аминокислот в его первоначальном варианте слишком трудоемок и недостаточно эффективен. Ввиду этого был поставлен ряд исследований по механизации трудоемких операций и совершенствованию организации эксперимента. Основной вклад в решение этих задач вновь внесла группа исследователей под руководством Мура и Стайна [4]. Благодаря проведению реакции аминокислот с нингидрином в проточном капиллярном реакторе и измерению интенсивности окраски на регистрирующем проточном фотометре трудоемкая обработка фракции была преобразована в непрерывный процесс. Таким образом, на основе аналитического метода был создан новый прибор — аминокислотный анализатор. Выпуск и дальнейшее усовершенствование этого прибора были предприняты промышленными фирмами. Последующие усилия были направлены на повышение эффективности и чувствительности анализа. Первое время причиной низкой эффективности прибора служила длительность элюирования. Основой для дальнейшей оптимизации процесса послужила теоретическая работа Гамильтона [5], в которой было показано, что повышения эффективности можно достигнуть путем увеличения скорости подачи элюента и уменьшения размеров зерен ионита. В результате многочисленных модификаций ионитов (а эта работа все еще продолжается) удалось более чем в 10 раз сократить время элюирования без снижения разрешения. Сокращение продолжительности анализа [c.306]

По скорости и эффективности хроматография аминокислот уже начала превосходить классические системы детектирования, и дальнейшее усовершенствование анализаторов продолжалось на основе более глубокого изучения кинетики реакции аминокислот с нингидрином и отработки конструкции реактора и колориметра [7, 16, 17]. В результате удалось еще более повысить разрешение и чувствительность анализа. Время одного анализа составляло уже менее 8 ч, и, следовательно, появилась возможность увеличить эффективность за счет круглосуточной работы прибора. Большинство операций уже осуществлялось в автоматическом режиме, однако для полной автоматизации необходимо было иметь блок ввода образцов (автосамплер). Первая модель устройства с одной петлей для ручного ввода образца уже была разработана [18], поэтому не составляло труда преобразовать ее в блок для автоматического ввода большого числа образцов. В дальнейшем для этих целей были созданы специальные патроны [19]. Теперь рабочая программа, заложенная в программирующее устройство, стала включать и управление автосамплером. Высокая эффективность прибора потребовала включения в систему интегратора или ЭВМ для автоматического обсчета результатов анализа. В последующих разделах дано описание неавтоматического базового анализатора и анализатора Te hni on, а затем совсем коротко приведены основные характеристики современных аминокислотных анализаторов. [c.316]

Метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного в результате реакции синего производного дикетогидринделиденди-кетогидриндиамина (ДИДА) в стабильное производное меди оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. [c.150]

Предлагаемый нами метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного производного дикетогидринделиденди-кетогидринамина (ДИДА) синего цвета в медное производное оранжево-красного цвета с максимумом поглощения 530 ммк. [c.150]

В книге достаточно детально рассмотрены основные преимущества и недостатки классического метода определения аминокислотного состава белков с помощью ионообменной хроматографии по Муру и Стейну даны указания относительно выбора ионообменников, подготовки реактивов и численной интерпретации результатов. Значительное место также уделено изложению принципов анализа аминокислот методом газожидкостной хроматографии. Применение этого метода, обладающего на 2—3 порядка большей чувствительностью по сравнению с нингидринной реакцией по Муру и Стейну, позволяет значительно снизить количества белка, требуемые для определения его состава. Анализ аминокислот с помощью газожидкостной хроматографии пока еще не находит широкого применения, однако имеющиеся в ли-Фературе данные позволяют считать этот метод весьма перспективным. Кроме того, обсуждаются возможности использования газожидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектромет-рией для определения состава и аминокислотной последовательности в пептидах. [c.4]

Весьма существенна зависимость интенсивности окраски раствора от времени проведения реакции, т. е. от времени нагревания. Графически эта зависимость представляет собой кривую с максимумом, характерную для консекутивной реакции, указывающую на то, что в данном случае одновременно протекают, по крайней мере, две реакции образование окрашенного соединения (ди-кетогидриндилидендикетогидринамина) и разрушение его с образованием неокрашенных продуктов. Интересно, что увеличение концентрации нингидрина в реакционной смеси, способствуя более полному протеканию первой реакции, в то же время ускоряет вторую, т. е. избыток нингидрина разрушает образующееся окрашенное соединение. Вследствие этого чувствительность реакции аминокислот с нингидрином в водном растворе сравнительно невелика. Таким способом можно определять аминокислоты в количествах 25—80 мкг и более в пробе (в пересчете на аминный азоту. Окраска раствора неустойчива и развивается довольно неравномерно. Более равномерное развитие окраски наблюдается при связывании образующегося в результате реакции аминокислот с нингидрином соединения в комплекс с ионами некоторых тяжелых металлов, например с ионами двувалентного кадмия. [c.64]

Сульфоксид 5-метил-Ь-цистеина, выделенный из репы. Моррис и Томпсон [33, 34], используя ионообменные смолы, выделили из листьев и корней репы соединение 4H9O3NS. Оно давало коричневато-синюю нингидринную реакцию и адсорбировалось на колонке смесью карбоната меди и окис.и алюминия. По отношению к ионообменным смолам это соединение вело себя как нейтральное и напоминало в этом отношении аминокислоту. При обработке соляной кислотой происходило отщепление аммиака, но соединение не содержало амидной группы, так как амиды не дают нингидринной реакции. Исследуемое соединение не поглощало водорода в при- [c.52]

В 1951 г. Дата и Харрис [114] опубликовали сообщение, в котором говорится, что моча кошек и оцелотов содержит вещество, дающее нингидринную реакцию. Это вещество было изучено Весталлем [115]. Было установлено, что на двухмерных хроматограммах на бумаге в системах фенол — аммиак и коллидин — лутидин оно перекрывается лейцином и изолейцином. Одномерным хроматографированием с использованием грет-б-утилового спирта удается получить индивидуальное пятно, которое после обработки перекисью водорода уже нельзя обнаружить на прежнем месте. Казалось вероятным, что имеют дело с новой аминокислотой, содержащей серу в таком случае исчезнование пятна объяснялось бы окислением этой аминокислоты до сульфоксида или, что более вероятно, до сульфона. В соответствии с этим было изучено поведение в аналогичных условиях ряда аминокислот. [c.79]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология