Фосфолипиды разделение по классам

Разделение фосфолипидов на классы обычно осуществляют с помощью адсорбционной хроматографии на колонках с кремневой кислотой, силикагелем или тонкослойной хроматографией на силикагеле. В ряде случаев проводят предварительное разделение кислых и нейтральных фосфолипидов на колонках с модифицированными целлюлозами (ДЭАЭ- и ТЭАЭ-целлюлозы) [7, р. 272]. Для вымывания отдельных классов фосфолипидов при хроматографировании на колонке с кремневой кислотой преимущественно применяют смесь хлороформ—метанол с возрастающим количеством метилового спирта (4 1, 3 2, 1 4). При этом элюируются фосфолипиды в следующей последовательности фосфатидилэтаноламины, фосфоинозитиды, фосфатидилхолины, сфингомиелины. [c.189]

Биохимические методы позволяют разделять, выделять и анализировать в чистом виде липидные и белковые компоненты, изучать их физико-химические свойства в свободном состоянии и в составе надмолекулярных комплексов в условиях воздействия различных внешних факторов (температуры, концентрации водородных ионов и др.), исследовать их время жизни , пути биосинтеза и распада этих компонентов. К ним относят методы выделения (недеструктивные и включаюп] ие разрушение клеток) разделения субклеточных фрагментов (хроматография, электрофорез, центрифугирование, иммуноаффинные методы) идентификации и оценки чистоты субклеточных фракций выделения органелл и мембранных систем экстракции липидов и разделения их по классам количественного определения фосфолипидов исследования трансмембранного распределения липидов солюбилизации мембранных белков, их реконструкции и определения функциональной активности реконструированных мембран, выделения и модификации мембранных белков. [c.202]

Один из методов разделения фосфолипидов на классы основан на фракционированном осаждении из различных растворителей. Так, выделение кефалиновой и лецитиновой фракций проводится следующим образом [c.188]

Примененйе адсорбционной тонкослойной хроматографии позволяет раздёлить фосфолипиды (или другие соединения) на классы. При помощи обращенно-фазовой хроматографии можно разделить соединения внутри класса по числу углеродных атомов и степени ненасыщенности. Применение обращенно-фазовой хроматографии с Ионами серебра дает практически полное разделение смесей на индивидуальные компоненты. [c.6]

Минорные кислые фосфолипиды можно анализировать также методом ТСХ в менее полярных элюирующих системах, содержащих меньшие количества метанола и воды, например хлороформ — метанол —вода (40 10 1) [262, 263]. Система хлороформ — метанол — вода (65 25 4) и сходные с ней [212,. 253] подходят для разделения смеси нейтральных липидов с наиболее часто встречающимися фосфолипидами всех классов. В сочетании с пластинками силикагеля, приготовленными с силикатом магния (вместо сульфата кальция) в качестве связующего вещества, эта элюирующая система очень эффективна и широко используется при одномерной ТСХ в количественном анализе [262—264] и в препаративном варианте ТСХ [265, 266]. Она также применяется для ТСХ плазмалогеновых фосфолипидов [267, 268]. Эти фосфолипиды нестабильны в кислых растворителях и могут разлагаться при элюировании и упаривании. Методом ТСХ с использованием этой системы для элюирования можно разделить лизофосфатидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилхолин с фосфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламин с фосфатидилсерином, фосфатидилглицерин с кардиолипи-ном и фосфатидной кислотой, нейтральные липиды. Следует отметить, что в такой системе тиоэфирные аналоги фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина мигрируют намного бы- [c.152]

Несколько работ было опубликовано по разделению липидов на классы с помощью гель-хроматографии. В качестве адсорбента наиболее часто применялся сефадекс ЬН-20 [24]. Для этих же целей использовались метилированные сефадексы 0-25 и 0-50 [25]. Давенпорт [26] сообщил об удовлетворительном отделении фосфолипидов от нейтральных липидов в противоположность результатам, полученным ранее другими авторами [27]. Разделение, возможно, обусловлено образованием более крупных мицелл фосфолипидов в неполярных растворителях [28]. Кальдерон и Бауман [29, 30] описали разделение нейтральных [c.200]

Адсорбционная колоночная хроматография не всегда позволяет достичь полного разделения всех классов фосфолипидов. Однако ее успешно можно применять при выделении фосфолипидов определенного класса из смеси, где эти фосфолипиды преобладают, а также для очистки синтетических фосфолипидов. Нейтральные фосфолипиды эффективно разделяются на колонках с кремниевой кислотой [57]. При этом фосфатидилхолины элюируют смесью хлороформ — метанол (4 1), содержащей 1% воды, а сфингомиелин — смесью тех же компонентов, содержащей 1,5% воды. Для элюирования лизофосфатидилхоли-на и продуктов его окисления используют метанол с 2% воды. Колонки с кремниевой кислотой также можно применять для [c.147]

Сорбент. Различные классы фосфолипидов, сульфолипидов и гликолипидов фракционируют методом ХТС на силикагеле Н или силикагеле Г. Распределительная ХТС на мокром силикагеле Г приводит, согласно Шаль-варджану [И], к более четкому разделению, чем хроматография на высушенных и активированных слоях этого адсорбента. Добавка сульфата аммония позволяет также получить дезактивированные слои. Методом распределительной ХТС на одной пластинке можно разделить максимум 10 мг липидов, т. е. значительно меньше, чем методом адсорбционной хроматографии. [c.163]

Пригодные для липидов растворители выбирают, проводя хроматографическое разделение этих веществ при использовании нескольких полярных растворителей. Растворитель, который перемещает данный класс липидов вблизи фронта, следует применить в качестве элюирующего вещества (см. стр. 138). Для элюирования нейтральных липидов наиболее пригоден диэтиловый эфир, иногда с добавкой 10—20% метанола. Сильно полярные липиды имеют склонность образовывать трудно растворимые соли и комплексы с ионами кальция адсорбента, к которому в качестве связующего добавлен гипс. Однако, применяя специальные растворители, можно количественно элюировать и такие классы соединений, как, например, фосфолипиды [111]. Сильно полярные липиды чксто имеет смысл подвергнуть хроматографическому разделению в форме слабо полярных производных, которые элюируются затем без затруднений [80, 84]. [c.181]

Работа посвящена изучению фосфолипидов методом тонкослойной хроматографии. Содержится подробное описание техники этого метода, включая рекомендации по оформлению хроматограмм. Количественное определение веществ проводится путем денситометрии. Кроме фосфолипидов описанный метод может быть применен для разделения и других классов веществ. Книга рассчитана на биохимиков, бкофизикоБ, физиологов растений и животных, специалистов сельского хозяйства и медицины, а также аспирантов и студентов. [c.4]