четный фаг

Один метод локализации со специфической физиологической активностью был позаимствован нз ПЭМ. Этот метод меток поверхности клетки, который, будучи применен к образцам для РЭМ, приводит к образованию на поверхности клетки морфологически различаемых или аналитически идентифицируемых структур. Такие методики в сочетании с растровой электронной микроскопией высокого разрешения позволяют изучать природу, распределение и динамические свойства антигенных и рецепторных состояний на поверхности клеткн. Методы нанесения меток на поверхность клетки в общем случае достаточно сложны и включают процедуры иммунохимической и биохимической очистки. Подробные ссылки на них можно найти в работах [359—361], но сущность методик состоит в следующем. Для крепления антител в определенных антигенных состояниях на поверхности клетки используются стандартные иммунологические процедуры. Хитрость состоит в том, чтобы модифицировать антитела таким образом, чтобы они также несли морфологически различимую метку, такую, как латексные шарики или сферы из двуокиси кремния, распознаваемый вирус, как, например, вирус табачной мозаики, или один из Т-четных фагов, как показано на рис. 11.18, илн белковая молекула известных размеров, как ферритин или гемоцианин. В работе [362] (рис. 11.19) использовались гранулы золота, которые имеют большой коэффициент вторичной электронной эмиссии. Одна часть антитела имеет средство для специфичного антигенного закрепления на поверхности клетки, в то время как другая часть несет морфологически различимые структуры. В настоящее время иммунологические методы достигли такого уровня, когда они не могут быть использованы для изучения как качественных, так и количественных характеристик поверхности клетки [363, 364]. [c.244]

Различия между вирусными геномами касаются не только формы молекул ДНК- У некоторых вирусов — пока это известно только для вирусов прокариот, т. е. для фагов,— в состав ДНК входят необычные и модифицированные основания. Классический пример ДНК Т-четных фагов вместо цитозина содержит 5-оксиметилцитозин (ОМЦ), причем к оксигруппе этого основания могут быть присоединены один или два остатка глюкозы (с образованием соответственно гликозил-ОМЦ и гентибиозил-ОМЦ). Геномы некоторых других фагов также содержат необычные основания. В большинстве случаев модифицированным оказывается пиримидин (тимин или цитозин). Ни одна из указанных модификаций не нарушает способности оснований вступать в стандартные уотсон-криковские взаимодействия. [c.262]

Защита собственного генетического материала с помощью системы рестрикции не всегда эффективна, о чем свидетельствует само существование бактериальных вирусов — бактериофагов. Оказывается, бактериофаги выработали разнообразные тактики борьбы с рестрикцией. Например, для сравнительно небольших фагов известны случаи, когда жесткий отбор на преодоление рестрикции привел к полному отсутствию сайтов узнавания рестриктазы хозяина на фаговой ДНК. Другой способ борьбы с рестрикцией используют некоторые крупные бактериофаги. В состав нх ДНК входит необычное основание, например в ДНК Т-четных фагов Е. соИ [c.132]

Несколько сходная организация генов обнаружена в Т четном фаге, в фаге. ТТ-и в других бактериофагах. [c.261]

Если репликативная форма ДНК фага X замкнута в кольцо, то ДНК зрелых частиц имеет, как известно, линейную форму. В отличие от линейной ДНК Т-четных фагов ДНК фага X при освобождении из вириона самопроизвольно образует либо кольца, либо линейные агрегаты . Это свидетельствует о том, что ДНК фага Я имеет липкие концы, соединяющиеся друг с другом за счет специфического спаривания оснований. Непосредственное определение нуклеотидной последовательности подтвердило это предположение. На рис. 15-23 показана [c.262]

Как происходит заражение бактерии Т-четным фагом Процесс начинается с присоединения нитей отростка к специфическим рецепторным участкам на поверхности бактерии. Это вызывает ряд конформационных изменений в нитях, базальной пластинке и чехле. При этом из базальной пластинки высвобождается лизоцим и разрушает стенку бактерии. Сокращение чехла начинается с базальной пластинки и далее распространяется к основанию. После того как стержень-проникнет в бактерию, ДНК быстро впрыскивается в клетку хозяина. [c.329]

Бактериофаг. В качестве примера бактериальных вирусов рассмотрим кратко Т-четные фаги со//. Существуют различные [c.365]

Точно так же, как Т2, выглядят фаги Т4 и Тб (Т-четные фаги). У фагов Т1 и Т5 хвост длиннее и тоньше, у фагов ТЗ и Т7 он, напротив, очень 10—690 [c.145]

Рис. 29. Ключевые ферменты, участвующие в образовании ДНК Т-четных фагов

Жизненный цикл типичного бактериофага показан на рис. 2.22. Е.соИ, являющаяся типичной клеткой-хозяином, может быть атакована по меньшей мере семью штаммами Т-фагов (от Т1 до Т7). Т-четный фаг (например, Т2-фаг) показан на рис. 2.19, и. 5 и 2.20. [c.36]

В 50-х годах с использованием современных методов исследования был проведен химический анализ высокоочищенных Т-четных фагов, который подтвердил основательность вывода Шлезингера, сделанного 20 лет назад, что ДНК и белок примерно в равных соотношениях составляют более 90% сухой массы частиц. Было найдено, что ДНК одной Т-четной частицы фага состоит из 2-10 пар оснований, что составляет примерно 6% генома клетки-хозяина Е. соИ. Химический анализ общего белка Т-четных фагов не дал никаких новых фактов по своему химическому составу он напоминает в какой-то мере общий белок Е. соИ. Фракционирование фагового белка показало, что он состоит по меньшей мере [c.256]

Фиг. 127. Детальная структура частицы Т-четного фага.

Пытаясь найти по возможности более простые системы для изучения синтеза ДНК, многие исследователи обратились к мелким ДНК-содержащим вирусам типа ФХ174 и М13. Они не обошли при этом вниманием бактериофаги, снабженные отростками фаги Я, Т7 и Т4, а также плазмиду колицина Е-1. Преимущество этих систем состоит в том, что для них легче смоделировать репликацию ДНК в клеточных экстрактах, а кроме того, ДНК вирусов и плазмид хорошо изучены с генетической точки зрения. Во многих случаях репликация зависит как от генов вируса, так и от генов клетки-хозяина. Так, например, мутации генов dnaB, D, Е, F и О приводят к потере способности поддерживать рост фага X точно так же, как и в случае, когда инактивированы /s-гены. Вместе с тем фаг X сохраняет способность к репликации в бактериях с мутантными генами А я С. Многие вирусы, в том числе Т-четные фаги, содержат гены, кодирующие синтез своих собственных специфических ДНК-полимераз и других белков, необходимых для репликации. [c.276]

В ДНК и РНК также присутствуют и другие основания, но в гораздо меньших количествах. В их число входят, например, 5-метилцитозин (ДНК некоторых растений и бактерий), 5-окси-метилцитозин (ДНК Т-четных фагов, бактериальных вирусов) и 4-тиоурацил (некоторые бактериальные тРНК). [c.106]

Как будет видно из дальнейшего, особое значение для механизмов репликации линейных молекул ДНК имеет структура их Концевых участков. У линейных ДНК-геномов не бывает невыразительных концов. Соответствующие участки (рис. 134) могут иметь прямые концевые повторы длиной от сотни и более (например, ДНК фага Т7) до тысяч (Т-четные фаги и др.) пар нуклеотидов. При этом если у фага Т7 все геномные молекулы ДНК идентичны, то молекулы ДНК Т-четных фагов существенно различны, даже Когда они образованы в одной клетке, зараженной единственной фаговой частицей геномы Т-четных фагов (и ряда других вирусов) характеризуются так называемыми кольцевыми перестановками. Еще один вариант концевой структуры вирионных ДНК-ДУПлек-сов — липкие (т. е. взаимно комплементарные) однонитевые концы. Длина которых обычно находится между 10 и 20 нуклеотидами (фаги Р2, Р4), но может укорачиваться до одного нуклеотида (герпес-вирусы), если в этом случае вообще позволительно называть такие Концы липкими . [c.261]

Большая часть наших знаний в области биохимической генетики была получена в результате исследования бактериофагов. Интенсивное изучение Т-четных фагов Т2, Т4 и Тб было начато еще в 1938 г. Максом Дельбруком и его сотрудниками. Хотя размеры исследованных ими вирусов малы, тем не менее оказалось, что они относятся к числу наиболее сложно устроенных из известных вирусов (дополнение 4-Д). Генетической информации, содержащейся в одной линейной молекуле ДНК, которая в случае фага Т4 содержит 2-10 пар оснований, достаточно для кодирования примерно 200 генов. Удалось установить положение 60 из этих генов на генетической карте. Ниже мы рассмотрим вкратце метод, при помощи которого это было сделано. [c.248]

Среди икосаэдрических вирусов, содержащих двухцепочечную ДНК, имеются так называемые паповавирусы, отдельные виды которых вызывают появление бородавок и даже злокачественных опухолей. Наиболее хорошо изучен биохимиками обезьяний вирус 40 (SV40), способный вызывать опухоли и у некоторых других видов. Еще одним опухолевым вирусом является вирус полиомы мыши. Несколько большие размеры имеют папилломавирусы один представитель этой группы вызывает появление бородавок у человека. Еще большие размеры (диаметр 70 нм) имеют аденовирусы из них 32 вида вызывают различные инфекционные заболевания у человека. Герпесвирусы — очень крупные вирусы, окруженные липидсодержащей мембраной, а самыми крупными из икосаэдрических вирусов являются вирусы, вызывающие полиэдрозы у насекомых. Один из них, поражающий мух Tipula, имеет диаметр 130 нм. Другой группой крупных ДНК-содержащих вирусов являются бактериофаги с отростками (к их числу относятся, в частности, Т-четные фаги дополнение 4-Д). [c.288]

Одним из наиболее интересных объектов, которые удается наблюдать под электронным микроскопом, являются Т-четные бактериофаги (Т2, Т4 и Тб), инфицирующие бактерии Е. со-Путь проникновения многих вирусов в клетку неизвестен, и Т-четные фаги являются редким исключением Эти частицы действуют как своего рода молекулярные шприцы , прокалывая клеточную стенку бактерий-хозяев и впрыскивая в них свою ДНК. Вирусная частица, длина которой 200 нм, а масса 255-10 дальтон, содержит в своей головке, имеющей форму вытянутого икосаэдра размером 100X70 нм, приблизительно 130-60 дальтон ДНК. Поверхность головки бак- [c.327]

В тех случаях, когда в состав смешанного биополимера входят единичные остатки моносахаридов, присоединенные к основной цепи неуглеводной природы, биосинтез такого рода соединений вполне аналогичен биосинтезу простых гликозидов (см. стр. 3S6) и сводится к переносу остатка моносахарида на полимерный агликон. Донорами гликозильных групп являются обычно нуклеозиддифосфатсахара. Показано, что такого рода реакции протекают при глюкозилировании оксиметилцитозинового ядра в составе ДНК Т-четных фагов и введении моносахаридных остатков в тейхоевые ки лoты [c.614]

Наиболее интенсивному изучению подвергались фаги (коли--фаги) серии Т, поражающие Е. oli [46, 49, 56—62, 77, 108—110, 151]. ДНК четных фагов кишечной палочки серии Т [Т2, Т4 и Тб] отличается тем (табл. 14), что вместо цитозина она содержит 5-оксиметилцитозин (5-0М1Д) [63]. Разные штаммы резко различаются по содержанию глюкозы, связанной гликозидной связью с оксиметильной группой 5-оксиметилцитозина (табл. 15) [64-66, 111]. [c.157]

Вытяжки из Е. oli, зараженной Т-четным фагом, содержат фермент дезоксицитидилатоксиметилазу, катализирующий образование 5-оксиметилдезоксицитидиловой кислоты из формальдегида и дезоксицитидиловой кислоты [88] в присутствии ТГФ (стр. 215). [c.181]

При заражении клеток Е. oli Т-четными фагами вся организация клеток изменяется таким образом, что в них продуцируется новая, фаговая ДНК, отличающаяся от ДНК хозяина тем, что она содержит оксиметилцитозин (ОМЦ) вместо цитозина (стр. 157). Такой поворот событий приводит к образованию в зараженной клетке новых (фиг. 75), весьма интересных ферментов [18, 58—65, 100]. [c.215]

Г. Известно, что при заражении Т-четными фагами индуцируется пять различных глюкозилтрансфераз. Они переносят глю-козные остатки от уридиндифосфатглюкозы на ОМЦ фаговой ДНК в соотношениях, приведенных в табл. 15. Глюкозилаза, найденная в клетках, зараженных фагом Т2, переносит глюкозные остатки на ОМЦ в а-конфигурации. После заражения фагом Т4 продуцируются две глюкозилтрансферазы одна добавляет глюкозильный остаток в ОМЦ в а-положении, а другая — в Р-конфигурации. [c.216]

При использовании для ренатурации деградированных препаратов ДНК наблюдаются заметные отличия в физических свойствах ренатурированных и исходных молекул Например, на электронных микрофотограммах ренатурированных молекул наблюдаются клубкообразные концы, тогда как середина молекулы имеет вид, характерный для двухспиральиых комплексов Односпиральные концы этих молекул могут образовывать двухспиральные участки с комплементарными односпиральными концами, в результате чего возникают агрегаты большого молекулярного веса Молекулы, отличающиеся от нативных, получаются также, по-видимому, при ренатурации денатурированной ДНК с циклическими перестановками, как, например, для ДНК Т-четных фагов. Здесь также возможно образование агрегатов, состоящих из большого числа молекул [c.274]

КОВ являются ферментами, необходимыми для производства клеткой веществ, требующихся для построеш1я фага. Например, так называемые Т-четные фаги (Tj, Т4, Т ) содержат оксиметнл-цитозин вместо цитозина. Синтез этого нового основания требует ряда новых ферментов (например, оксиметилазы цитозина), которые в нормальной клетке полностью отсутствуют. Кроме того, клетка должна синтезировать сами белки оболочки вируса. Таких белков в сложных бактериофагах имеется несколько. Во всяком случае бактериофаг, как и любой вирус, не может размножаться, если все необходимые белки не будут синтезированы. [c.499]

Благодаря тому что глюкозилирование существенно изменяет плавучую плотность ДНК, с помощью центрифугирования в градиенте плотности S2SO4 удалось проследить первые этапы репликации ДНК Т-четных фагов, а также гибридизации между ДНК фагов Т2, Т4 и Тб [6]. [c.204]

Ф И г. 5. Зависимость плавучей плотности нативных ДНК при 25° в градиентах S2SO4 (1) и s l (II) от нуклеотидного состава (Г + Ц) или (Г + ОМЦ) ( сплошные линии) и от соотношения ] люкоза/ОМЦ (для ДНК Т-четных фагов) (О пунктирные линии). [c.205]

Зависимость константы седиментации от скорости вращения ротора. Уже при первых попытках использовать метод седиментации границы раздела ддя исследования образцов ДНК с молекулярным весом выше 30 ООО ООО были отмечены аномалии, связанные со скоростью вращения ротора [75, 76]. В настоящее время артефакты скорости достаточно подробно изучены данные самого последнего времени свидетельствуют в пользу того, что эти артефакты возникают в результате конвекции и обратимого образования межмолекуляриых агрегатов [44, 46]. На практике этих артефактов можно избежать, если работать при скорости вращения ротора ниже 15 ООО об мин и концентрациях ниже 20 мкг мл. Используя ЭТИ предосторожности, различные авторы получили хорошо совпадающие значения констант седиментации для самых высокомолекулярных из изученных ДНК, а именно для ДНК Т-четных фагов [26, 45, 46]. При использовании обоих методов зонального центрифугирования артефакты скорости отмечены не были. [c.224]

Шлезингер не оставил после себя истинных продолжателей своего дела, и исследования фагов на современном уровне возобновились лишь в 1938 г., когда с вирусами бактерий начал работать Дельбрюк. Он возглавил новую школу исследователей фага. Многие из этих исследователей, подобно самому Дельбрюку, были физиками по образованию. За сравнительно короткий срок этой группе ученых удалось не только возглавить исследования фагов, но и оказать огромное влияние на зарождавшуюся в то время науку — молекулярную биологию. Одной из причин столь быстрых успехов послужило то, что в течение более 10 лет внимание большинства исследователей было сосредоточено на семи штаммах фага, паразитирующих на Е. соИ, в частности на Т-четных штаммах, Т2, Т4 и Тб. (В настоящее время известно, что фаг, с которым работал Шлезингер, принадлежит к группе Т-четных фагов фаг Т1, представитель группы Т-фагов, рассматривался в гл. 6 в связи со спонтанными мутациями Топ - TonJ.) [c.253]

Однако химический анализ фаговой ДНК дал весьма неожиданные результаты. Во-первых, было показано, что ДНК Т-четных фагов в отличие от всех других типов известных в то время ДНК не содержит цитозина. Вместо цитозина она содержит аналог цитозина, 5-окси метил цитозин (ОМЦ) (фиг. 128) и характеризуется следующим нуклеотидным составом [А] = 32%, [Т] = 33%, [Г] = 18% и [ОМЦ] = 17%. Следовательно, правило [А] == [Т] и 1Г] = [Ц], вытекающее из модели Уотсона — Крика, в ДНК Т-четр-ых фагов соблюдается при условии, что ОМЦ может образовывать те же три водородные связи с Г, что и Ц, замещая Ц в двойной спирали. Вследствие низкого содержания 1Г] + [ОМЦ], составляющего всего лишь ЗГ)%, ДНК Т-четного фага значительно отличается от [c.257]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология